Twist1与Bcl-2协同促进肝癌细胞EMT过程中的miRNA表达谱变化

目的:为研究Twist1和Bcl-2协同诱导上皮间充质转变(EMT)发生直接相关的microRNA(miRNA)提供线索。方法:构建Twist1和Bcl-2表达质粒,单独转染或共转染获得过表达Bcl-2、过表达Twist1和共同过表达Twist1/Bcl-2肝癌细胞模型,在此基础上结合miRNA芯片分析单独过表达或共过表达Twist1/Bcl-2可引发的miRNA表达谱变化。结果:共过表达Twistl/Bcl-2可引起肝癌细胞多个miRNA发生明显表达变化,数据结果差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:Bcl-2与Twist1协同作用可引起广泛的miRNA发生明显的表达变化进而调控多个下游靶基因活性,从而改变肿瘤的多种生物学行为。

Twist1,MMP-2和MMP-9在结直肠癌组织中的表达及意义

目的:研究Twist1、MMP-2和MMP-9蛋白在结直肠癌组织中的表达及其相互关系.方法:建立组织微阵列平台,应用免疫组织化学方法检测92例结直肠癌组织Twist1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况.结果:结直肠癌中Twist1的表达率为64.1%,MMP-2和MMP-9阳性率分别为66.3%和67.4%;Twist1的表达与肿瘤淋巴结受累和TNM分期均呈正相关(均P<0.05),并且与患者总生存率和无复发生存率呈负相关(P<0.01,P<0.05);MMP-2、MMP-9蛋白表达与肿瘤淋巴结受累均呈显著正相关(均P<0.01),并且MMP-9蛋白表达与肿瘤大小也呈显著正相关(P<0.01);Twist1表达状况与MMP-9的表达呈显著正相关(r=0.205,P<0.05),而与MMP-2表达无显著相关性.结论:结直肠癌Twist1、MMP-2和MMP-9表达状况与肿瘤侵袭转移有密切关系;MMP-9表达可能在一定水平上受到Twist1调控.

AKR1C2与Twist在胃组织中的表达及其临床病理相关性的研究

目的探讨醛酮还原酶1C2（AKR1C2）和转录因子Twist在不同胃组织中的表达及相关性。方法应用免疫组化的方法检测AKR1C2和Twist在156例胃癌组织、31例胃不典型增生组织以及20例正常胃组织中的表达，比较两者的相关性。结果AKR1C2在20例正常胃组织中均低表达；在31例不典型增生胃组织中有25例低表达，6例高表达，差异有统计学意义；在156例恶性胃癌组织中有70例低表达，86例高表达，差异有统计学意义（P〈0．01）。Twist在20例正常胃组织中19例低表达，1例高表达；在31例不典型增生胃组织中有28例低表达，3例高表达，差异有统计学意义；在156例恶性胃癌组织中有49例低表达，107例高表达，差异有统计学意义（P〈0．01）。AKR1C2与Twist的表达在胃癌组织中具有正相关性（P〈0．01）。AKR1C2在不同胃组织中的表达差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论AKR1C2和Twist的表达特点可作为胃癌诊断、治疗及预后的参考指标。而且AKR1C2很可能参与到上皮间质转化过程中。

IGF-1、Twist2、VEGF在胃癌组织中的表达及临床意义

目的观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、Twist2、血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌组织中的表达,探讨其临床意义。方法选择2015年6月—2017年12收治的手术治疗的75例胃癌患者的术后病理组织,同时选取癌旁正常组织作为对照。观察不同组织中IGF-1、Twist2、VEGF表达情况及其与胃癌临床病理学参数的关系。结果胃癌组织中IGF-1、Twist2及VEGF阳性表达率均高于癌旁组织(P <0. 01)。IGF-1、Twist2及VEGF的阳性表达均与肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度、临床分期及浸润深度有关(P <0. 05,P <0. 01)。结论 IGF-1、Twist2及VEGF可能参与胃癌发生与发展过程,并促使肿瘤浸润与转移。

转录因子Twist 对小鼠成肌细胞C2C12 分化的影响

转录因子Twist 是高度保守的碱性螺旋-环-螺旋蛋白家族B类成员,包括Twist 1 和Twist 2. Twist 在生长发育以及肿瘤的发生发展等过程都具有重要作用,但是其对小鼠成肌细胞系C2C12 分化过程的影响尚不明确.因此本研究探讨Twist 在C2C12分化过程中的表达情况及其对分化过程的影响.通过低血清诱导体外肌肉细胞分化模型,观察分化过程中细胞形态变化.采用Western blot 检测肌肉细胞分化标志分子myogenin 和MY-32 在C2C12细胞分化第1天, 2天, 4天的表达.检测分化过程中Twist 1 和Twist 2 转录和蛋白表达水平.结果显示C2C12 细胞分化过程中细胞形态逐渐变长变粗融合形成多核肌管. Myogenin 随着分化进程表达量升高, MY-32 在分化第4天出现显著表达.而Twist 1 在C2C12 细胞分化第2天和第4天转录水平均提高(P<0.05),而Twist 2在细胞分化第4天转录水平均显著提高(P<0.05),但是Twist 2蛋白表达在分化过程中未见显著变化.该研究表明Twist 1和Twist 2基因在C2C12 细胞中转录水平均升高,但是蛋白表达水平未见显著差异.

