基于JAK/STAT3通路探讨补肾活血方改善单侧输尿管梗阻大鼠炎症和肾纤维化

目的:观察补肾活血方(BSHXF)对单侧输尿管梗阻大鼠(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾纤维化和炎症的治疗效果,揭示其抗炎及延缓肾纤维化的机制。方法:32只8周龄雌性SD大鼠根据随机数字表分为假手术组(Sham组)、单侧输尿管梗阻组(UUO组)、补肾活血方低剂量组(BSHXF-L组)和补肾活血方高剂量组(BSHXF-H组)。造模后第2天开始,连续灌胃干预21 d,BSHXF-L组和BSHXF-H组给予相应剂量补肾活血方汤剂,Sham组和UUO组给予与BSHXF组等体积的生理盐水。干预结束后,记录24 h尿量,全自动生化分析仪检测血肌酐、尿素氮、尿蛋白、尿肌酐和肾功能指数;采用HE和Masson染色检测肾脏病理损伤和纤维化程度;通过免疫组化染色分析各组TGF-β和TNF-α;Western blotting检测各组TGF-β_(1)、α-SMA、JAK、STAT3、p-STAT3、TNF-α、Caspase-3和Bax的蛋白表达情况。结果:与UUO模型组相比,BSHXF-L组和BSHXF-H组能明显明显改善UUO大鼠的肾功能,降低大鼠肾组织中TGF-β_(1)和α-SMA蛋白表达水平,抑制JAK、STAT3和p-STAT3表达,减少炎症细胞浸润和纤维组织以及胶原的增生,显著降低大鼠的肾脏指数和TNF-α等炎症指标。结论:补肾活血方可通过抑制JAK/STAT3通路激活,改善UUO大鼠肾功能,减轻其肾脏炎症水平、肾脏指数,延缓肾纤维化进程。

大鼠肾间质纤维化动物模型的实验研究

目的 观察单侧输尿管结扎 (UUO)大鼠模型中肾脏病理改变 ,肾组织α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)和纤维连接蛋白 (FN)表达的变化 ,证明UUO方法可快速制作理想的肾脏细胞转分化和间质纤维化动物模型。方法 大鼠随机分为假手术组 (SOR)和UUO组。随机选取各组中的 6只大鼠分别于单侧输尿管结扎术后 3天、 7天、 14天、 2 1天和 2 8天处死 ,收集血清与肾组织供生化及病理分析。结果 ① 2 4小时尿蛋白定量 ,UUO组与假手术组无统计学差异。UUO术后 7～ 14天 ,大鼠出现明显血尿素氮、肌酐值升高 ;术后 2 1～ 2 8天 ,血尿素氮、肌酐值反而下降 ,但 2 8天时血肌酐值仍然高于假手术组 (P <0 0 5 )。②UUO组肾小管间质损伤评分 (TIS)明显高于假手术组。UUO术后 3天 ,肾脏组织出现了早期纤维化的病理改变。随着梗阻时间延长 ,小管间质纤维化程度和间质细胞增殖、炎细胞浸润逐渐加重 ,皮质变薄十分明显。术后 2 8天 ,Masson染色见皮质区、皮髓交界处纤维化明显 ,但肾小球仍无明显病变。③免疫组化结果显示 ,UUO术后 3天肾间质α SMA阳性细胞数和FN表达增加 ,并随时间递增。UUO术后 7天 ,可见少许α SMA阳性的转分化小管上皮细胞 ;术后14天转分化的小管上皮细胞明显增多。α SMA表达与FN表达成正相关 (r=0 996 ,P

