活性氧激活的ERK1/2通路在化学性缺氧损伤PC12细胞中的作用

目的探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在化学性缺氧损伤PC12细胞中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型。应用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)比色法检测细胞存活率;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);流式细胞术检测凋亡细胞百分比;Western blot法测定caspase-3、ERK1/2和p38MAPK蛋白的表达水平。结果应用600μmol.L-1处理PC12细胞60 min可使磷酸化(p)ERK1/2的表达明显升高;在600μmol.L-1CoCl2处理PC12细胞前,应用500μmol.L-1N-乙酰半胱氨酸(NAC,为活性氧的清除剂)预处理1 h可抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用;在600μmol.L-1CoCl2处理PC12细胞前,应用10μmol.L-1U0126(ERK1/2抑制剂)预处理2 h可保护PC12细胞对抗CoCl2引起的损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数目和cleaved caspase-3表达及线粒体膜电位(MMP)丢失均减少;10μmol.L-1U0126预处理还能抑制CoCl2对p-p38MAPK表达的上调作用。此外,应用20μmol.L-1SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理能抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用。结论活性氧激活的ERK1/2通路介导CoCl2对PC12细胞的损伤作用,并与p38MAPK通路存在相互的的激活作用。

氧化修饰低密度脂蛋白的蛋白组份可引起巨噬细胞线粒体膜的损伤

采用ＡＣＡＳ５７０测定小鼠腹腔巨噬细胞线粒体膜电位，观察了氧化修饰低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对巨噬细胞线粒体膜的损伤及其不同组份（ｍｏｉｅｔｙ）在致损伤中的作用。结果显示Ｏｘ－ＬＤＬ可使巨噬细胞线位体膜产生损伤，用ＧＳＨＰｘ模拟物ｅｂｓｅｌｅｎ清除Ｏｘ－ＬＤＬ上的脂氢过氧化物（ＬＯＯＨ）可使损伤减轻２０％。单独的脂质组份虽然含有大量的ＬＯＯＨ，但对巨噬细胞线粒体膜电位无显著影响，而单独的蛋白组份则可引起线粒体膜电位下降，其降低程度与Ｏｘ－ＬＤＬ清除ＬＯＯＨ后的降低程度相当，说明Ｏｘ－ＬＤＬ清除ＬＯＯＨ后对线粒体膜的损伤可能是由修饰的载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）产生的。

旋覆代赭汤及其拆方对RE模型大鼠食管线粒体膜电位的影响

目的:观察旋覆代赭汤及其拆方组对反流性食管炎(RE)模型大鼠食管组织线粒体膜电位的影响,从能量代谢的角度研究其作用机制。方法:150只健康雄性Wistar大鼠随机分为10组,即模型对照组、正常对照组、旋覆代赭汤全方组、苦降组、西药组、甘升组、升降相因组、全方去苦降组、全方去甘升组、全方去升降相因组。制备酸碱混合反流性食管炎大鼠模型,前7天正常喂养,第8天开始,旋覆代赭汤全方组及拆方组分别给予对应药液灌胃,西药组给予莫沙必利+兰索拉唑,对照组(正常组+模型组)均给予生理盐水灌胃。实验大鼠处死后,观察食管下段黏膜组织形态学的变化,应用罗丹明123测定食管组织线粒体膜电位的表达情况。结果:1全方组、甘升组、全方去苦降组、升降相因组、西药组体重变化分别与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。2全方组、甘升组、全方去苦降组、升降相因组、西药组食管黏膜病理积分分别与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。3全方组、甘升组、全方去苦降组、升降相因组、西药组食管组织线粒体膜电位分别与模型组比较有显著升高(P<0.05)。4苦降组、全方去甘升组、全方去升降相因组体质量变化、食管黏膜病理积分、食管组织线粒体膜电位与模型组比较无明显差异。结论:旋覆代赭汤可以稳定RE大鼠食管组织线粒体膜电位,可能是该方改善RE大鼠食管括约肌松弛的作用机制之一。

依达拉奉对大鼠肝脏缺血再灌注时线粒体膜电位的影响

目的探讨依达拉奉对大鼠肝脏缺血再灌注时线粒体膜电位的影响。方法成年健康雄性sD大鼠30只，体重250—300g，采用随机数字表法，将其随机分为3组（n=10）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I／R组）及依达拉奉组（E组），I／R组和E组采用肝脏缺血60min进行再灌注的方法制备70％肝脏缺血再灌注损伤模型。E组于再灌注前15min静脉注射依达拉奉3mg／kg，I，R组给予等容量生理盐水。于再灌注2h时采集静脉血样，测定血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的活性；然后处死大鼠，取肝组织，测定肝细胞凋亡情况，计算肝细胞凋亡指数；制备肝组织单细胞悬液，测定线粒体膜电位；光镜下观察肝组织病理学结果。结果与S组比较，I／R组及E组血清ALT活性、AST活性和肝细胞凋亡指数升高，线粒体膜电位降低（P〈0．05或0．01）；与I／R组比较，E组血清ALT活性、AST活性和肝细胞凋亡指数降低，线粒体膜电位升高（P〈0．05）。E组肝组织病理学损伤轻于I／R组。结论依达拉奉可减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤，其机制与升高线粒体膜电位，抑制肝细胞凋亡有关。