优秀男子蹦床运动员屈体前空翻三周转体180°(12001<)动作运动学分析

12001<是蹦床比赛中的高频开场动作,不仅属于蹦床动作中较难的三周空翻动作,同时还是发展更高难度动作12003<甚至12005<的断面动作。因此针对此动作进行研究对于提高我国蹦床动作难度和技术水平具有重要意义。利用SIMI Motion运动图像分析系统,对2012年蹦床世界杯中国站男子网上个人决赛前3名选手的屈体前空翻三周转体180°(12001<)动作进行分析,结果表明:涂潇在压网阶段与起网阶段身体姿态存在问题,且飞行时间过短;整个完成动作中董栋利用上肢力量协调动作的技术偏弱;上山容弘在转体阶段利用髋关节屈伸改变转动轴的技术较差。

黄旭跳马踺子跳转180°接前手翻直体前空翻转体180°动作的运动学分析

跳马踺子跳转180°接前手翻直体前空翻转体类动作是近几年发展较快的技术,文章通过运动学分析,找出了黄旭完成该动作的技术特点及一般运动学规律,为进一步发展和改进此类动作技术提供理论和实践上的参考依据。

基于Cancer Browser数据库分析HMGA1在肾癌中的表达及预后

目的明确HMGA1基因在肾癌中的表达差异及其对上皮间质转化、预后的影响。方法利用Cancer Browser数据库检测HMGA1基因表达与肾癌分级分期、预后的相关性。通过Western blot实验检测HMGA1在肾癌组织、癌旁正常组织、肾癌细胞以及正常肾小管上皮细胞内的蛋白表达。通过Cancer Browser数据库检测HMGA1与Twist1、Twist2在肾癌中的相关性,并通过Western blot实验检测肾癌ACHN细胞系以及肾小管上皮细胞HK2内HMGA1、Twist1、Twist2的蛋白表达。结果 HMGA1的基因表达与肾癌的Grade分级、Stage分期、TNM分期呈正相关,且差异有统计学意义(P<0.05)。而HMGA1在肾癌组织中的蛋白表达显著高于其在癌旁正常组织内的表达,且肾癌细胞中HMGA1的蛋白表达也显著高于其在肾小管上皮细胞内的表达。肾癌患者中HMGA1与Twist2的表达呈正相关(P<0.000 1),而与Twist1的表达无明显相关(P=0.752 6),Western blot结果亦提示HMGA1和Twist2蛋白在肾癌细胞内均呈高表达,而Twist1在肾癌细胞及肾小管上皮细胞内表达无差异。最后的生存分析显示,HMGA1高表达的肾癌患者生存期显著低于HMGA1低表达的(P=0.007 7)。结论 HMGA1可能是肾癌诊断和预后的一种潜在生物学标志物,而高表达的HMGA1与肾癌患者的不良预后有关。

杨亚红跳马侧手翻转体90°直体后空翻转体720°运动学分析

通过采用运动学等研究方法,揭示我国女子优秀体操运动员杨亚红完成的侧手翻转体90°直体后空翻转体720°的高难度动作的运动学规律和技术特点,发展此类动作对提高我国女子跳马技术水平有重要的现实意义。

平衡木团身前空翻转体180度的运动学分析

通过对眭禄和张业琳子团身前空翻转体180度动作进行运动学分析,得到相关运动学数据。以研究平衡木团身前空翻转体180度动作的运动学特征,为平衡木运动员练习团身前空翻转体180度动作提供技术参考。结果显示:在腾空阶段,眭禄的转体速度稍慢;眭禄落木缓冲技术更好,但稳定性需进一步提高。结论:在腾空阶段,眭禄应加快转体速度;在落木阶段,眭禄应提高落木的稳定性。

