稻瘟病菌株的DNA指纹及其与小种致病性相互关系的研究

稻瘟病菌生理小种的鉴别对培育抗稻瘟病水稻品种具有重要意义.传统方法利用一套鉴别品种区分小种既复杂又易受各种因素的影响.我们在日本稳定菌株北1的基因组文库中筛选出了一套含重复顺序的克隆,2个克隆被证实具有高度的多态性.用其中的POR6对17个稻瘟病菌株进行Southern分析,获得了可分辨和重复的基因组特异的指纹图谱.本文提供了8个稳定的稻瘟病菌株的致病性与其DNA指纹图谱之间关系,结果表明各小种组合间的百分相似率Sxy值与该小种组合间共同侵染的鉴别品种数目有正相关性.

DNA扩增制备探针并用于临床白色念珠菌感染鉴定

目的 应用聚合酶链反应技术扩增特异DNA片段 ,并制备成为可应用于临床鉴定白色念珠菌的基因探针。方法 采用聚合酶链反应技术特异地扩增白色念珠菌标准株DNAEO3 12 5bp基因片段 ,然后用半抗原地高辛配基标记 ,在完成基因探针显色敏感度检测之后 ,应用该基因探针分别对血液病病房分离的白色念珠菌、热带念珠菌及大肠埃希菌等多种细菌进行斑点杂交测试。结果 基因扩增制备Dig 12 5bpDNA探针显色敏感度为0 0 1pg,具有白色念珠菌特异性 ,与其他念珠菌和细菌不发生杂交。结论 基因扩增制备EO3 12 5bpDNA探针方法简便可靠 ,具有很强特异性 ,可应用于临床鉴定白色念珠菌感染。

刚果红与鲱鱼精DNA相互作用的光谱法和电化学研究

在生理pH下,采用光谱法、电化学、化学热力学和粘度法等方法,利用中性红作分子探针,研究了刚果红与鲱鱼精DNA之间的作用方式,获得了结合比、结合常数和热力学函数值。结果表明,刚果红与DNA之间以嵌插方式发生作用。刚果红与DNA之间的结合比为n(CR)∶n(DNA)=1∶1,结合常数为K 25℃=4.50×103L/mol。25℃时,ΔrHm=7.04×104J/mol,ΔrSm=305.88 J/(mol.K),ΔrGm=-2.08×104J/mol。刚果红与DNA之间的作用为熵驱动。

EMB基因330密码子分子DNA探针设计及荧光检测

目的针对结核杆菌耐乙胺丁醇embB330密码子位点设计分子DNA探针,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中分子DNA探针与embB330密码子扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出该位点突变。方法运用软件Beacon designer设计embB基因包含330密码子的分子DNA探针,应用荧光分光光度计检测embB306密码子扩增片段与探针杂交后荧光信号,比较扩增产物测序结果。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及embB330密码子突变株PCR产物与探针杂交后荧光信号存在显著差异;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB330密码子突变检出率为3%,测序法突变检出率为3%。结论分子DNA探针技术可以有效检测embB330密码子单碱基靶点突变;应用荧光分光光度计直接观测液相荧光杂交信号简单、灵敏。

外生菌根蘑菇分离菌株的DNA鉴定方法

外生菌根真菌中存在一些食用蘑菇 ,由于其食药用价值极高而自然资源稀少 ,人们正努力探索驯化栽培的可能途径 ,作为供试菌种的各种分离培养物的真伪鉴定就成了研究者关注的焦点。评述了国内外近年来发展的几种外生菌根蘑菇分离菌株的DNA鉴定方法 ,并对它们进行了分析讨论。

钩端螺旋体重组DNA探针对致病性黄疸出血群钩体DNA的杂交识别

作者从建立的黄疸出血群钩端螺旋体(下称钩体)DNA基因库中筛选出重组DNA克隆PLIps01(15kb)和PLIEc34(4kb)制备成^(32)P放射性探针。以该二探针对致病性黄疸出血群所属血清型的13个菌株钩体DNA进行Southern印迹分析,结果表明,该二DNA探什对黄疸出血群各株钩体DNA具有强烈的特异性结合,能识别出简洁的DNA带型,并能区分不同血清型以至菌株的DNA带型差别。作者认为,钩体DNA重组探什结合Southern印迹分析是一种灵敏而特异的检测分析方法,可作为诊断、鉴定和分析钩体的工具。