抗纤灵对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化基因与蛋白表达的影响

目的:利用基因芯片研究抗纤灵治疗肾小管间质纤维化的机理。方法:将18只SPF级SD大鼠中12只行unilateral ureteral occlusion(UUO)模型,随机分为模型组(UUOG)和抗纤灵组(KXLG),另外6只为假手术组。UUO和假手术组给予生理盐水灌胃;抗纤灵组给予抗纤灵灌胃。所有大鼠均在14天处死留取左肾组织。运用定制芯片检测基因变化结果。结果:与假手术组比较。UUO组TGF-β1、smad2、smad3基因显著上调,和假手术组比较上调超过1.5倍,P<0.01,Smad7基因显著下调,和假手术组比较下调超过1.5倍,P<0.01。而抗纤灵组TGF-β1、smad2、smad3基因显著下调,和UUO组比较下调超过1.5倍,P<0.01,Smad7基因显著上调,和UUO组比较上调超过1.5倍,P<0.01。结论:发现抗纤灵能显著降低组织内TGF-β1、Smad2、Smad3基因水平,免疫组化结果也表明抗纤灵能明显降低TGF-β1/Smads介导的基因转录活性。结果提示抗纤灵能抑制性调节TGF-β1/Smads信号通路,抑制肾纤维化的发生。

CHIP调节UUO再通大鼠肾组织TGF-β1/Smads信号通路的研究

目的:利用基因芯片研究Carboxyl terminus of Hsc70-interacting protein(CHIP)对肾间质纤维化TGF-β1/Smads信号通路的抑制性调节。方法:将18只SPF级SD大鼠中6只行unilateral ureteral occlusion(UUO)模型,6只植入弹性管脂肪垫加压梗阻,7天后再通定为reverse of unilateral ureteral occlusion(RUUO)组,6只UUO在7天处死留取左肾组织,另外6只为假手术组。6只RUUO大鼠在再通7天后处死,留取左侧肾组织,运用West-ern blotting检测肾组织CHIP的表达,免疫组化检测肾组织中α-SMA、CD68的阳性表达面积,定制芯片研究TGF-β1/Smads信号通路的基因变化。结果:UUO组TGF-β1、smad2、smad3、COL1a2、JunB基因显著上调,和假手术组比较上调超过1.5倍,肾组织中的α-SMA、CD68表达面积和假手术组比较有显著统计学意义P<0.01。而RUUO组CHIP表达量较UUO组更是显著增强P<0.01,TGF-β1、smad2、smad3、COL1a2、JunB基因显著下调,和UUO组比较下调超过1.5倍,肾组织中的α-SMA、CD68表达面积减小和UUO组比较有显著统计学意义P<0.01。结论:发现CHIP的过量表达能显著降低细胞内,TGF-β1、Smad2/3、COL1a2、JunB基因水平,Western blot结果也表明CHIP蛋白表达能明显降低Smads介导的基因转录活性,进一步的基因芯片结果显示CHIP蛋白能明显下调TGF-β1所诱导的下游基因JunB的表达。结果提示CHIP蛋白能抑制性调节TGF-β1/Smads信号通路,抑制肾纤维化。

抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻大鼠CTGF基因调控的影响

目的探讨抗纤灵冲剂防治肾间质纤维化可能的作用靶点及分子生物学机制。方法将72只SPF级SD大鼠中54只行经典单侧输尿管结扎,制备UUO大鼠模型,造模成功后分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦组。药物干预后分批于14d,21d,28d处死,留取左侧肾组织,运用PCR Array法,检测肾间质纤维化基因CTGF的阳性表达。结果各时间点模型组CTGF基因水平分别较假手术组上调7.12倍、8.26倍及6.55倍,均>2倍,具有非常显著差异。各时间点抗纤灵组CTGF基因表达分别比模型组下调1.79倍、1.63倍、1.63倍,下调均>1.5倍,具有明显差异。结论抗纤灵冲剂作用靶点及分子生物学机制之一是有效诱导CTGF基因表达下调而发挥抗肾间质纤维化效应。

CGRP对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎性因子表达的干预作用

目的探讨CGRP对小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响。方法选择雄性小鼠36只,建立小鼠UUO模型,前2 d治疗组和模型组分别每天给予CGRP 1.0 nmol·kg^(-1)·d^(-1)和同等量0.9%氯化钠溶液静脉注射。观察模型第14天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质α-SMA平滑肌肌动蛋白、肾间质巨噬细胞数,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及F4/80 mRNA的表达。结果 CGRP显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P<0.05);治疗组肾间质巨噬细胞数F4/80和肾间质α-SMA表达显著低于模型组(P<0.05);CGRP显著抑制MCP-1以及F4/80 mRNA的表达(P<0.05)。结论 CGRP减少小鼠UUO模型肾间质巨噬细胞浸润、降低MCP-1以及F4/80 mRNA表达、抑制α-SMA的表达,从而减轻肾间质纤维化。