基于Cancer Browser数据库分析促癌基因HMGA2在肾癌中的表达及其临床意义

目的探究HMGA2基因在肾癌中的表达及其对上皮间质转化的影响。方法通过Cancer Browser数据库检测HMGA2的表达与肾癌TNM分期、Staging分期的相关性,并明确HMGA2与Zeb1、Zeb2在肾癌中的相关性;随后通过Western blot实验和实时定量PCR检测HMGA2在肾癌组织、癌旁正常组织、肾癌细胞系以及正常肾小管上皮细胞内的蛋白及mRNA表达水平;通过Cancer Browser数据库检测HMGA2与Zeb1、Zeb2在肾癌中表达的相关性,并通过Western blot实验检测肾癌组织与癌旁正常组织、肾癌细胞786-O与正常肾小管上皮细胞HK2中Twist1、Twist2、Zeb1、Zeb2、HMGA2的蛋白表达水平;最后通过Western blot实验和实时定量PCR检测敲低HMGA2后肾癌细胞786-O内Twist1和Twist2的表达水平。结果随着肾癌的TNM分期以及Stage分期的逐渐增高,HMGA2的表达亦显著增高,且差异有统计学意义(P<0.01)。而HMGA2在肾癌组织及细胞内的表达显著高于癌旁正常组织及正常肾小管上皮细胞(P<0.001);不管在肾癌组织还是在肾癌细胞内,HMGA2与Twist1、Twist2均呈高表达,而Zeb1和Zeb2的表达无明显变化(P=0.3137,0.5820)。而Western blot和实时定量PCR结果显示敲低HMGA2可下调肾癌细胞内Twist1和Twist2的蛋白和mRNA表达水平。结论HMGA2与肾癌的TNM分期和Stage分期呈正相关。而HMGA2在肾癌组织及细胞内呈高表达,且HMGA2可正向调控Twist1和Twist2的表达。

MDM2对人乳腺癌细胞上皮间质转化的影响及其机制研究

目的探讨鼠双微粒体2(MDM2)在上皮间质转化(EMT)过程中的作用及其分子机制。方法采用Western blotting检测人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞株中MDM2及EMT相关标记分子(E-cadherin、N-cadherin及Vimentin)水平;分别于MCF-7细胞中瞬时转染MDM2空质粒pcmv、MDM2过表达质粒pcmv-MDM2,MDA-MB-231细胞中瞬时转染针对MDM2三个不同靶点的干扰质粒36h后观察细胞形态,并采用Western blotting和免疫荧光检测EMT相关标记分子及MDM2的表达情况;采用Western blotting及实时定量PCR检测在MCF-7、MDA-MB-231细胞过表达MDM2后对促EMT转录因子Snail1、Twist蛋白和mRNA水平的影响。结果 MCF-7细胞过表达MDM2后形态由鹅卵石形变为纺锤形,E-cadherin蛋白随MDM2表达水平的上调表达降低;MDA-MB-231细胞敲低MDM2后形态由长梭形变为卵圆形,Vimentin、N-cadherin蛋白随MDM2表达水平的下调表达依次降低;MCF-7及MDA-MB-231细胞过表达MDM2后Snail1、Twist的蛋白及mRNA水平均升高。结论在乳腺癌细胞株中MDM2可促进EMT发生,其可能通过上调转录因子Snail1和Twist表达来实现。

转录因子Twist在骨骼肌细胞中的作用及机制研究进展

转录因子Twist属于高度保守的碱性螺旋-环-螺旋蛋白家族成员,最初在果蝇中被发现,在其胚胎发育过程中具有重要作用.Twist在脊椎动物中包括Twist1和Twist2两种基因,它们在机体多种组织中发挥重要功能,包括骨骼肌.研究发现转录因子Twist具有抑制骨骼肌细胞分化、调节骨骼肌糖原储存和炎症因子的表达、并与肌源性祖细胞的部分生物学行为有关.本文围绕Twist1和Twist2在骨骼肌细胞中的功能及分子机制进行综述,以便系统地了解Twist的生物学功能,为进一步在骨骼肌相关性疾病的诊断、发展、以及治疗等方面提供依据.

分泌型卷曲相关蛋白2抑制人结直肠癌细胞系SW480的增殖和迁移

目的探究分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)抑制人结直肠癌细胞系SW480增殖、迁移的分子机制。方法在人正常结肠上皮细胞HCoEpiC和结直肠癌细胞系SW480中采用Western blot和RT-qPCR检测SFRP2的表达;构建shSERP2稳转SW480细胞株;在shNC SW480和shSFRP2 SW480细胞中采用Western blot和RT-qPCR检测SFRP2、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Twist的表达;HIF-1α抑制剂(IDF-11774)刺激shSFRP2 SW480细胞后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭。结果SW480细胞中SFRP2的表达量低于HCoEpic细胞(P<0.01);敲降SFRP2后,SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力显著提高(P<0.001);而细胞内HIF-1α和Twist表达水平显著提高(P<0.01);HIF-1α抑制剂(IDF-11774)刺激后,其增殖、迁移、侵袭能力显著回降(P<0.001)。结论SFRP2通过调控HIF-1α-Twist信号轴发挥其抑癌作用。

TWISTED BIFURCATIONS AND STABILITY OF HOMOCLINIC LOOP WITH HIGHER DIMENSIONS

By using the linear independent solutions of the linear variational equation along the homoclinic loop as the demanded local coordinates to construct the Poincaré map,the bifurcations of twisted homoclinic loop for higher dimensional systems are studied.Under the nonresonant and resonant conditions,the existence,number and existence regions of the 1-homoclinic loop,1-periodic orbit,2-homoclinic loop,2-periodic orbit and 2-fold 2-periodic orbit were obtained.Particularly,the asymptotic repressions of related bifurcation surfaces were also given.Moreover, the stability of homoclinic loop for higher dimensional systems and nontwisted homoclinic loop for planar systems were studied.

