Assignments of ~1H and ^(13)C NMR Signals of Mogroside Ⅳa

Aim To investigate the structure of mogroside Ⅳa isolated from traditionalChinese medicine fructus mo-mordicae [fruits of Siraitia grosvenori (Swingle) C. Jeffery] andsummarize the NMR characteristics of the structure. Methods Common extraction, separation andpurification methods were used. Various NMR techniques including ~1H NMR, ^(13)C NMR, DEPT, ~1H-~1HCOSY, HSQC, HMBC, NOESY and molecular model simulated by computer were used to elucidate thestructure. Results ~1H and ^(13)C NMR signals of mogroside Ⅳa were assigned, and spectroscopicbasis was obtained for identification of such type of compounds. Conclusion 1D and 2D NMR techniquesincluding ~1H-~1H COSY, HSQC, HMBC, NOESY spectra are powerful tools for structure analysis. Thestructure determined by NMR methods is identical with energy minimized conformation simulated bycomputer.

载脂蛋白E基因多态性及其与Ⅳ型高脂血症的关系

目的 探讨载脂蛋白apoE的基因多态性,并寻求其多态性是否与Ⅳ型高脂血症有关联。方法 采用多聚酶链反应 限制性片段长度多态性(PCR RFLP)法,对2 0 6例Ⅳ型高脂血症患者(HTG组) ,2 5 0例正常对照者进行基因分型,同时用全自动生化仪测定其血脂和血apoE水平,最后对其作分组比较。结果 人群中存在有6种apoE基因型,分别为E2 / 2、E2 / 3、E3 / 3、E3 / 4、E2 / 4、E4/ 4。E2 / 2为91bp、83bp、61bp ;E3 / 3为91bp、61bp、48bp、3 5bp ;E4/ 4为72bp、61bp、48bp、3 5bp ;E2 / 3为91bp、83bp、61bp、48bp、3 5bp ;E2 / 4为91bp、83bp、72bp、61bp、48bp、3 5bp ;E3 / 4为91bp、72bp、61bp、48bp、3 5bp。E3 / 3型是人群中分布最多的一种基因型,HTG组与正常对照组均以E3 / 3基因型为主,其频率分别为72 .8%和65 .7%。ApoE的基因型和等位基因频率在Ⅳ型高脂血症患者和正常人之间存在差异,Ⅳ型高脂血症患者组等位基因ε2较正常对照组有所增高,分别为7.4%和16.4%(P <0 .0 1)。同时研究还表明携带有等位基因ε2的Ⅳ型高脂血症患者的血清TG(2 .5 8±1.98)、apoE(67.1±3 0 .1)水平较含有等位基因ε3、ε4者高(P <0 .0 1) ,血清LDLC(3 .11±0 .80 )水平则较其他两组低(P <0 .0 1) 。

E-cad、LN、ColⅣ和PCNA与乳腺癌浸润转移的关系

目的探讨细胞黏附分子钙黏蛋白(E-cad)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达与乳腺癌的关系。方法采用免疫组织化学技术对80例乳腺癌E-cad、LN、ColⅣ和PCNA的表达进行检测。结果 E-cad低表达率与乳腺癌组织类型、分化程度、临床分期、转移及生存期短显著相关(P<0.01);基底膜缺损程度在分化低、临床Ⅲ～Ⅳ期、有转移及生存期<5年的乳腺癌组,显著高于分化高、临床Ⅰ～Ⅱ期、无转移及生存期≥5年组(P<0.01),而PCNA的表达在前组中显著增高(P<0.01)。结论 E-cad、LN、ColⅣ和PCNA的表达可作为临床判断乳腺癌浸润转移及预后的重要指标。

直肠癌根治术患者手术前后血清VEGF、PGE2、COLⅣ表达水平变化及其临床意义

目的 探讨直肠癌根治术患者手术前后血清血管内皮生长因子(VEGF)、前列腺素E2(PGE2)、Ⅳ胶原(COLⅣ)表达水平变化及其临床意义。方法 选取2012年1月至2014年6月湖北省郧西县人民医院收治的70例直肠癌患者,于术前术后采用双抗体夹心ELISA法检测VEGF、PGE2、COLⅣ水平,并选取同期我院70例健康体检者,亦以双抗体夹心ELISA法检测VEGF、PGE2、COLⅣ水平。结果 直肠癌组术前及术后血清VEGF、PGE2、COLⅣ水平均明显高于对照组(P<0.05)。与术前比较,直肠癌组术后血清VEGF、PGE2、COLⅣ水平均明显降低(P<0.05)。直肠癌患者术前血清VEGF、PGE2、COLⅣ水平与Duckes分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、肿瘤最大径等有关(P<0.05)。复发组较未复发组术前血清VEGF、PGE2、COLⅣ水平均明显增高(P<0.05);死亡组较生存组术前血清VEGF、PGE2、COLⅣ水平均明显增高(P<0.05)。结论 直肠癌患者血清VEGF、PGE2、COLⅣ水平较高,检测直肠癌患者手术前后血清VEGF、PGE2、COLⅣ对手术疗效评估、预后判断有一定临床意义。