地高辛标记核酸探针斑点杂交法检测轮状病毒疫苗中残余MA－104细胞DNA含量的研究

本文报导用地高辛标记核酸探针和分子斑点杂交技术检测轮状病毒基因重配株Ｌ－３株活疫苗中残余ＭＡ－１０４细胞ＤＮＡ含量的方法。提取和纯化ＭＡ－１０４细胞ＤＮＡ，将其ＡｌｕＩ酶切片段用随机引物法引导ＤＮＡ标记为探针。待检样品抽提核酸后点膜进行斑点杂交。此法灵敏度高，可检出０．１４ｐｇ的ＤＮＡ，特异性强，与非同源性ＤＮＡ无杂交。用此法检测轮状病毒基因重配株Ｌ－３株制备的疫苗，ＭＡ－１０４细胞残余ＤＮＡ含量低于１４ｐｇ低于ＷＨＯ限量标准，结果表明此重配株用于研制疫苗是安全的。

用于液相检测的双参数压电DNA传感器研究

采用自组装技术,利用亲和素-生物素系统将25-mer的生物素标记的DNA探针固定于石英谐振器金电极上,与双参数压电传感器相结合,研制成了用于液相检测的压电DNA传感器。该传感器稳定性较好,3h频移在5Hz以内;液体的体积在一定范围内对双参数传感器未见明显影响;用双参数方法制作的传感器特异性等性能较好,为实现检测的自动化和生物的动力学测定打下了基础。

恶性疟疾重组质粒pPF_（14）DNA探针的制备

采用基因克隆技术，将恶性疟原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）ｐＰＦ１４质粒转化大肠杆菌ＨＢ１０１，经扩增后碱裂解法提取质粒ＤＮＡ，核酸内切酶酶切图谱分析鉴定后，低熔点胶法回收而获得高纯度和高回收率的插入片段（ｐＰＦ１４ＤＮＡ），经３２Ｐ标记后具较高敏感性与特异性，该探针制备方法具简便、稳定、省时的优点。本文对各制备程序进行了探讨。

X染色体特异区域DNA探针的分离及一个TCD家系的研究

从人Ｘ染色体基因文库中筛选出位于Ｘｑ２１．１一ｑ２１．３３区域内的克隆λＳ８，以此作为探针与ＴＣＤ家系进行分子杂交，发现患者出现了８．９ｋｂ和６．９ｋｂ的多态片段，表明λ３８位点处ＴＣＤ基因发生改变，为ＴＣＤ的分子遗传学研究提供了一个新的遗传标记─—λＳ８探针。

发夹型荧光分子探针用于DNA甲基化酶的活性分析及其在药物筛选中的应用

报道了一种基于发夹型荧光探针的甲基化酶活性的分析方法,甲基化酶和相应的限制性内切酶的识别位点被设计在发夹型探针的茎部,四甲基罗丹明(TAMRA)被连接在探针的5'端,其荧光被连在3'端的熄灭基团4-(4'-二甲基对胺基偶氮苯)苯甲酸(DABCYL)所熄灭.限制性内切酶可切割未发生甲基化修饰的探针,导致探针的发夹结构遭到破坏,引起TAMRA荧光信号的恢复.根据荧光信号的恢复程度可实现对甲基化酶活性的分析.在此基础上,建立了一种简便、快速分析抗肿瘤药物对DNA甲基化酶活性的影响的方法,为筛选针对基因甲基化异常引起的恶性肿瘤的治疗药物提供了一种新的思路和方法.

DNA分子杂交技术在基因工程人白细胞介素-2质量检测中的应用

将携带有人白细胞介素-2基因的工程菌(PBV^(220)/ZL-2),发酵培养后经一系列提纯可获得基因工程人白细胞介素-2(rIL-2)的纯品。采用分子杂交技术,用^(32)P标记PBV_(220)大肠杆菌全DNA为探针,检测rlL-2纯品,没有检测出残余DNA,完全符合WHO和“中国人用重组DNA制品质量控制要点”所规定的残余DNA含量在100Pg/剂以下的要求。

光谱法研究Er(Ⅲ)(HE)_3与DNA的作用方式

以Tris-HC l缓冲溶液作为研究介质,在pH=6.75的环境下,应用电子吸收光谱和荧光光谱法探讨了苏木素(HE)和铒(Ⅲ)形成的配合物Er(Ⅲ)(HE)3与鲱鱼精DNA的作用方式,并用摩尔比法和双倒数法求得金属与配体的结合比为1:3,Er(Ⅲ)(HE)3配合物与鲱鱼精DNA的结合常数为Kθ25℃=1.87×104L/mol。以吖啶橙(AO)作为分子探针探测了Er(Ⅲ)(HE)3配合物与DNA的作用情况,发现配合物能使AO-DNA体系发生动态荧光猝灭,Er(Ⅲ)(HE)3配合物与AO对鲱鱼精DNA具有嵌插竞争作用。

