小儿急性复杂性阑尾炎血清lncRNA-DANCR、miR-214-5p水平及其诊断价值

目的 分析血清长链非编码RNA(lncRNA)-分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)和miR-214-5p对小儿急性复杂性阑尾炎的诊断价值。方法 本研究选取2019年1月—2022年1月宝鸡市中医医院收治的急性阑尾炎患儿102例作为研究组,根据病理结果分为单纯性阑尾炎组和复杂性阑尾炎组,另选同期本院健康体检儿童50例作为对照组;实时荧光定量PCR检测血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p水平;采用全自动化学发光免疫分析仪检测C反应蛋白(CRP)以及降钙素原(PCT);Pearson法分析血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p以及二者与CRP、PCT的相关性;Logistic回归分析小儿急性复杂性阑尾炎的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA-DANCR、miR-214-5p、CRP和PCT水平对小儿急性复杂性阑尾炎的诊断价值。结果 复杂性阑尾炎组和单纯性阑尾炎组血清lncRNA-DANCR、CRP和PCT水平显著升高(P<0.05),复杂性阑尾炎组和单纯性阑尾炎组血清miR-214-5p显著降低(P<0.05)。Pearson相关性分析血清lncRNA-DANCR和miR-214-5p呈负相关(P<0.05),血清lncRNA-DANCR与CRP和PCT呈正相关(P<0.05),miR-214-5p与CRP和PCT呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,lncRNA-DANCR、CRP和PCT高表达和miR-214-5p低表达是影响小儿急性复杂性阑尾炎的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析四者联合优于lncRNA-DANCR和miR-214-5p各自单独诊断(Z_(联合vs. lncRNA-DANCR=2.647)、Z_(联合vs. miR-214-5p=4.256)、Z_(联合vs. CRP=3.245)、Z_(联合vs. PCT=3.267),均P<0.05)。结论 在急性复杂性阑尾炎患儿血清中lncRNA-DANCR高表达,miR-214-5p低表达,二者联合可诊断小儿急性复杂性阑尾炎。

肿瘤相关成纤维细胞中微小RNA-214-3p表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中微小RNA-214-3p(miR-214-3p)表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法选取64例卵巢癌患者作为研究对象,根据化疗后无进展生存期分为铂部分敏感组和铂敏感组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组患者卵巢癌组织中miR-214-3p相对表达量,比较不同临床特征患者的2年生存率;原代培养CAFs及正常卵巢成纤维细胞(NFs),采用qRT-PCR、免疫荧光实验检测CAFs和NFs中miR-214-3p、p62蛋白表达;通过CSIOVDB数据库检索SQSTM1基因在不同种类卵巢细胞中的表达水平;向CAFs瞬时转染miR-214-3p mimic(mimic组)和miR-214-3p mimic NC(NC组),将未转染CAFs设为对照组;留取各组细胞培养上清,建立卵巢癌细胞SKOV3与各组CAFs间接共培养模型,采用CCK-8法、DCFH-DA法、qRT-PCR及免疫印迹法分别检测不同培养条件下SKOV3细胞增殖率、顺铂半数抑制浓度(IC 50)、细胞活性氧(ROS)含量和miR-214-3p、顺铂耐药基因CCND1、自噬蛋白p62相对表达量。结果铂部分敏感组患者的miR-214-3p相对表达量低于铂敏感组,差异有统计学意义(P<0.01);不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、铂部分敏感情况、miR-214-3p低表达情况患者的2年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.01);卵巢CAFs中miR-214-3p相对表达量低于NFs,p62蛋白表达水平高于NFs,差异有统计学意义(P<0.01);CSIOVDB数据库在线分析显示,卵巢癌CAFs中的SQSTM1基因表达水平高于卵巢癌上皮细胞、NFs,差异有统计学意义(P<0.01);相较于与对照组CAFs、NC组CAFs间接共培养的SKOV3细胞,与mimic组CAFs间接共培养的SKOV3细胞的增殖率、顺铂IC 50、ROS含量降低,miR-214-3p相对表达量升高,CCND1mRNA和p62蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CAFs中miR-214-3p表达与卵巢癌细胞对顺铂的敏感性相关,CAFs中miR-214-3p低表达可促进卵巢癌细胞增殖及ROS介导的自噬,进而降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。