姜黄素抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的:观察姜黄素(Curcumin)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾间质纤维化的拮抗作用。方法:30只雄性大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和姜黄素组,每组10只,术后第6天检测24 h尿蛋白定量,于术后7 d处死大鼠,留取梗阻侧肾组织,检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胱胺酸蛋白酶抑制剂C(Cystain C)、行Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组化染色检测肾间质Ⅰ型胶原(ColⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:与模型组相比较,姜黄素组Scr、BUN、Cystain C水平显著降低(P<0.05),肾间质纤维化相对面积显著减少(P<0.05),α-SMA及ColⅠ的表达明显降低(P<0.05)。结论:姜黄素可以减少输尿管梗阻后α-SMA及ColⅠ的表达,从而改善UUO所致的肾脏损伤,发挥其抗肾间质纤维化作用。

Wnt-7a蛋白通过wnt/β-catenin通路抑制单侧输尿管梗阻小鼠肾脏上皮细胞-间充质细胞转分化

目的:观察Wnt-7a蛋白对单侧输尿管梗阻模型小鼠肾脏纤维化的拮抗作用及其可能机制。方法:雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、UUO模型组和Wnt-7a蛋白治疗组,术后7 d行Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组化染色检测肾组织E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白的表达,免疫印迹法测定肾皮质中E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白及β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白质表达。结果:与模型组相比,治疗组肾组织间质纤维化相对面积显著减少,α-平滑肌肌动蛋白及波形蛋白的表达显著减少,E-钙黏素表达显著增多(P<0.05)。同时,治疗组肾组织中β-catenin表达较模型组显著减少(P<0.05)。结论:Wnt-7a蛋白可以抑制肾脏上皮细胞-间充质细胞转分化的发生而减轻肾脏纤维化,其可能是通过抑制经典的wnt/β-catenin通路。

PDGF-C、PDGF-D在大鼠肾间质纤维化过程中的作用

目的探讨血小板源性生长因子-C(PDGF-C)、血小板源性生长因子-D(PDGF-D)在大鼠肾间质纤维化模型中的表达及意义。方法将28只SD大鼠按照单侧输尿管梗阻(UUO)的方法建模,分别于造模后的3 d、1周、2周、3周分别将7只大鼠处死,取出两侧肾脏(未行手术侧的肾脏设为对照组)制作石蜡切片在光镜下观察。应用免疫组化(SABC)法检测模型大鼠肾组织中PDGF-C、PDGF-D的表达情况。结果对照组中PDGFC在肾小动脉的血管平滑肌细胞和肾小管上皮细胞中少量表达,PDGF-D主要在血管平滑肌细胞和肾小球系膜细胞表达。而模型组肾脏中PDGF-C、PDGF-D的表达显著上调,与对照组相比差异有统计学意义(P均<0.05),且肾间质及肾小管中PDGF-C、PDGF-D的表达强度与肾间质纤维化程度呈正相关(r=0.73,P<0.05;r=0.67,P<0.05)。结论 PDGF-C、PDGF-D均参与肾间质纤维化过程,并可能发挥着重要作用。