基因芯片—玻璃表面两种不同DNA探针固定化方法的比较研究

研究了基因芯片相关的DNA探针在芯片表面最佳固定化方法.用两种不同的双功能试剂1,4-苯二异硫氰酸酯和戊二醛分别把5＇-端氨基衍生的21-mer寡脱氧核苷酸探针直接共价固定到玻片表面,固定化的寡脱氧核苷酸探针与5＇-端FITC标记的互补靶序列进行分子杂交,杂交后用配有CCD的Ⅸ70型荧光倒置显微镜成像检测.结果表明,两种固定化方法的效果都比较好,能检测到靶序列的最低终浓度为1.5×10-9 mol/L优化了探针固定化时间、杂交时间、杂交温度等对DNA芯片分析性能的影响,为构建高灵敏度基因芯片打下良好基础.

一种能表现水稻基因组DNA分化特征的重复DNA顺序

用ＤＮＡ 复性动力学方法克隆到一个水稻中度重复顺序。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交、限制性内切酶分析及序列分析资料表明，该重复顺序在水稻基因组中具有串联重复和散布状态两种存在方式。以该ＤＮＡ 片段作探针，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交方法分析了多种野生稻种和栽培稻品种的基因组分化特征。某些限制性内切酶消化过的水稻ＤＮＡ，其图谱呈现出多达４０ 条以上的杂交带，包括强杂交带和弱杂交带两种类型。重复实验结果证明，强杂交带表现为ＢＢＣＣ染色体组型特异而弱带则在栽培稻各品种间显示出丰富的多态性。

浸矿微生物分子生物学鉴定方法

介绍了微生物浸矿中 ,浸矿微生物的鉴定非常关键 ,它是对浸矿微生物进行驯化、诱变、基因重组等后续操作的基本前题以及目前分子生物学方法在浸矿微生物鉴定中的应用情况。认为DNA探针分析方法具有快速、灵敏、特异性高等特点 ,适合混合菌群中已知菌株的快速检出 ,可应用于未经培养的自然菌群中菌株的鉴定 ;

布氏菌病新诊断技术的研究

我们在1995～1998年间对PCR诊断布病技术进行了多方面研究。其结果表明,该技术在诊断中有一定特异性和较高的敏感性(100fg)。对陕西、河北和山东省区的布病患者及健康对照人群的PCR检测,不同省区患者阳性率差别较大,各省区的对照人群也有一定的阳性。建议,进一步改进PCR诊断布病技术,并扩大试用范围,以便提高诊断水平。同时对DNA分子探针等技术也作了初步探索。

应用PCR快速制备乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片探针

目的应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段,并进行克隆、测序分析,制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法利用Oligo6.4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物,纯化PCR扩增产物,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定,提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明,所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。

基因探针及其在昆虫学上的应用

八十年代以来以基因工程技术为主导的分子生物学研究大大丰富了人们对生命过程和本质的认识。基因工程技术在昆虫学研究中日益受到重视。一个新兴的学科─—昆虫分子生物学已经形成。在分子生物学研究中基因探针是必不可少的重要的工具。由于在系统进化上人和哺乳类遗传距离较近，其基因探针具有较大的通用性，所以医学发展起来的人基因探针为哺乳动物研究带来了许多方便。而无脊椎动物的分子生物学研究一向十分薄弱，因此可用于昆虫的基因探针来源困难，研究者常需在实验设计初期对已有的众多基因探针进行预选或自己制备。所以基因探针的选择和使用对昆虫分子生物学研究至为关键。本文就昆虫学常用的基因探针的类型，标记方法，特别是应用等方面选择若干典型实例作一些介绍和评述。

地高辛标记探针检测卫氏并殖吸虫的方法

目的制备卫氏并殖吸虫线粒体细胞色素C氧化酶亚单位Ⅰ(COⅠ)基因和核糖体DNA第二间隔区(ITS2)地高辛标记探针,探讨其对并殖吸虫的种别鉴定和诊断的作用。方法利用引物分别体外扩增获得卫氏并殖吸虫目的基因后凝胶电泳鉴定并且胶回收纯化上述两个基因片段。将酶切后的COⅠ基因和ITS2基因回收,地高辛标记成探针,尼龙膜上行斑点杂交观察。结果COⅠ探针有较好的特异性和敏感性。ITS2探针缺乏特异性。结论尼龙膜斑点杂交结果显示卫氏并殖吸虫的COⅠ基因片段可以作为种群鉴定的后备探针。