长链非编码RNA DNAJC3-AS1、微RNA-214-3p在结肠癌组织、结肠腺瘤性息肉中的表达水平及临床意义

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)DNAJC3-AS1、微RNA-214-3p(miR-214-3p)在结肠癌组织、结肠腺瘤性息肉中的表达水平及临床意义。方法 lnCAR数据库检索结肠癌组织、正常结肠组织中LncRNA DNAJC3-AS1表达情况;选取2016年5月至2019年1月北京市丰台中西医结合医院收治的86例结肠癌病人、53例结肠腺瘤性息肉病人为研究对象,收集结肠癌病人的结肠癌组织、对应癌旁组织及结肠腺瘤性息肉病人的结肠腺瘤性息肉,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定组织中lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平;分析结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平与结肠癌病人临床病理特征、预后关系;分析结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p相关性,生物信息学预测lncRNA DNAJC3-AS1与miR-214-3p的关系。结果 lnCAR数据库分析显示,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平(4.40±0.49)高于正常结肠组织(4.00±0.36)(P<0.05)。qRT-PCR检测显示,与结肠腺瘤性息肉(1.71±0.57、0.67±0.22)相比,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平(2.63±0.88)升高(P<0.05),miR-214-3p表达水平(0.31±0.10)降低(P<0.05);与癌旁组织(1.04±0.35、1.01±0.34)相比,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平升高(P<0.05),miR-214-3p表达水平降低(P<0.05)。结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平在不同分化程度、淋巴结转移、血管浸润、TNM分期方面,分布差异有统计学意义(P<0.05);结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p呈负相关(r=-0.58,P<0.05),且lncRNA DNAJC3-AS1与miR-214-3p存在结合位点;lncRNA DNAJC3-AS1高表达组29.75个月、miR-214-3p低表达组30.16个月结肠癌病人累积生存率低于lncRNA DNAJC3-AS1低表达组34.69个月、miR-214-3p高表达组34.37个月(P<0.05)。结论 癌旁组织、结肠腺瘤性息肉、结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达依次升高,miR-214-3p表达依次降低,且结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p、临床病理特征、预后有关。

微小RNA-214靶向调控PTEN对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制研究

目的:探讨微小RNA-214(miR-214)靶向调控第10号染色体丢失性磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化的影响及机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为miR-124 mimic组(转染miR-124 mimic)、miR-124 NC组(转染miR-124 NC)、pcDNA3.1-PTEN组(转染pcDNA3.1-PTEN)、miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组(转染miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN)。采用在线生信预测miR-124和PTEN靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因进行验证。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞miR-124和PTEN mRNA表达。采用CCK-8法检测细胞增殖。采用碱性磷酸酶活性测定检测细胞分化能力。采用茜素红染色和骨钙素水平测定检测细胞的矿化。采用Werstern blot检测PTEN、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、骨桥蛋白(OPN)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)水平。结果:与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组野生型PTEN的荧光素酶活性降低(均P<0.05)。与miR-124 NC组比较,miR-124 mimic组miR-124及p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平降低,而pcDNA3.1-PTEN组则相反(均P<0.05)。与miR-124 mimic组比较,miR-124 mimic+pcDNA3.1-PTEN组p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,PTEN mRNA和蛋白、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ和OPN蛋白、细胞矿化率和骨钙素水平升高(均P<0.05)。结论:miR-214通过靶向下调PTEN蛋白表达激活PI3K/AKT信号通路,从而调控成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化。