大肠杆菌吸附某工业废水中Pt（Ⅳ）、Pd（Ⅱ）的研究

为了对云南某厂废水中的铂族金属Pt（Ⅳ）、Pd（Ⅱ）进行吸附回收，将大肠杆菌E.coli做为吸附剂，探讨其在较适工艺条件下的吸附率，并结合Pt（Ⅳ）、Pd（Ⅱ）的纯溶液吸附来探索E.coli对废水中铂族金属的吸附特性。Pt（Ⅳ）、Pd（Ⅱ）纯溶液吸附实验表明，E.coli对两者吸附能力相当，吸附率分别为96.66%、97.68%？而在工业废水中，E.coli对Pt（Ⅳ）的吸附率仅为19.5%，Pd（Ⅱ）的吸附率仍有97.20%。用SPSS软件对工业废水吸附结果进行显著性分析，综合吸附量、吸附率，可认为废水中存在的大量贱金属对 Pd（Ⅱ）的吸附没有产生影响，E.coli 对 Pd（Ⅱ）表现除了较高的恒择吸附性？双相Pt（Ⅳ）-Pd（Ⅱ）溶液吸附实验也表现出了相似的结果。可见在Pt（Ⅳ）-Pd（Ⅱ）共存的溶液中，E.coli对Pd（Ⅱ）具有较高恒择吸附性。

参虎半夏汤提高ⅢB-Ⅳ期胃癌化疗疗效及部分机制研究

目的:评价参虎半夏汤联合CF/DCF方案治疗胃癌患者的临床疗效,探讨其相关作用机制。方法:选取2012年3月至2014年2月期间河南省中医院收治的气虚毒蕴型ⅢB-Ⅳ期胃癌病患者66例,随机分成观察组(参虎半夏汤联合化疗)和对照组(化疗),每组33例。观察2组临床症状、E-cadherin、波形蛋白Vimentin浓度等临床检测指标的变化。结果:治疗后较治疗前比较:观察组的KPS评分、生活症状积分、生存期、肿瘤大小及E-cadherin表达均高于对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01);中医症状积分、波形蛋白Vimentin蛋白的表达均低于对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:参虎半夏汤可能通过诱导E-cadherin表达,抑制波形蛋白Vimentin表达,抑制肿瘤细胞侵袭浸润,减小瘤体,进而改善气虚毒蕴型ⅢB-Ⅳ期胃癌患者的预后。

肾小球硬化大鼠肾脏组织载脂蛋白E的表达及作用

目的探讨载脂蛋白E(apoE)在肾小球硬化(GS)大鼠肾脏组织中的表达及作用。方法 80只雄性8周龄Wistar大鼠随机分组为假手术组和模型组,每组40只。采用左侧肾切除加1周后尾静脉注射阿霉素(5 mg/kg)的方案建立大鼠GS模型。于造模后第9周末和第13周末,每组各处死20只大鼠,取右侧肾组织作肾脏病理学检查并计算肾小球硬化指数(GSI),免疫组织化学法检测肾组织Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)和apoE蛋白表达,用RT-PCR检测肾脏组织apoE mRNA表达。结果 (1)与假手术组比较,模型组大鼠各时间点:①病理学检查显示,GSI指数显著增高(P<0.01);病程越长,GSI越高。②肾脏组织Col-Ⅳ和FN蛋白表达均显著增高(P<0.01);病程越长,表达越高。③肾脏组织apoE蛋白及其mRNA表达显著增加(P<0.01);病程越长,表达越高;(2)相关性分析:模型组大鼠肾脏组织apoE蛋白表达与GSI、Col-Ⅳ和FN蛋白表达均呈显著正相关(r=0.911、0.935、0.906,P<0.01)。结论 GS大鼠的肾脏组织apoE蛋白及其mRNA表达均显著增高,病程越长,表达越高,肾小球硬化的程度越重。apoE可能参与了GS的发生发展。