超声造影评估大鼠单侧上尿路梗阻肾灌注改变

目的探讨超声造影(CEUS)技术及定量分析方法评估单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾血流灌注改变的应用价值,为临床无创定量评价梗阻性肾病的血流灌注提供理论依据。方法 20只健康SD大鼠于麻醉下行左侧输尿管结扎术,建立UUO模型。分别于术前和术后7 d行CEUS检查,并于术后7 d CEUS检查后行相关病理检查。使用QLAB软件行双肾皮质血流灌注定量分析,并采用SPSS16.0统计软件分析时间-强度曲线(TIC)上升支斜率(A)、峰值强度(PI)、达峰时间(TTP)、受试者操作特征曲线下面积(AUC)。结果 UUO术后与术前比较,其TTP显著延长[(27.42±6.17)s∶(21.27±4.08)s,P<0.05],A[(0.88±0.79)dB/s∶(1.81±0.45)dB/s,P<0.05]及PI[(13.60±2.64)dB∶(16.50±1.36)dB,P<0.05]明显减低,AUC[(1 508.43±481.56)dB·s∶(1 309.40±306.93)dB·s,P<0.05]明显增高;健侧肾皮质TIC与术前比较,30 s之内相似,30 s后曲线下降缓慢,AUC明显增高[(1 311.50±406.14)dB·s∶(1 209.94±298.41)dB·s,P<0.05],A、PI和TTP无明显变化(P>0.05)。结论 CEUS及定量分析方法能反映UUO大鼠血流灌注状态的改变,为临床无创定量评价梗阻性肾病的血流灌注提供理论依据。

齐墩果酸、丹酚酸对UUO大鼠肾及肾小管功能的影响

目的观察抗行灵方的主要药用成分齐墩果酸和丹酚酸在单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾间质纤维化(RIF)过程中的作用及机制。方法健康雄性SPF级SD大鼠48只,随机分为4组,其中假手术组、UUP模型组、齐墩果酸组、丹酚酸组各12只。造模后第28日腹主动脉采血检测血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),收集24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量、取肾组织,HE染色比较各组肾小管间质损伤程度。结果在UUO模型中,丹酚酸和齐墩果酸在延缓实验大鼠肾功能衰竭中的功能和侧重各有不同,除假手术外各组大鼠肾功能出现失代偿,尿微量蛋白排泄增多,肾间质纤维化加重;与假手术组、模型组相比,齐墩果酸组SCr、NAG、24 h尿蛋白定量的水平显著降低;丹芬酸组BUN、NAG、α1-M、24 h尿蛋白定量的水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论丹酚酸及齐墩果酸单体均能够保护肾功能,降低血肌酐和尿素氮,并在一定程度上减少尿微量蛋白的排泄。

侧腰部二次手术法建立小鼠慢性肾脏病基础上急性肾损伤模型

目的通过侧腰部二次手术法建立小鼠慢性肾脏病基础上急性肾损伤(AKI)的动物模型,为进一步深入研究AKI病理生理机制、探索有效的防治方法构建研究工具。方法 8～12周龄的雄性C57BL/6小鼠3只作为正常对照,16只在麻醉状态下行左侧腰部单侧输尿管结扎术(UUO),48和96 h后各有8只再从双侧腰部行肾脏缺血40 min再灌注24 h手术,记为UUO 3 d+缺血再灌注(I/R)组和UUO5 d+I/R组。自动生化仪苦味酸法检测血清肌酐水平,左侧肾脏组织石蜡包埋,切成4μm厚切片,行苏木精-伊红及Masson染色观察,并进行急性小管损伤评分和纤维组织半定量分析。结果 UUO 3 d+I/R组、UUO 5 d+I/R组血清肌酐水平明显高于对照组[(197±47)、(186±26)μmol/L比(54±10)μmol/L],肾脏小管急性损伤评分明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。苏木精-伊红染色显示肾脏间质大量炎症细胞浸润、管腔扩张、充斥管型,刷状缘消失、小管上皮细胞空泡变性、坏死脱落等急性小管损伤,并存皮质变薄、小管萎缩、上皮细胞扁平、间质增宽等慢性病变。Masson染色可见UUO 3 d+I/R组、UUO5 d+I/R组小鼠肾脏间质纤维基质增多。结论小鼠侧腰部UUO后再行I/R二次手术法可建立慢性肾脏病基础上AKI的模型。