MicroRNA-214在胃癌血浆中的表达及对PTEN/AKT/Foxp3的影响

目的 明确microRNA-214在胃癌患者血浆中的表达,验证其成为胃癌血清学标志物的可能性;研究microRNA-214在胃癌免疫逃逸中的作用和相关机制。方法 收集47例初发胃癌患者及30例健康体检者血液标本,荧光定量PCR检测microRNA-214在胃癌患者与健康对照者中的表达差异,Pearson相关性分析研究microRNA-214在癌组织和血浆中表达水平的相关性;荧光定量PCR和免疫组化检测PTEN、AKT、Foxp3在胃癌组织和癌旁正常组织中mRNA和蛋白水平的表达差异,Pearson相关性分析PTEN、AKT、Foxp3基因与microRNA-214的相关性。结果 microRNA-214在胃癌患者血浆中表达上调,在癌组织与血浆中的表达明显呈正相关性(r=0.986,P<0.001);PTEN mRNA在癌组织中表达量降低,AKT mRNA和Foxp3 m RNA在癌组织中表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化显示PTEN在癌组织中弱阳性或阴性,在癌旁组织中呈阳性;AKT和Foxp3在癌组织中呈阳性,在癌旁组织中呈阴性;Pearson相关性分析结果显示microRNA-214与PTEN mRNA在癌组织中表达呈明显负相关性,与AKT、Foxp3 mRNA在癌组织中的表达呈明显正相关性,差异有统计学意义(P<0.05);结论 本实验证实了microRNA-214在胃癌患者血浆中的表达可以代表肿瘤组织中的水平,microRNA-214具有成为胃癌血清学标志物的潜力;发现microRNA-214可能对Foxp3的水平产生调控,在胃癌免疫逃逸中扮演一定角色。

lncRNA NEAT1降表达人喉鳞状细胞癌细胞增殖凋亡变化及与miR-214靶向关系

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)降表达的人喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞增殖凋亡变化,探讨其与微小RNA-214(miR-214)的靶向关系。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人永生化表皮细胞Hacat和人LSCC细胞系(FD-LSC-1、Hep-2、TU177)中lncRNA NEAT1、miR-214,选择TU177细胞为受试细胞。取对数生长期TU177细胞,分为甲、乙组,分别转染si-lncRNA NEAT1(敲低lncRNA NEAT1表达)、si-NC(乱序无意义序列),培养至24 h时采用CCK8法观察两组细胞增殖情况、采用平板克隆形成实验观察两组细胞克隆形成情况、采用流式细胞术观察两组细胞周期和细胞凋亡情况、采用RT-qPCR法检测两组细胞lncRNA NEAT1及miR-214。另取对数生长期TU177细胞,分为一二三四组,一组顺序转染WT-lncRNA NEAT1、miR-214 mimic,二组顺序转染WT-lncRNA NEAT1、miR-NC,三组顺序转染MUT-lncRNA NEAT1、miR-214 mimics,四组顺序转染MUT-lncRNA NEAT1、miR-NC。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1及miR-214的靶向关系。结果与乙组相比,培养24、48、72 h时甲组TU177细胞OD值低,培养14 d时甲组TU177细胞克隆形成数少,甲组TU177细胞G0/G1期细胞比例高、S期细胞比例低,细胞凋亡率高(P均<0.05);与乙组相比,转染24 h时甲组TU177细胞lncRNA NEAT1相对表达量低、miR-214相对表达量高(P均<0.05)。培养48 h时一、二、三、四组TU177细胞细胞荧光素酶活性分别为0.63±0.08、0.99±0.01、1.02±0.02、0.98±0.03,与二组相比,一组细胞荧光素酶活性低(P<0.05)。结论敲低lncRNA NEAT1表达可抑制TU177细胞的增殖和克隆,阻滞细胞周期于G0/G1期,并促进细胞的凋亡。TU177细胞中lncRNA NEAT1与miR-214靶向相关。lncRNA NEAT1可能通过与miR-214靶向结合,抑制TU177细胞的增殖克隆,阻滞细胞周期于G0/G1期,促进细胞的凋亡。

