嗜人按蚊细胞系的建立及其特征

嗜人按蚊细胞系——Ana 104是取材于其Ⅰ龄幼虫培养成功的。培养液以7C199培养基,另加0.4%水解乳白蛋白,0.03%谷氨酰胺、10～20%胎牛血清及适量的青、链霉素和非必需氨基酸配制而成。Ⅰ龄幼虫组织片段在培养液中缓慢地、有节律地收缩,并不断长出生发囊和细胞,达二个半月之久。经传代培养后,约7～10天可长满单层,能维持22天以上。至今已传27代。能适应在L-15、DMEM等培养基中生长。从第9代起,将部分细胞进行液氮冻存,经复苏试验复活成功,生长良好。Ana 104细胞系以上皮型细胞为主,也有梭型细胞,染色体2n=6。动态观察其对氨基酸的需求,发现对谷氨酸、酪氨酸、鸟氨酸、胱氨酸和精氨酸需量较大,并可合成天门冬氨酸等。经电镜观察,未见有病毒和支原体污染。还测试了酯酶同功酶带为3条和羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶的比活力。嗜人按蚊嗜吸人血,是我国重要的媒介蚊种。Ana 104细胞系是继冈比亚按蚊、斯氏按蚊和中华按蚊细胞系建立后,又新增添的1种按蚊细胞系。它将有助于从细胞分子角度对嗜人按蚊进行深入的生物学、营养代谢、细胞遗传、与病原体的关系、杀虫机理及生物工程等方面的研究。

乳酸脱氢酶与蚊虫对溴氰菊酯抗性相关性的研究

目的研究乳酸脱氢酶(LDH)与蚊溴氰菊酯抗性之间的关系。方法应用RT-PCR及cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA end,RACE)技术扩增白纹伊蚊LDH全长基因;用实时荧光定量PCR检测敏感和抗性蚊C6/36细胞中LDH基因的表达水平;用乳酸脱氢酶活性检测试剂盒检测敏感和抗性蚊细胞中LDH酶活性。结果 LDH基因全长共1831 bp,其中ORF为996 bp,共编码331个氨基酸。该基因与埃及伊蚊、黑腹果蝇、小家鼠和人的乳酸脱氢酶的同源性分别为89%、72%、66%和65%。实时荧光定量PCR结果表明,LDH基因在抗性蚊细胞中高表达,为敏感蚊细胞的1.87倍(P<0.05)。LDH酶活性检测结果显示,LDH在敏感蚊细胞中的酶活性范围为1～95 U/gprot,均值为40 U/gprot;在抗性蚊细胞中的酶活性范围为20～150 U/gprot,均值为75 U/gprot(n=15,P<0.01)。结论抗性蚊细胞中的LDH表达量和酶活性均高于敏感蚊细胞,提示LDH可能与蚊溴氰菊酯抗性相关。

尖音库蚊淡色亚种细胞系的建立和特征

用尖音库蚊淡色亚种(Culer pipiens pallens)新孵Ⅰ龄幼虫建成蚊细胞系Cpp512.取蚊卵消毒,孵出幼虫,剪成碎片,接种于含15％FBS的改良TC199培养基中,2周左右由幼虫组织长出的细胞形成单层。现已传至53代。细胞形态以梭形为主。细胞对数期群体倍增时间(PDT)为21h。BrdU掺入法测得细胞周期时间为18h。透射电镜检查未见病毒或支原体污染。染色体检查以二倍体核型为主,多倍体亦存在。

四种杀虫剂对白纹伊蚊(Aedes albopictus)细胞株(C6/36)的细胞遗传学效应

本文研究了四种杀虫剂:敌敌畏乳剂,灭害灵,甲基对硫磷,叶蝉散对白纹伊蚊细胞株(C6/36)染色体畸变和姐妹染色单体互换(SCE)的影响。结果表明:0.1%和0.01%浓度的敌敌畏,可使(SCE)频率明显增加,而染色体畸变率只在0.1%浓度有显著增加;0.5%的灭害灵,可使SCE频率明显增加,而染色体畸变增加不明显;甲基对硫磷和叶蝉散的实验结果表明,无论是染色体畸变和SCE频率均没有明显增加。

4种媒介蚊种的氨基酸代谢

为观察蚊细胞系在生长、繁殖过程中氨基酸的代谢 ,用国内常见蚊虫细胞系 Cpp5 12、Aalb10 5、Anso2 42及Ana10 4作 18种氨基酸代谢动态观察。结果表明 ,除 Aalb10 5外 ,其它 3种蚊细胞对谷氨酸和谷氨酰胺需量特别大。亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸等则变化不明显 ,而丝氨酸、甘氨酸和组氨酸均有些增加。天门冬氨酸在Aalb10 5、Cpp5 12和 Anso2 42培养液中为下降 ,而在 Ana10 4中为增高。苏氨酸在 Ana10 4和 Anso2 42培养液中含量增高明显 ,而在 Cpp5 12中却下降。鸟氨酸和脯氨酸在 Anso2 42培养液中含量增高明显。苯丙氨酸含量在 Ana10 4和 Anso2 42培养液中呈下降趋势 ,而在 Aalb10 5和 Cpp5 12中变化不显著。这些代谢特点造就了它们各自生理、生态、遗传和传病等方面的特征 ,也为更合理配制蚊细胞培养基提供了可靠资料。

乙脑病毒SA_(14-14-2)减毒株病毒外源因子污染检测分析

目的检测乙脑病毒SA14-14-2减毒株的病毒外源因子。方法用乙脑病毒免疫血清(阳性)将乙脑病毒SA14-14-2减毒株中和后,采用中和后的样品分别感染指示细胞(3T3、NRK、C3/36细胞),直接培养观察及红细胞吸附试验;中和后样品感染小鼠细胞系(3T3)培养14d的上清液再接种指示细胞(MRC-5、Vero、BHK21、3T3)培养观察及红细胞吸附试验;同时将流感病毒接种MDCK细胞,作为试验阳性对照。结果乙脑病毒SA14-14-2减毒株中和后的样品接种指示细胞(3T3、NRK、C6/36细胞),直接培养观察7 d、14 d,细胞形态正常,无细胞病变征兆,红细胞吸附试验为阴性;中和后样品感染小鼠细胞系(3T3)培养14 d的上清液再接种指示细胞(MRC-5、Vero、BHK-21、3T3)培养观察7 d、14 d,细胞形态正常,无细胞病变征兆,红细胞吸附试验为阴性。结论乙脑病毒SA14-14-2减毒株中未检测到人源、猴源、鼠源及其他病毒的污染,符合《WHO Technical Report Series,No.910,2002》的质量标准,可安全地用于乙脑减毒活疫苗的生产。