兔慢性肾功能衰竭模型的建立与评价

目的建立兔慢性肾功能衰竭模型,为干细胞移植治疗和相关研究奠定基础。方法普通级大耳白兔随机分为正常对照组和单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)组。UUO组于输尿管结扎后2、4、6、8周进行血生化肾功能指标检测,并取肾组织观察肾脏病理学改变,通过SPECT动态观察肾小球滤过率的变化,采用免疫组织化学方法观察肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果①UUO组术后第2周,出现明显的血肌酐升高,尿素氮术后第8周开始升高(P<0.01)。②UUO组术后第4周,肾脏组织出现了早期间质纤维化的病理改变,术后第8周肾小球开始出现硬化,间质纤维化明显,皮质明显变薄。术后第12周,肾小球硬化比例增加,肾小管玻璃样变性,间质纤维化进一步加重(P<0.05)。③SPECT动态观察肾小球滤过率,UUO组第4周GFR值比正常对照组降低,到第8周时,GFR值进一步下降,结扎侧肾脏功能降低甚至丧失。④免疫组织化学染色显示,TGF-β1在术后第4、8、12周均明显增强,并且各时间点表达均有显著差异(P<0.05)。结论单侧输尿管结扎法成功制作比较稳定的慢性肾功能不全模型,UUO后第8周符合肾脏间质纤维化模型标准。

肾间质纤维化过程中HA/CD44表达变化

目的:观察肾间质纤维化过程中透明质酸(hyaluronic acid,HA)/CD44的表达变化及其与肾间质纤维化的关系。方法:单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)复制小鼠肾间质纤维化模型,同时设假手术组。模型小鼠分别设手术后1周、2周、3周共3个时间观察组,同时设假手术组。检测小鼠血清肌酐、尿素氮水平,HE染色观察肾脏炎症,q Fibrosis分析胶原沉积,ELISA检测肾组织HA的含量,q-PCR分析透明质酸合成酶2(hyaluronic acid synthetase,HAS2)mRNA表达,免疫组化观察肾组织HA受体CD44表达,并进行以上指标相关性分析。结果:与假手术组相比,1周模型小鼠血清肌酐出现一过性升高,随着模型时间延长,逐渐接近正常水平;模型各时间点血清尿素氮水平无明显变化。q Fibrosis结果显示,假手术组胶原面积为(0.53±0.12)%;随着模型时间延长,胶原沉积逐渐增加,1周~3周胶原面积分别为(3.35±0.43)%、(5.87±0.71)%、(9.78±1.35)%;ELISA与q-PCR结果显示,随着肾间质纤维化进展,肾组织HA与HAS2表达均逐渐增加,3 w模型组HA与HAS的表达量分别为假手术组的7.2倍与23.8倍。免疫组化染色显示,随着纤维化发展,CD44阳染细胞数量逐渐增多,1周~3周CD44阳染面积分别为(3.50±0.91)%、(5.60±0.90)%、(14.12±2.31)%。结论:CD44分子主要表达于肾小管上皮细胞,随肾间质纤维化发展,肾组织HA、HAS2及CD44表达逐渐增加,与肾间质纤维化形成呈正相关关系。

二甲双胍对单侧输尿管梗阻小鼠肾脏纤维化的影响及其作用机制

目的探讨二甲双胍对单侧输尿管梗阻(UUO)诱导的小鼠肾脏纤维化的影响及其作用机制。方法选取30只C57BL/6小鼠,分为假手术组(仅分离左侧输尿管但不结扎,n=10)、UUO组(单侧输尿管结扎术法建立UUO小鼠模型,n=10)、二甲双胍组[单侧输尿管结扎术法建立UUO小鼠模型,造模前1 d开始二甲双胍灌胃,200 mg/(kg·d),连续7 d;n=10]。HE染色检测3组肾组织形态变化;Masson染色测定3组肾间质纤维化情况;免疫组化检测3组肾组织中YAP1、TGF-β1和CD68的表达;免疫荧光检测3组肾组织中F4/80的表达;Western blotting检测YAP1、p-YAP、LATs1、TEAD的表达。结果与假手术组比较,UUO组尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶增加,肾间质纤维化程度增加,CD68、F4/80、TGF-β1、YAP1、TEAD表达增高,而p-YAP、LATs1的表达下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与UUO组比较,二甲双胍组尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶下降,肾间质纤维化程度减轻,CD68、F4/80、TGF-β1、YAP1、TEAD表达减少,而p-YAP、LATs1的表达增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论UUO诱导的肾脏纤维化激活肾组织中Hippo/YAP通路,上调CD68、F4/80、TGF-β1蛋白表达水平促进肾纤维化,引起肾结构及功能异常;二甲双胍可能通过干预Hippo/YAP通路改善UUO诱导的小鼠肾脏结构及功能的损伤。