环状RNA丝氨酸/苏氨酸蛋白扰动样激酶1和微小RNA-214在缺血性脑卒中病人中的表达及意义

目的 探究环状RNA丝氨酸/苏氨酸蛋白扰动样激酶1(Circ TLK1)和微小RNA(miR)-214在缺血性脑卒中(IS)病人中的表达及意义。方法 选取2019年4月至2021年4月在广元市中心医院治疗的97例IS病人为观察组,根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将IS病人分为轻度组33例、中度组45例、重度组19例,另选取85例健康体检者为健康组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有病人血清Circ TLK1和miR-214水平。对IS病人进行90 d的预后随访,按照改良Rankin量表(mRS)分为预后良好组和预后不良组,分析并比较不同预后病人的临床指标。多因素logistic回归分析IS病人预后不良的影响因素。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析Circ TLK1和miR-214对IS病人预后的预测价值。结果与健康组相比,观察组血清Circ TLK1[(1.83±0.22)比(1.03±0.12)]和miR-214[(2.64±0.49)比(1.07±0.13)]均显著性上调(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组病人血清Circ TLK1和miR-214均显著性上调,与中度组相比,重度组病人血清Circ TLK1和miR-214水平显著上升(P<0.05)。观察组病人90 d预后随访结果显示,预后良好组病人63例,预后不良组病人34例。两组病人同型半胱氨酸(Hcy)、三酰甘油、梗死体积、发病到住院的时间、入院时NIHSS评分、Circ TLK1、miR-214水平之间差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,入院时NIHSS评分高、发病到住院的时间长、Circ TLK1、miR-214高水平是IS病人预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,Circ TLK1和miR-214对IS病人预后评估价值的曲线下面积(AUC)分别为0.86、0.83,灵敏度分别为91.20%、67.60%,特异度分别为74.60%、90.50%。结论 Circ TLK1和miR-214在IS病人血清中呈高表达,二者是IS病人预后不良的独立危险因素,对病人的预后具有一定的评估价值。

IS患者血清lncRNA PVT1、miR-214水平与继发性癫痫的相关性分析

目的 探讨缺血性脑卒中(IS)患者血清长链非编码RNA变异性浆细胞瘤异位1 (lncRNA PVT1)、微小RNA-214 (miR-214)水平与继发性癫痫的相关性。方法 选取2018年6月至2021年6月眉山心脑血管病医院神内八科收治的280例IS患者作为研究对象,根据患者1年内是否发生继发性癫痫,分为单纯IS组(212例)和继发性癫痫组(68例),根据癫痫的严重程度分为轻度癫痫组(19例),中度癫痫组(33例),重度癫痫组(16例)。另选取同时期来眉山心脏血管病医院神经八科体检的150例健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定所有受试者血清lncRNA PVT1、miR-214水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平;经Pearson法分析lncRNA PVT1与miR-214的相关性,及两者与IL-1 β、IL-6、TNF-α的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响IS患者是否发生继发性癫痫的有关因素。结果 与对照组比较,单纯IS组和继发性癫痫组患者血清lncRNAPVT1水平明显升高,血清miR-214水平明显降低(P<0.05);与单纯IS组比较,继发性癫痫组患者血清lncRNA PVT1水平明显升高,血清miR-214水平明显降低(P<0.05)。与轻度癫痫组比较,中度癫痫组和重度癫痫组患者血清lncRNA PVT1水平明显升高,血清miR-214水平明显降低(P<0.05);与中度癫痫组比较,重度癫痫组患者血清lncRNA PVT1水平明显升高,血清miR-214水平明显降低(P <0.05)。继发性癫痫组患者血清lncRNA PVT1与IL-1 β、IL-6、TNF-α均呈正相关(P <0.05),血清miR-214与IL-1 β、IL-6、TNF-α均呈负相关(P <0.05),血清lncRNA PVT1与miR-214水平也呈负相关(P <0.05)。多因素Logistic回归分析表明,IL-1 β、IL-6、TNF-α、lncRNA PVT1及miR-214均与IS患者继发性癫痫的发生有关(P <0.05)。结论lncRNA PVT1水平升高及miR-124水平降低与IS患者继发性癫痫的发生有关,可作为评估IS患者发生继发性癫痫的血清标志物。

