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锯缘青蟹蜕皮抑制激素cDNA的分子克隆及其表达分析 被引量:13
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作者 邱高峰 张爱萍 楼允东 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期207-212,共6页
根据近缘种类同源序列设计简并引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)技术,首次扩增获得锯缘青蟹(Scyllaserrata)眼柄组织中编码蜕皮抑制激素(MIH)成熟肽全长cDNA序列及部分信号肽序列。将该序列克隆到pUCm T载体上进行序列测定。结果... 根据近缘种类同源序列设计简并引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)技术,首次扩增获得锯缘青蟹(Scyllaserrata)眼柄组织中编码蜕皮抑制激素(MIH)成熟肽全长cDNA序列及部分信号肽序列。将该序列克隆到pUCm T载体上进行序列测定。结果表明,编码锯缘青蟹MIH成熟肽的cDNA由234个碱基组成,由此推测MIH成熟肽含78个氨基酸残基。该序列不仅与其它短尾类甲壳动物的MIH氨基酸序列具有高度的同源性(79%~91%),还与该激素同一家族的性腺抑制激素、大颚器抑制激素的氨基酸序列具有较高的相似性。RNA斑点杂交结果显示,MIH基因在眼柄神经节及脑组织中均有表达,而在肌肉、中肠腺中不表达。 展开更多
关键词 锯缘青蟹 蜕皮抑制激素 cDNA分子克隆 基因表达 近缘种类 同源序列 逆转录聚合酶 链式反应
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三疣梭子蟹蜕皮抑制激素cDNA的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 朱冬发 沈建明 +1 位作者 杨济芬 苏青 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1112-1118,共7页
Molt-inhibiting hormone(MIH),which belongs to the crustacean hyperglycemic hormone(CHH)neuropeptide family,inhibits the synthesis of ecdysteroids by Y-organs.The CHH family is divided into two major groups,designated ... Molt-inhibiting hormone(MIH),which belongs to the crustacean hyperglycemic hormone(CHH)neuropeptide family,inhibits the synthesis of ecdysteroids by Y-organs.The CHH family is divided into two major groups,designated Ⅰ and Ⅱ.Group Ⅰ is composed of all CHH peptides,and Group Ⅱ is composed of most MIHs,gonad-inhibiting hormone(GIH)and mandibular organ-inhibiting hormone(MOIH).The Group Ⅰ peptides consist of a signal sequence,a CHH precursor related peptide(CPRP)and a mature hormone.The Group Ⅱ peptides have only a signal sequence and a mature hormone.The full-length molt-inhibiting hormone cDNA of Portunus trituberculatus(Pot-MIH)was cloned by the reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR)and the rapid amplification of cDNA ends(RACE).The degenerate nucleotide primers was designed based on the amino acid sequence of other crustacean MIHs.The full-length sequence of Pot-MIH cDNA(GenBank accession number:EU284117)is 1572 bp in size and consists of a 210 bp 5’-untranslated region(5’-UTR),a 342 bp open reading frame and a 3’-untranslated region(3’-UTR).The deduced polypeptide consisted of a 78-amino acid mature MIH peptide and a 35-amino acid signal ptptide.The mature Pot-MIH peptide shared twelve conserved residues(Cys7,Gly12,Arg14,Cys24,Asp26,Cys27,Asn29,Arg32,Cys40,Cys44,Phe50,and Cys53)with other crustacean