健脾清化方对单侧输尿管梗阻模型大鼠P38MAPK信号通路的影响

目的:观察健脾清化方对单侧输尿管梗阻模型大鼠P38MAPK的影响,并探讨其作用机制。方法:SD雄性大鼠90只,随机分为假手术组,模型组,西药组和中药组,行UUO术制备单侧输尿管模型,并于术后7、14、21d处死大鼠。生化法检测大鼠血肌酐、尿素氮;HE、Masson染色观察肾脏病理形态;WB测肾组织p38、p-p38、TGF-β1蛋白表达;免疫组化法观察肾组织p38蛋白阳性面积率。结果:与正常组比较,模型组SCr、BUN含量、p38、p-p38、TGF-β1表达、p38阳性面积率均升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较:氯沙坦钾组和健脾清化方组SCr、BUN含量、p38、p-p38、TGF-β1蛋白表达、p38阳性面积率均降低(P<0.01,P<0.05)。HE、Masson示模型组肾小管明显扩张,肾盂肾盏明显扩张。结论:健脾清化方能改善单侧输尿管梗阻模型大鼠的肾脏病理改变,对肾脏损害有一定的保护作用,其机制可能与其能下调SCr、BUN的含量、p38、p-p38、TGF-β1的蛋白表达有关。

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯通过抑制核因子-κB信号通路改善UUO模型大鼠肾纤维化

目的探讨核因子抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对核因子-κB(NF-κB)P65、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响及对肾纤维化的作用。方法取60只SD成年大鼠,随机分为假手术组、模型对照组、早干预组和晚干预组。除假手术组,各组大鼠建立单侧输尿管结扎(UUO)模型,早干预组先给予PDTC 2 d,第3天开始建模。晚干预组建模开始后第2天给予PDTC。假手术组和模型对照组分别在建模开始后第2天给予等量蒸馏水。建模后第7、14、21天检测各组大鼠24 h尿蛋白定量及肾功能,检测血清NF-κB P65、TGF-β1水平的表达,Masson染色观察肾纤维化情况。结果在相同时间条件下,假手术组、模型对照组、早干预组、晚干预组24 h尿蛋白定量差异均无统计学意义(P均>0.05)。建模后第7、14、21天,与假手术组相比,模型对照组、早干预组、晚干预组血清肌酐、尿素氮、NF-κB P65、TGF-β1水平均升高(P均<0.05);与模型对照组相比,早干预组、晚干预组大鼠血清肌酐、尿素氮、NF-κB P65、TGF-β1水平均下降(P均<0.05)。建模后第21天,假手术组大鼠肾间质染色较少;模型对照组大鼠肾小管结构破坏明显,间质染色明显增多,有大量胶原形成;与模型对照组相比,早干预组和晚干预组大鼠肾间质纤维化程度有所减轻。结论 NF-κB抑制剂PDTC可通过抑制NF-κB P65表达减缓肾纤维化过程,减轻肾功能损伤情况。