MEF2C介导microRNA-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用

目的:研究微小RNA-214(mi R-214)对心肌细胞肥大的调控作用及其可能的作用靶基因。方法:建立血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6乳小鼠心室肌细胞肥大模型;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-214与潜在靶基因MEF2C 3’端非翻译区(3’UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测MEF2C及肥厚标志物的m RNA和蛋白表达水平。结果:心肌肥厚标志物ANP、ACTA1和β-MHC,以及mi R-214的表达在Ang-II诱导肥大的小鼠心肌细胞中显著增强;双萤光素酶报告基因实验提示mi R-214与MEF2C 3’UTR相互作用,证实mi R-214可在转录水平抑制MEF2C的表达,MEF2C蛋白水平在肥大的心肌细胞中显著上调;过表达mi R-214及沉默MEF2C均能一致性地抑制Ang-Ⅱ诱导的心肌细胞中肥大标志物的表达。结论:MEF2C是mi R-214的靶基因,并介导了mi R-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用。

microRNA-214在女性乳腺癌患者血清中的表达及临床意义

目的探讨microRNA-214（miR-214）在女性乳腺癌患者血清中的表达水平及其潜在的临床意义。方法提取35例乳腺癌术前患者、25例乳腺癌术后患者、25例良性乳腺肿瘤患者及25例健康女性血清中的总RNA,用实时荧光定量PCR检测血清miR-214的表达水平,并分析其与乳腺癌患者临床病理参数之间的关系。结果乳腺癌术前组血清miR-214的表达水平明显高于术后组（Z=-3.40,P〈0.01）、良性乳腺肿瘤组（Z=-2.33,P〈0.05）及健康对照组（Z=-4.72,P〈0.01）。miR-214在乳腺癌术前组中区别于健康个体中的ROC曲线下面积（AUCROC）为0.847（95%CI：0.744~0.950）,当cut off值为4.42时,敏感性与特异性分别为97.1%和96.0%。在乳腺癌术前组中miR-214的表达水平与淋巴结的转移（Z=-2.05,P〈0.05）及年龄（Z=2.85,P〈0.01）有关。结论 miR-214在乳腺癌患者血清中的表达水平升高,可能作为评估乳腺癌淋巴结转移的一项辅助指标。

依那普利对压力超负荷诱导的心肌纤维化的影响及microRNA-214的表达变化

目的探讨压力超负荷导致心肌纤维化过程中microRNA-214的表达变化,以及依那普利对心肌纤维化的影响。方法 80只雄性SD大鼠随机分为压力超负荷组(Model,n=40),假手术组(Sham,n=40)。其中各组再随机分为两个亚组:依那普利治疗组(n=20)与无依那普利治疗组(n=20)。行腹主动脉缩窄术建立心脏压力超负荷大鼠模型。4周后,酶联免疫分析法测定各组大鼠血清中的PICP、ICTP、MMP-2、TIMP-2等心肌纤维化指标,荧光实时定量PCR技术检测的microRNA-214表达变化。结果压力超负荷组大鼠的PICP为(161.3±16.3)ng/L、ICTP为(3.06±0.5)、PICP/ICTP比值为(51.1±7.3)、MMP-2为(2638.2±289.6)pg/mL、TIMP-2为(4396±365.9)ng/mL,上述指标与假手术相比,均有所增高,差异具有统计学意义(P均<0.05);模型组MMP-2/TIMP-2比值为(0.6±0.4),显著低于假手术组(P<0.05),依那普利处理亚组的大鼠PICP为(114.1±19.6)ng/L、ICTP为(2.5±0.7)ng/L、PICP/ICTP比值为(45.1±16.3)、MMP-2为(806.8±301.6)pg/mL、TIMP-2为(2052.6±322.3),均低于单纯压力超负荷组,异具有统计学意义(P均<0.05)。依那普利处理亚组MMP-2/TIMP-2比值为(0.88±0.3),显著高于单纯压力超负荷组,差异具有统计学意义(P均<0.05)。同时压力超负荷处理会导致microRNA-214的表达相对于假手术组增高(2.1±0.3)倍,依那普利处理可以缓解压力超负荷引起的microRNA-21过表达,但仍为假手术组的(1.5±0.2)倍。结论依那普利可以缓解压力超负荷造成的心肌纤维化,microRNA-214与此过程有关,可作为心肌纤维化的治疗靶点或标志物。

