五氯酚钠致突变性研究

目的研究五氯酚钠的致突变性,为五氯酚钠的毒性机制研究提供依据。方法应用Ames试验、小鼠淋巴瘤细胞试验和体外染色体畸变试验研究五氯酚钠的致突变性。结果五氯酚钠对鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100、TA1024株菌株无论直接作用或代谢活化后作用,均未呈现致突变性;随染毒浓度增大,L5178Y细胞tk位点的突变频率有升高的趋势,其中150μg/ml剂量组的突变率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);无论是否加入代谢活化剂,受试物均引起染色体畸变率的明显增加。结论五氯酚钠能诱发中国仓鼠卵巢(CHO)细胞染色体畸变,是非基因致突变物或弱基因致突变物。

五味子水煎剂的遗传毒性研究

背景与目的:采用小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA)和小鼠骨髓微核试验(MNT)研究五味子水煎剂的遗传毒性。材料与方法:在MLA中,设五味子0.97、1.94、3.88、7.77 mg/ml(生药)等4个浓度组,在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下处理L5178Y细胞3 h,表达2 d,制备基因突变频率平板并培养12 d,计数含大、小突变细胞集落的孔数,计算基因突变频率(MF)和小集落突变百分率(SC%);在MNT中,设3.13、6.25、12.50 g/kg(生药)3个剂量组,每组10只ICR小鼠,雌雄各半,间隔24 h实施2次小鼠灌胃给予五味子水煎剂,制作骨髓涂片,计数每只小鼠2 000个嗜多染红细胞中含微核的嗜多染红细胞数(MNPCE),计算每组动物嗜多染红细胞微核率。结果:在-S9条件下,7.77 mg/ml(生药)浓度组诱发的MF是阴性对照组的2倍以上(P<0.01),SC%随五味子浓度增加而升高。+S9条件下的各浓度组诱发的MF存在剂量-反应关系,7.77 mg/ml(生药)浓度组的MF明显增加(P<0.01),其MF、SC%与阳性对照组相近;五味子水煎剂各剂量组未显示骨髓抑制作用,所诱发的微核率与阴性对照组比较未见明显增加(P>0.05)。结论:五味子水煎剂在+/-S9条件下均可诱发L5178Y细胞tk位点突变并导致染色体损伤,提示对人体具有潜在的遗传毒性;但对小鼠骨髓细胞染色体无损伤,经体内代谢活化后未显示遗传毒作用。

脱细胞异体真皮基质的遗传毒性研究

目的:检测医疗器械注册产品脱细胞异体真皮基质的遗传毒性。材料与方法:以产品浸提液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames试验)和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下检测。Ames试验采用平板掺入法,检测了50、100、200μl/皿3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌WP2 uvrA的回变菌落数;MLA检测了终浓度2.5%、5%、10%(V/V)3个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h、-S9/24 h三种处理条件下诱发的L5178Y细胞TK基因突变频率(MF)和小集落突变百分率(SC%)。结果:未经复水处理所得样品浸提液诱发五株菌的回变菌落数,对比氯化钠注射液溶媒(阴性)对照组均无明显增加;-S9/3 h处理条件下诱发的MF明显增加(P<0.01),且具有浓度相关性;复水处理后所得样品浸提液,在-S9/3 h、24 h条件下诱发的MF均无明显增加。结论:脱细胞异体真皮基质对测试菌株his-/trp-无明显诱变作用,未经复水处理时在-S9条件下对测试细胞tk-+/-及染色体具明显损伤作用,经复水处理后无明显损伤作用。产品在非代谢活化条件下表现出的阳性结果可能与其附加的冷冻保护剂有关。

骨水泥的遗传毒性研究

目的检测医疗器械进口产品骨水泥的遗传毒性。方法以骨水泥粉体浸提液与其液体混合液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames试验)和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下检测。Ames试验检测了25、50、100μL/皿3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌(his-)TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌(trp-)WP2uvrA的回变菌落数;MLA检测了0.125、0.25、0.5%(V/V)3个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h、-S9/24 h三种处理条件下诱发的L5178Y细胞tk-+/-基因突变频率(MF)和小集落突变百分率(SC%)。结果 +/-S9条件下,剂量组诱发五株菌的回变菌落数对比DMSO溶媒(阴性)对照组均无明显增加;-S9/24 h处理条件下0.5%(V/V)浓度组诱发的MF明显增加(P<0.01),但未达到阳性评判标准。结论骨水泥对试验菌的his-/trp-无明显诱变作用,对测试细胞的tk+/-及染色体无明显损伤作用。

马兜铃酸诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

马兜铃酸广泛存在于中草药和中成药中,该化合物已被证实可导致人类肿瘤。研究通过体外小鼠淋巴瘤细胞致突变试验来检测马兜铃酸(AA)的致突变率和药剂剂量的相关性,对试验具体所采用的96孔板法进行了详细的论述,并进而希望能够建立可以用于各种中草药遗传毒性检测的方法。经过试验证实了小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验方法可以有效地检测马兜铃酸的细胞毒性和致突变性。并且随着AA剂量的增加,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均明显降低。表明AA对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,并可以诱导tk基因的突变。

秦皮水煎剂的遗传毒性研究

目的：研究秦皮水煎剂的遗传毒性。方法：采用小鼠淋巴瘤细胞试验（MLA）和小鼠骨髓微核试验（MNT）。MLA试验中，秦皮水煎剂（含生药）1.71，3.42，6.83，13.65 g·L-1 4个质量浓度组，超纯水阴性对照组及甲基甲烷磺酸酯、环磷酰胺阳性对照组，分别在非代谢活化（-S9）和代谢活化（＋S9）条件下与L5178Y细胞作用3 h，表达2 d，制备基因突变频率平板并培养12～13 d，计数含大、小突变细胞集落的孔数，计算每组总突变率和小集落突变百分率；MNT试验中，3个剂量组（含生药）7.14，14.28，28.55 g·kg-1，氯化钠注射液阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组，每组10只ICR小鼠，雌雄各半，间隔24 h实施2次灌胃给药，制作骨髓涂片，镜检每只小鼠2 000个嗜多染红细胞中含微核的嗜多染红细胞数，计算每组动物嗜多染红细胞微核率。结果：MLA试验，-S9条件下各浓度组诱发的总突变率呈现浓度依赖性增加，13.65，6.83 g·L-1组与阴性对照组比较有统计学意义 （P〈0.01），小集落突变百分率随浓度增加而升高，＋S9条件下的各浓度组总突变率和小集落突变百分率均与阴性对照组相近；MNT试验，各剂量组无明显骨髓抑制作用，诱发的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较未见明显增加。结论：秦皮水煎剂在体外非代谢活化条件下可诱发L5178Y细胞tk＋/-位点突变并导致染色体损伤，提示其可能存在直接诱变物；秦皮水煎剂对小鼠骨髓细胞染色体无明显损伤作用，经体内、外代谢活化后均未显示遗传毒作用。

小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验的结果判定

小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验(MLA)是遗传毒性试验标准组合推荐方法之一,在药物非临床安全性评价及其他领域被广泛使用。本文以遗传毒性试验国际工作会议(IWGT)进行MLA国际验证的相关内容为依据,介绍MLA有关背景数据和结果判定的新标准,供国内同行参考,并建议在试验研究中采纳。