吡格列酮对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β_1及Ⅳ型胶原表达的作用

目的 探讨噻唑烷二酮类药吡格列酮对糖尿病 (DM )大鼠肾脏中转化生长因子 β1(TGF β1)及Ⅳ型胶原 (CⅣ)蛋白表达的作用。 方法 5 4只SD大鼠分为正常对照组 (NC组 ) ;糖尿病组 (DM组 ) :链脲佐菌素 70mg/kg腹腔注射 ;吡格列酮治疗组 (DP组 ) :吡格列酮 2 0mg·kg-1·d-1灌胃。检测各组第 2、4、8周的尿白蛋白排泄率 (UAER)及肾脏肥大指数 ,免疫组化观察肾皮质内TGF β1和CⅣ 表达水平。 结果 DM组及DP组TGF β1及CⅣ 表达显著高于NC组 (P <0 0 1) ,DP组TGF β1低于DM组 ,在第 4周差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,DP组CⅣ 亦低于DM组 ,在第 4、8周时差异均有显著意义 (P <0 0 5 )。DP组的UAER、肾脏肥大指数 ,在各时段均略低于DM组 ,但未达到统计学意义。 结论 DM大鼠肾脏中TGF β1及CⅣ 表达增加 ,吡格列酮可能通过下调TGF β1,减少CⅣ 细胞外基质合成增加 。

黄芪甲苷Ⅳ通过激活Nrf-2/HO-1信号通路抑制氧化应激介导的人SY5Y细胞凋亡

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ(AST4)对H_(2)O_(2)诱导的人SY5Y细胞氧化应激损伤以及细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养SY5Y细胞,用H_(2)O_(2)诱导建立氧化应激模型,分为PBS组、H_(2)O_(2)模型组和ASTⅣ组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡。取各组细胞的上清液,比色法测定丙二醛(MAD)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量。免疫荧光细胞化学染色法检测裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)和核因子E2相关因子(Nrf-2)的表达和分布。Western blot法检测细胞凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)和ccaspase,以及氧化应激信号通路Nrf-2在胞质内和细胞核内的表达及下游蛋白血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白水平。结果AST4对处于氧化应激损伤状态下的SY5Y细胞具有保护作用,能够减少MAD含量,增加GSH和SOD的含量。AST4增加Bcl2表达,减少BAX表达,Bc12/BAX的比值与H_(2)O_(2)模型组相比显著升高,同时抑制c-caspase的表达。AST4促进Nrf-2核转位,增加下游抗氧化蛋白HO-1的表达。结论AST4可通过激活Nrf-2/HO-1信号通路,促进Nrf-2核转位,增加HO-1的表达,调节氧化/抗氧化平衡,提高机体抗氧化水平,保护细胞免受氧化损伤和减少细胞凋亡。

实验感染HEV IV型后恒河猴HEVRNA及抗HEVIgM(IgG)动态变化研究

目的观察实验感染HEV(HepatitisEVirus)IV型后恒河猴HEVRNA及抗HEV-IgM(IgG)的动态变化,探索HEVIV型感染的规律。方法用逆转录PCR检测实验动物接种前后血清及粪便HEVR-NA,用酶联免疫法(ELISA)检测血清抗HEV-IgM及抗HEV-IgG,并同步观察其血生化及肝脏组织学的变化。结果感染后的恒河猴均发生了典型的急性肝炎,血清HEVRNA首先呈现阳性,相继出现谷丙转氨酶(ALT)升高、抗HEV-IgM阳性及抗HEV-IgG阳性。结论中国恒河猴是HEVIV型感染的较好的动物模型,检验资料为阐明HEVIV型感染的规律提供了证据。

维生素E的交流示波极谱法测定

在 1mol/LKCl- 3mol/LHCl- 1mol/LH2 SO4 -无水乙醇 ( 0 .0 5∶1.5∶0 .1∶15V/V )混合溶剂中 ,以Ce(Ⅳ )与维生素E之间的氧化还原反应为基础 ,用Ce(Ⅳ )直接滴定维生素E ,在交流示波极谱图上 ,以Ce(Ⅳ )切口的出现指示滴定终点 ,从而测定VE。此法简单易行 ,且灵敏准确 ,终点直观。

E-cadherin对人大肠癌细胞株浸润行为的影响

目的研究上皮性钙调蛋白(E-cad)对人大肠癌细胞株浸润行为及Ⅳ型胶原酶(Ⅳcol)表达的影响。方法定量检测体外培养的人大肠癌细胞 E-cad 及Ⅳcol 的表达;应用人羊膜浸润模型,观察 E-cad 对大肠癌细胞浸润羊膜时的形态变化及细胞内Ⅳcol 表达的影响。结果低转移细胞株 HT29弱表达 E-cad,而高转移细胞株 LoVo几乎不表达 E-cad。两细胞株均表达Ⅳcol,高转移细胞株 LoVo 表达Ⅳcol 高于低转移株 HT29。瘤细胞用 E-cad单抗封闭后培养于羊膜上,两细胞株内Ⅳ型胶原酶表达明显增高,且以高转移株变化更为明显。结论 E-cad 可能通过细胞内信使传递作用影响细胞内Ⅳ型胶原酶的表达,从而对肿瘤影响浸润.