微小RNA-214对肝纤维化的影响

目的探讨miRNA-214对肝纤维化的影响及其可能的机制。方法通过腹腔注射CCl4构建小鼠肝纤维化模型,运用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscriotion-polymerasechainreaction,RT-PCR)法检测miR-214的表达情况。通过脂质体转染方式调控LX-2细胞miR-214的表达水平,采用CCK-8法、RT-PCR及划痕实验检测转染miR-214模拟物和miR-214抑制物后LX-2细胞增殖、活化及迁移能力的变化。通过蛋白质印迹法对数据库Targetscan预测的miR-214靶基因进行验证。结果模型组小鼠肝脏miR-214表达水平显著高于对照组(t=1.928,P=0.040)。LX-2细胞转染miR-214模拟物后,miR-214表达上调(t=3.872,P=0.001);LX-2细胞α-SMA、胶原ⅠαmRNA的表达水平上调(t=1.952,P=0.039;t=2.926,P=0.006),LX-2细胞增殖和迁移能力增强,数据库Targetscan预测的靶基因PTEN蛋白表达量下调。结论 miR-214参与HSC的活化、增殖及迁移,可促进肝纤维化的形成,miR-214可能是通过抑制PTEN的表达来影响HSC的生物学功能。

下调microRNA-214表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移及侵袭的影响

目的:探讨下调microRNA-214(miR-214)表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移和侵袭的作用及其可能机制。方法:采用脂质体介导法将miR-214抑制剂转染人卵巢癌SKOV-3细胞,Real-time PCR法检测miR-214、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uridylyl phosphate adenosine,u PA)基因mRNA的表达,Western blotting法检测细胞NF-κB和u PA蛋白表达。划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力。结果:经转染miR-214抑制剂后,人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达降低,细胞迁移和侵袭能力降低。同时NF-κB和u PA mRNA和蛋白表达也降低。结论:下调人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达可抑制细胞迁移和侵袭能力,下凋NF-κB和u PA基因表达可能是其作用机制。

血清微小RNA-221、微小RNA-214在帕金森病中的表达及其与帕金森综合评分的相关性研究

目的探究血清微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)和血清微小RNA-214(micro RNA-214,miR-214)在帕金森病(parkinson disease,PD)中的表达及其与帕金森综合评分量表(unified parkinson disease rating scale,UPDRS)评分的相关性。方法选取2016年7月至2019年7月海南省海口市第四人民医院收治的154例PD患者和120例同期健康体检者为研究对象,采集一般资料并检测血清miR-221和miR-214表达水平,比较两组各项指标差异,分析血清miR-221和miR-214表达水平与PD患者UPDRS评分和Hoehn-Yahr(H-Y)分期相关性,并研究两者对PD诊断的价值。结果PD患者血清miR-221和miR-214表达水平明显高于对照组(P<0.05);随着H-Y分期增加,血清miR-221和miR-214水平明显升高,各组间差异均有显著性(P<0.05);血清miR-221和miR-214表达水平与UPDRS评分和H-Y分期均有明显相关性(P<0.05);血清miR-221和miR-214用于PD诊断的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.896和0.910(P>0.05),且miR-221表达水平>28.61和miR-214表达水平>29.17时灵敏度分别为80.52%和68.83%,特异度分别为85.83%和97.50%,两者联合检测诊断灵敏度和特异度分别为89.61%和93.33%,AUC为0.967,较单独诊断明显升高(P<0.05)。结论PD患者血清miR-221和miR-214表达水平明显下调,且与患者UPDRS评分和H-Y分期具有明显相关性,两者对PD诊断均具有较高价值,且联合检测可进一步提升诊断准确率。

宫颈癌患者血浆miRNA-214的表达水平及其对宫颈癌细胞的影响

目的:探讨微小RNA-214(miRNA-214)在宫颈癌患者血浆中表达水平的差异及其对宫颈癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法:将2016年1月至2018年1月在中国科学院合肥肿瘤医院就诊、经宫颈活检病理确诊为宫颈浸润癌的50例患者作为宫颈癌组,同时选取相同年龄段体检健康者50例作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR法对两组血浆中的miRNA-214进行检测并比较。采用脂质体介导的转染方法将miRNA-214模拟物转染,CCK-8法检测宫颈癌细胞SiHa的增殖、细胞周期和凋亡。结果:血浆中miRNA-214的表达宫颈癌组与健康对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。用CCK-8法检测Si Ha发现,miRNA-214模拟物转染组细胞的生长速度明显慢于对照组,即miRNA-214对细胞生长速度有抑制作用,差异有统计学意义(P <0.05)。与宫颈癌对照组[转染miRNA-阴性(即miRNA-NC)]相比,宫颈癌转染miRNA-214组(脂质体转染miRNA-214模拟物)中,宫颈癌S期细胞比例明显降低,凋亡细胞比例明显升高(P <0.05),G2/M期细胞比例明显降低(P <0.05)。结论:宫颈癌患者血浆中miRNA-214表达下调,作为宫颈癌早期诊断分子标志物有一定准确性。miRNA-214可以抑制宫颈癌细胞SiHa进入S期,并且促进SiHa细胞凋亡,miRNA-214可能在宫颈癌的发生与发展中发挥着抑癌作用。