改良构建大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化模型

背景:传统的大鼠单侧输尿管梗阻手术方法,可以在较短的时间内(一两周)导致动物梗阻侧肾脏发生肾间质纤维化,但具有术后并发症较多、死亡率较高的缺点。目的:优化并改良大鼠单侧输尿管梗阻手术操作,降低动物术后的并发症发生率,提高存活率,检测改良单侧输尿管梗阻方法建模大鼠的病理生理指标,为功能药理学基础研究提供背景数据支持。方法:①取20只雄性SD大鼠,随机分为4组,分别进行传统单侧输尿管梗阻方法结扎、改良单侧输尿管梗阻方法结扎、不游离输尿管结扎、开腹腔但不结扎输尿管(假手术组)操作,术后14 d时比较组间大鼠肾间质纤维化成模率、死亡率、术后并发症发生率的差异;②另取28只SD大鼠,雌雄各半,随机分为改良组与假手术组,采用尿液分析、血细胞分析、血液生化分析方法,检测两组大鼠的生理指标,并通过苏木精-伊红染色与Masson染色法,观察改良组大鼠术后14,21 d时的肾脏组织病理学结果。结果与结论:①与不游离输尿管结扎组大鼠相比,传统单侧输尿管梗阻组和改良单侧输尿管梗阻组大鼠的成模率高;②在单侧输尿管梗阻手术操作过程中,采用输尿管中段双结扎、中间不剪断的改良方法与传统方法相比,操作更简便易行,手术开创更小,肾间质纤维化成模快、成模率较高,动物术后死亡率与并发症发生率均低;③改良组与假手术组相比,术后14 d时的尿素氮、谷草转氨酶、白蛋白等血液生化指标差异有显著性意义(P<0.05),其梗阻侧肾脏的组织病理切片苏木精-伊红染色与Masson染色结果均可见典型的肾间质纤维化病理特征。

基于促炎因子探讨益肾通络方对单侧输尿管结扎大鼠肾功能的干预作用

目的:从促炎因子角度探讨益肾通络方对单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾功能的改善作用。方法:将30只雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、UUO模型组、贝那普利组和益肾通络方组,每组6只。正常组、假手术组及UUO模型组大鼠每日予10mL/kg蒸馏水灌胃,贝那普利组每日予盐酸贝那普利片1.0mg/kg灌胃,益肾通络方组每日予益肾通络方14.6g/kg灌胃,各组连续给药干预4周。用ELISA法测定各组大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和α1-微球蛋白的表达水平,用生化仪测定血清中尿素氮、肌酐、尿酸、24h尿蛋白定量的含量。结果:与UUO模型组比较,益肾通络方组各项数值均显著降低(P<0.05),益肾通络方组在尿素氮、肌酐、尿酸、α1-微球蛋白和24h尿蛋白定量方面较贝那普利组降低更显著(P<0.05),且对MCP-1的改善作用优于贝那普利组(P<0.05)。结论:益肾通络方可通过下调促炎因子缓解局部炎症反应、改善肾功能和延缓肾病进程.

丹酚酸B,C分子药对配伍对UUO大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制

目的:研究丹酚酸B,C分子药对配伍对单侧输尿管梗阻(UUO)所致的肾间质纤维化大鼠的保护作用和机制。方法:采用50只健康雄性SD大鼠随机分为5组,即正常组、模型组、丹酚酸B组(12.5 mg·kg-1)、丹酚酸C组(12.5 mg·kg-1)、丹酚酸B,C按1∶1配伍组(简称:丹酚酸B+C组,其中B和C各6.25 mg·kg-1)。除正常组外,其余大鼠均造成UUO模型。造模后第2天各组开始ig给予相应药物治疗14 d。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测尿β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG),N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG)的含量,免疫组化法检测肾组织内Ⅰ型胶原(ColⅠ),Ⅲ型胶原(ColⅢ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:1各组大鼠肾小管功能测定结果,与正常组比较,模型组尿β2-MG,NAG蛋白水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组尿β2-MG,NAG水平显著降低(P<0.05)。2免疫组化检测结果,与正常组比较,模型组ColⅠ,ColⅢ,α-SMA平均吸光度A显著升高(P<0.05);与模型组比较,丹酚酸B,B+C组ColⅠ,ColⅢ及各治疗组α-SMA平均吸光度A显著降低(P<0.05);各治疗组比较,丹酚酸B,B+C组ColⅠ的A显著低于丹酚酸C组(P<0.05),丹酚酸B+C组ColⅢ,α-SMA A显著低于丹酚酸C组(P<0.05)。结论:丹酚酸B,C分子药对配伍对肾间质纤维化大鼠肾脏具有保护作用,可一定程度的改善肾小管功能,降低尿β2-MG,NAG,并在一定程度上减少ColⅠ,ColⅢ和α-SMA的表达,从而延缓慢性肾脏病的进展。