MIHs.The mature Pot-MIH peptide had the Gly12 residue and the precursor lacked a CPRP sequence,both of which are characteristic of all Group Ⅱ peptides.Alignment of the amino acid sequence deduced from the full-length Pot-MIH cDNA with MIH amino acid sequences of other crustaceans revealed that they had very high identity.The identities between the putative Pot-MIH amino acid sequence with that of MIH of P.pelagicus,Callinectes sapidus,Charybdis feriatus,Cancer pagurus,C.magister,Carcinus maenas and Gecarcinus lateralis were 97%,95%,90%,82%,81%,77% and 60% respectively.Phylogenetic analysis indicates that the putative Pot-MIH cluster with other crustacean MIHs and GIHs. 展开更多
关键词 三疣梭子蟹 蜕皮抑制激素 CDNA克隆 序列分析
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中国明对虾蜕皮抑制激素在大肠杆菌中的表达与分离纯化 被引量:1
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作者 张继泉 李富花 +2 位作者 王在照 吴长功 相建海 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期301-306,共6页
采用大肠杆菌表达系统对中国明对虾蜕皮抑制激素(MIH)进行了体外重组表达研究。重组蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。尿素-SDS-PAGE分析表明,经1mmol/L的IPTG诱导4h后,重组蛋白获得了大量表达,在分子量为13kD处有一条与预测大小... 采用大肠杆菌表达系统对中国明对虾蜕皮抑制激素(MIH)进行了体外重组表达研究。重组蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。尿素-SDS-PAGE分析表明,经1mmol/L的IPTG诱导4h后,重组蛋白获得了大量表达,在分子量为13kD处有一条与预测大小一致的特异性蛋白条带;经金属螯合柱纯化后,得到了电泳纯的融合蛋白。Western blotting检测结果表明:重组表达的融合蛋白与兔抗刀额新对虾MIH的多克隆抗体特异结合,证实该融合蛋白为中国明对虾MIH。通过胶内酶切与LC-ESI-MS分析进一步证实融合蛋白的部分肽段与日本对虾MIH一致。MIH融合蛋白的成功表达为进一步深入研究其在中国明对虾蜕皮过程分子作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 中国明对虾 蜕皮抑制激素 原核表达 融合蛋白
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脊尾白虾蜕皮抑制激素基因全长cDNA的克隆及其对环境胁迫的响应 被引量:4
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作者 张美 刘萍 +1 位作者 李吉涛 李健 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期764-775,共12页
为研究脊尾白虾蜕皮抑制激素基因(MIH)在环境适应中的作用,本文采用RACE技术从蜕皮间期脊尾白虾眼柄中克隆获得MIH-like基因全长c DNA序列,命名为Ec MIH。该基因全长1218bp,包括360bp的开放阅读框,420bp的5'端非编码区和394bp的3&#... 为研究脊尾白虾蜕皮抑制激素基因(MIH)在环境适应中的作用,本文采用RACE技术从蜕皮间期脊尾白虾眼柄中克隆获得MIH-like基因全长c DNA序列,命名为Ec MIH。该基因全长1218bp,包括360bp的开放阅读框,420bp的5'端非编码区和394bp的3'端非编码区;开放阅读框编码120个氨基酸,包括41个氨基酸组成的信号肽和79个氨基酸组成的成熟肽,预测蛋白分子量为13.71k Da,理论等电点p I为8.02。同源性比较分析发现,脊尾白虾MIH-like基因与日本沼虾和罗氏沼虾同源性最高,分别为87%和86%。荧光定量PCR分析结果表明,脊尾白虾MIH-like基因在眼柄中的表达量最高,在卵巢中的表达量最少,而在肝脏、肌肉、鳃和血细胞中不表达。环境胁迫后该基因具有明显的时序性。p H6.5胁迫后24h和48h,眼柄和腹神经节中MIH-like基因的表达量较对照组均显著增加(P<0.05);4mg/L氨氮浓度组胁迫后12h和24h,眼柄和腹神经节中MIH-like基因的表达量较对照组均显著增加(P<0.05);盐度39胁迫后12h和24h,眼柄和腹神经节中MIH-like基因的表达量较对照组均显著增加(P<0.05)。本研究结果表明脊尾白虾mih基因参与了环境胁迫后的机体应激反应。 展开更多
关键词 脊尾白虾 蜕皮抑制激素 基因表达 环境胁迫
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