血浆微小RNA-214在冠状动脉疾病患者中的表达及临床意义

目的:探讨冠状动脉疾病(coronary artery disease,CAD)患者血浆微小RNA-214(microRNA-214,miR-214)水平特点,分析其与CAD患者发病时间和冠状动脉狭窄程度的相关性,为其成为新的CAD诊断标志物和药物靶提供依据。方法:选取13例急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者和27例健康志愿者进行对;22例CAD胸痛患者与8例非CAD胸痛患者进行对照;154例冠状动脉复杂病变的急性胸痛患者与92例无冠状动脉狭窄的急性胸痛患者进行对照测定所有患者循环miR-214的表达水平和血浆心肌肌钙蛋白I(concertation of cardiac troponin-I,cTnI)浓度,分析血浆miR-214与CAD发病时间、冠状动脉狭窄的严重程度和患者Gensini评分之间的关系。结果:miR-214在CAD患者的血浆中表达丰富。AMI患者在AMI发生后的早期血浆miR-214浓度显著增加,与健康对照比较差异有显著性(P<0.05),AMI患者的血浆miR-214水平和cTnI浓度呈正相关(r=0.596,P<0.05);血浆miR-214水平与单侧左前降支冠状动脉粥样硬化患者的冠状动脉狭窄严重程度呈正相关(r=0.554,P<0.05);miR-214水平与CAD患者Gensini评分呈正相关(r=0.480,P<0.001)。结论:循环miR-214可能是CAD的新生物标志物,也是潜在的诊断工具,并且miR-214水平升高可用于预测CAD患者冠状动脉病变的存在与严重程度。

血清肿瘤特异性生长因子、miRNA-214在肝癌中的表达及对肝动脉化疗栓塞术疗效的预测价值

目的研究原发性肝细胞肝癌(PHC)患者血清肿瘤特异性生长因子(TSGF)和微小RNA-214(miRNA-214)的表达情况及其对肝动脉化疗栓塞术(TACE)疗效的预测价值。方法将87例行TACE治疗的PHC患者根据TACE术后1个月疗效分为病情控制组(56例)和病情进展组(31例),比较两组患者TACE治疗前后TSGF水平及miRNA-214表达情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价TSGF、miRNA-214对TACE术后疗效的预测价值,并根据ROC的截断值分析治疗前TSGF、miRNA-214表达水平对患者3年生存期的影响。结果TACE治疗前,病情控制组与病情进展组患者TSGF、miRNA-214表达水平比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。TACE治疗后,两组患者TSGF表达水平均下降,miRNA-214表达水平均升高,且病情控制组患者TSGF表达水平低于病情进展组患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。TSGF、miRNA-214表达水平预测TACE术后病情控制的曲线下面积(AUC)分别为0.849(95%CI=0.759~0.938)、0.807(95%CI=0.707~0.907),Cut-off值分别为181.32 U/ml、0.63。低TSGF组患者的3年生存率为70.45%(31/44),高于高TSGF组的30.23%(13/43),差异有统计学意义(P=0.025);miRNA-214高表达组患者的3年生存率为61.70%(29/47),明显高于miRNA-214低表达组的的37.50%(15/40),差异有统计学意义(χ2=6.928,P=0.008)。结论PHC患者TACE术后TSGF水平降低,miRNA-214表达水平升高,治疗前血清TSGF、miRNA-214表达水平对TACE远期疗效具有较高的预测价值。

