1株髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒感染性克隆的构建与病毒拯救

为构建髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-J)SCGS-1株前病毒cDNA分子标记感染性克隆,根据SCGS-1全基因测序结果,分3段进行全序列PCR扩增,顺次连接至pUC19,构建SCGS-1株前病毒cDNA感染性克隆pUC-SCGS;通过重叠PCR方法对SCGS-1基因组进行沉默突变,在4 684位点引入SalⅠ位点,构建SCGS-1株分子标记感染性克隆pUC-△SCGS;以pUC-SCGS和pUC-△SCGS重组质粒转染CEF进行病毒拯救,并通过PCR、间接免疫荧光与双抗体夹心ELISA进行拯救病毒检测。结果显示,成功构建pUC-SCGS与pUC-△SCGS重组质粒,转染后盲传第3代、第4代细胞与上清中均检测到拯救病毒;间接免疫荧光与抗原ELISA方法分别在CEF细胞和上清中检测到ALV-J抗原。成功拯救获得分子标记ALV-J。

梅单瓣复瓣花的相关分子标记初探

应用RAPD分子标记技术和SCAR分子标记技术研究了梅单瓣花与复瓣花相关的分子标记。结果表明从 34个随机引物中筛选到一个多态性引物OPP0 1,扩增出只有单瓣花类型具有的分子量为 1899bp的DNA特异片段 ,即OPP0 1 DS 1899;根据该序列设计大小分别为 2 5bp和 2 4bp的一对引物SSD 1和SSD 2 ,将RAPD标记转为SCAR标记 ,该标记大小为 10 79bp。

大麻雄性基因连锁AFLP分子标记的筛选及鉴定

为建立一种大麻早期性别筛选及鉴定方法,利用AFLP标记技术,筛选了64对Eco RI-NNN/Mse I-NNN引物组合,对11个不同大麻品种雌﹑雄植株的混合DNA池进行了性别连锁特异性条带的筛选。结果表明,6对引物组合表现出多态性,其中,Eco RI-ACA/Mse ICTG在雄性DNA池中扩增出1条特异条带,经各品种单株DNA验证,该条带只在雄性单株稳定出现,回收﹑克隆﹑测序后获得1条可用于大麻早期田间性别鉴定的734bp雄性特异条带。