大同煤田鹅Ⅳ精查勘探区煤层稳定性评价

大同煤田为一双纪煤田,下部为石炭—二叠纪含煤岩组,上部为侏罗系含煤岩组;鹅Ⅳ精查勘探区位于大同煤田中部东南边缘地带,主要以石炭—二叠纪煤组为目标层,该区煤层赋存层数多,受岩浆岩活动影响较大;在充分收集利用20世纪50年代以来施工的49个钻孔成果资料及最近几年施工的19个钻孔资料,利用《煤矿地质工作规定》中第十二条中煤层稳定性划分标准,通过数据统计运算分析,对区内各可采煤层稳定程度通过定性及定量评价进行研究分析对比,最终确定主要可采煤层的稳定程度。其中,山4、2、3、4(3-4)、5号煤层为较稳定煤层;8号煤层为稳定煤层。研究结果对勘探区煤层稳定程度评价具有重要意义。

中药联合前列腺素E1治疗糖尿病肾病的疗效

笔者应用中药联合前列腺素E1治疗Ⅳ期糖尿病肾病（DN）患者，现报道如下。 资料与方法 病例资料：将40例在我院住院的DN患者随机分成2组，治疗组20例，男12例、女8例、年龄（58±11）岁、平均病程（7．8±2．9）年；对照组20例，男11例、女9例、年龄（57±9）岁、平均病程（8．0±3．4）年。

黄芪甲苷Ⅳ对去氧神经鞘氨醇导致肾脏细胞损伤的作用

目的建立去氧神经鞘氨醇(doxSA)诱导的肾脏细胞损伤模型,探讨黄芪甲苷Ⅳ(AST)通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)通路对doxSA造成肾脏细胞损伤的作用。方法对HK-2细胞进行培养,将培养的细胞通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测活性后,根据是否加入doxSA和AST随机分为对照(Cont)组、doxSA组、doxSA+AST组、AST组。各组干预给药结束后,用CellTiter-Glo■2.0试剂盒测量肾脏上皮细胞三磷酸腺苷(ATP)含量;用免疫荧光法检测线粒体活性和形态;聚合酶链反应(PCR)检测血红素氧化酶1(HO-1)和NAD(P)H脱氢酶醌1(NQO1)的mRNA水平;细胞转染测肾脏上皮细胞的氧化应激。用方差分析评估各组差异是否有统计学意义。结果在62.5μg·mL^(-1)浓度下,doxSA有明显的肾脏细胞损害作用,后续实验使用62.5μg·mL^(-1)的doxSA处理HK-2细胞建立doxSA。Cont组、doxSA组、doxSA+AST组和AST组的ATP含量(百分数)分别为(100.00±2.21)%、(44.06±3.61)%、(64.51±4.20)%和(100.00±14.21)%,4组不同处理方式的ATP含量差异有统计学意义,F=38.718,P<0.001。线粒体功能及形态检测显示,doxSA对细胞的毒副作用主要来自于线粒体损伤,表现为线粒体活性降低和数目减少。AST干预可以恢复受损线粒体的活性和形态,对线粒体有保护作用。细胞氧化应激水平检测结果显示,与Cont组相比,doxSA组的热力值更高,说明细胞氧化应激明显;与doxSA组相比,doxSA+AST组的热力值变低,表明AST干预显著降低细胞氧化应激水平。doxSA组肾脏上皮细胞Nrf2下游基因HO-1和NQO1 mRNA表达量分别为0.47±0.03和0.34±0.01,较正常Cont组的0.98±0.07和0.96±0.12降低50%以上(P<0.001),AST干预后细胞HO-1和NQO1 mRNA表达值分别为1.37±0.16和1.72±0.12,较doxSA组的0.47±0.03和0.34±0.01升高,差异有统计学意义(P=0.019),表明AST干预后细胞Nrf2通路被激活。结论AST增加HO-1、NQO1的表达和线粒体活性,发挥抗氧化作用,AST通过Nrf2通路介导的抗氧化途径激活,发挥肾脏保护作用。