miRNA-214在软骨代谢中的作用

微小RNA(micro RNA,miRNA)在生命过程中起着重要作用,调控早期胚胎发育和细胞增殖分化与凋亡等。研究发现,miRNA-214在骨代谢过程中发挥重要作用,可增加骨吸收。软骨代谢与骨代谢之间具有一定联系,而miRNA-214在软骨代谢中的作用研究尚未见报道。本文查阅大量文献,从相关软骨细胞因子,如软骨合成-蛋白胶原(collagen,COL),软骨降解-基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP);炎性因子,如白介素(interleukin,IL)等分析miRNA-214与其的关系,进一步探讨miRNA-214在软骨代谢中起作用的可能性,为骨关节炎分子机制研究提供一定参考依据。

miR-214对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其机制

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞中微小RNA-214(miR-214)的表达对瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其机制。方法采用RT-qPCR法检测MM细胞株IM-9、U266、Lp-1、H929及人正常浆细胞中miR-214的表达。取U266细胞,随机分为miR-214 mimics组和mimics-NC组,分别转染miR-214 mimics和mimics-NC至两组U266细胞,RT-qPCR法检测转染后两组细胞miR-214的表达差异采用平板克隆形成实验、CCK-8实验、流式细胞术分别检测转染后两组细胞集落形成数目,24、48、72、96 h时OD值以及凋亡率和细胞周期占比的差异,Western blotting法检测转染后两组细胞中FOXM1蛋白表达差异。结果miR-214在IM-9、U266、Lp-1、H929细胞中的表达低于正常浆细胞(P均<0.05)。转染后,与mimics-NC组相比,miR-214 mimics组U266中miR-214表达升高(P<0.05),集落形成数目下降(P<0.05),24、48、72、96 h时OD值降低(P均<0.05),细胞凋亡率、细胞周期G_(0)/G_(1)占比明显升高(P均<0.05),S期和G_(2)/M期占比明显降低(P均<0.05),FOXM1蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论MM细胞中miR-214呈低表达,上调miR-214可抑制MM细胞增殖并促进其凋亡,细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期;其机制可能是通过抑制FOXM1基因表达实现的。

血清miR-214、miR-143在急性髓性白血病中的表达水平及与疾病复发的关系

目的探讨急性髓性白血病(AML)患者血清微小RNA(miR)-214、miR-143的表达水平,并分析二者与AML治疗后复发的关系。方法选取2019年1月—2021年4月四川大学华西医院血液内科治疗的AML患者94例作为研究对象(AML组),根据AML患者治疗后1年内是否复发分为AML缓解亚组60例和AML复发亚组34例,另选择同期医院健康体检者50例作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-214、miR-143表达水平;Spearman等级相关分析AML患者血清miR-214、miR-143表达与治疗后复发的关系,多因素Logistic回归分析AML患者复发的影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-214、miR-143水平预测AML患者治疗后复发的效能。结果AML组患者血清miR-214表达水平高于健康对照组,miR-143表达水平低于健康对照组(t/P=7.024/<0.001,7.191/<0.001);复发亚组AML患者血清miR-214表达水平高于缓解亚组,miR-143表达水平显著低于缓解亚组(t/P=2.940/0.004,6.596/<0.001);复发亚组AML患者WBC高于缓解亚组,Hb、PLT水平低于缓解亚组(t/P=3.788/<0.001,2.093/0.039,2.974/0.004);AML患者复发与血清miR-214表达呈正相关(r/P=0.584/<0.001),与血清miR-143表达呈负相关(r/P=-0.428/<0.001);多因素Logistic回归分析显示,WBC高、miR-214高为AML患者复发的危险因素[OR(95%CI)=1.647(1.062~2.555)、1.392(1.031~1.879)],Hb高、PLT高、miR-143高是其保护因素[OR(95%CI)=0.839(0.805~0.991)、0.714(0.514~0.992)、0.768(0.606~0.974)];ROC曲线分析显示,血清miR-214、miR-143及二者联合预测AML复发的曲线下面积为0.765、0.900、0.939,二者联合预测AML复发的效能优于单项指标预测(Z/P=3.318/0.002,2.342/0.019)。结论AML患者血清miR-214表达上调,miR-143表达下调,二者对预测AML患者复发具有较好的效能。