家族性高甘油三酯血症家族谱分析

通过观察一例家族性高甘油三酯血症家族 19个成员血清状态 ,测定血清总胆固醇、甘油三酯和载脂蛋白AⅠ、AⅣ、B10 0及E ,发现此家族中双亲和兄弟姐妹中多人见有Ⅳ型高脂蛋白血症 ,血清呈混浊状 ,血清甘油三酯含量显著增高 ,胆固醇含量正常 ,高密度脂蛋白胆固醇含量降低。虽然载脂蛋白AⅠ、AⅣ和B10 0无明显变化 ,但载脂蛋白E含量明显增高 ,血清甘油三酯浓度与载脂蛋白E浓度呈正相关。从而认为载脂蛋白E代谢障碍可能是这例高甘油三酯血症家族发病的主要原因。

LC-MS/MS法同时测定艾司奥美拉唑钠原料药及其制剂中3种杂质的含量

目的:建立同时测定艾司奥美拉唑钠原料药及其制剂中杂质E、杂质Ⅰ和杂质Ⅳ含量的方法。方法:采用液相色谱-串联质谱法。色谱柱为Agela VenusiL MP C18,流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.2 mL/min,柱温为35℃,进样量为1μL;离子源为电喷雾离子源,检测方式为负离子模式,工作模式为多反应监测模式,用于定量分析的离子对分别为m/z 360.1→194.0(杂质E)、m/z 375.8→210.7(杂质Ⅰ)、m/z 330.2→312.1(杂质Ⅳ)。结果:杂质E、杂质Ⅰ、杂质Ⅳ检测质量浓度的线性范围分别为0.001 26～0.044 80μg/mL(r=0.994 7)、0.001 34～0.045 2μg/mL(r=0.992 8)、0.018 9～1.260 00μg/mL(r=0.991 4);定量限分别为0.001 26、0.001 34、0.018 9μg/mL,检测限分别为0.000 41、0.000 44、0.006 3μg/mL;精密度、重复性试验的RSD均小于4%,稳定性试验杂质E、杂质Ⅰ的RSD<10%(n=5),杂质Ⅳ的RSD>15%(n=7);加样回收率分别为87.69%～100.72%(RSD=4.29%,n=9)、90.04%～100.63%(RSD=3.67%,n=9)、93.58%～101.86%(RSD=2.66%,n=9)。结论:该方法准确、快速、灵敏、专属性强,可用于同时测定艾司奥美拉唑钠原料药及其制剂中3种杂质的含量。

Ⅳ型高脂血症患者高密度脂蛋白亚类组成与载脂蛋白E基因多态性关系的研究

目的探讨型高脂血症患者载脂蛋白E基因多态性与HDL亚类组成的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性和双向电泳-免疫印迹检测法,分析103例型高脂血症患者和146名血脂正常者的apoE基因型、HDL各亚类组成及相对含量。结果型高脂血症组和对照组apoE基因型及等位基因频率分布均以E3/3和ε3最高。型高脂血症患者中等位基因ε2携带者血清HDL-C、apoE、apoE/C、HDL2a较等位基因ε3、ε4携带者升高,而TG/HDL-C、apoC则下降,等位基因ε2携带者HDL3c较等位基因ε3携带者降低,其差异有统计学意义(P<0.05)。对照组中等位基因ε2携带者血清TG、apoE、apoE/C较等位基因ε3和ε4携带者升高,等位基因ε2携带者HDL3a较等位基因ε3携带者降低,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论型高脂血症患者apoEε2等位基因与血清HDL亚类的成熟代谢有关。

大肠杆菌topA-菌株中质粒pBR322的超凝集结构

超凝集DNA是质粒DNA的一种特殊拓扑结构形式,最初在大肠杆菌SD108(topA+gyrB225)细胞中被发现.现在大肠杆菌DM800(topA-gyrB225)细胞中也发现了这种结构,这说明超凝集DNA的形成与细胞内旋转酶活性降低有直接关系,而与拓扑异构酶Ⅰ的存在与否无关.体外实验的结果显示,具有很强的正超螺旋松弛活性的拓扑异构酶Ⅳ可以将超凝集DNA完全松弛,这也证明质粒DNA的超凝集结构与超螺旋结构在细胞内是可以互变的.使用原子力显微镜对分离到的pBR322DNA超凝集结构进行分析,并与普通超螺旋进行比较,结果表明,超凝集DNA分子的结构发生了巨大的变化,其分子长度比正常超螺旋分子缩短了约30%,宽度和高度则增加了60%,结构更接近于A型DNA.另外,原子力显微镜研究结果表明,氯喹的嵌入并非改变了超凝集DNA的超螺旋状态,而是使其打结并最终压缩成一团.