B细胞淋巴瘤基因-2、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1转录因子在舌鳞癌中调控上皮-间充质转化的研究

目的探讨B细胞淋巴瘤基因-2（bcl-2）、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1（Twistl）在舌鳞癌中的表达及对上皮-间充质转化（EMT）调控。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测bcl-2、Twistl及EMT相关因子在82例舌鳞癌及24例癌旁组织中的表达，分析bcl-2、Twistl及EMT相关因子与舌鳞癌临床病理特征的关系。Westernblot法检测舌鳞癌细胞株Tb3．1中bcl-2、Twistl及EMT相关因子表达水平；免疫共沉淀证明bcl-2、Twistl的相互作用。结果bcl-2、Twistl在舌鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织，82例癌组织中48例（58．64％）bcl-2、46例（56．10％）Twistl表达呈阳性表达，明显高于癌旁组织[bcl-2：6例（25．00％），P〈0．05，Twistl：4例（16．67％），P〈0．05]；bcl-2、Twistl、神经钙黏素、波形蛋白在中低分化组及淋巴转移组中阳性表达高于在高分化组及非淋巴结转移组中的表达，在中低分化组中的表达分别为28例（70．00％）、28例（70．00％）、30例（75．00％）、30例（75．00％），在淋巴结转移组中的表达分别为29例（72．50％）、29例（72．50％）、29例（72．50％）、31例（77．50％），钙黏着蛋白则与之相反，分别为15例（37．50％）、16例（40．00％）。且Twistl与bcl．2、神经钙黏素、波形蛋白的表达呈正相关（相关系数分别为0．303、0．249、0．348，P〈0．05），与钙黏着蛋白的表达呈负相关（相关系数为-0．547，P〈0．05）；免疫共沉淀结果显示bcl-2、Twistl间可互相作用。结论bcl-2和Twistl在舌鳞癌中高表达，两者形成复合体可能参与调控舌鳞癌EMT过程。

Twist1和基质金属蛋白酶2在子宫内膜样腺癌组织中的表达及意义

【摘要】目的探讨Twistl和基质金属蛋白酶2（MMP－2）蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其相互关系。方法建立组织微阵列平台，应用免疫组织化学方法检测70例子宫内膜样腺癌组织中Twistl和MMP-2蛋白的表达情况。结果Twistl蛋白主要定位于肿瘤细胞核，而MMP-2蛋白主要定位于肿瘤细胞质。70例子宫内膜样腺癌组织中，Twistl的高表达率为65．7％，MMP-2的阳性率为67．1％。Twistl表达与临床分期、肿瘤子宫肌层浸润和卵巢转移有关（均P〈0．05），MMP．2表达与临床分期、肿瘤分级和肿瘤子宫肌层浸润有关（均P〈0．05）。相关性分析显示，Twistl表达与MMP-2表达呈显著正相关（r=0．328，P〈0．01）。Twistl高表达患者的总生存率（80．4％）和无复发生存率（78．3％）均低于Twistl低表达患者（均100．0％，均P〈0．05）。多因素分析显示，临床分期和淋巴结转移是影响子宫内膜样腺癌患者预后的独立危险因素（均P〈0．05），而Twistl和MMP-2表达与子宫内膜样腺癌患者的预后无关（均P〉0．05）。结论子宫内膜样腺癌中Twistl和MMP-2的表达与肿瘤侵袭和转移有密切关系；MMP-2表达可能在一定水平上受到Twistl的调控。

含1,3,4-噁二唑的苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑类Twist1抑制剂的设计合成及抗肿瘤活性研究

目的设计合成结构新颖的苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑衍生物作为Twist1抑制剂。方法采用基于配体的药物设计策略,以harmine为先导化合物设计含1,3,4-噁二唑结构的苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑类化合物;以2-溴乙酰乙酸乙酯和2-氨基苯并噻唑为起始原料,经环合和肼解反应得到关键中间体7;中间体7经N-酰化、环合以及N-烃化反应合成化合物Ⅰ_(1)~Ⅰ_(13);中间体7经缩合、环合和加成反应得到化合物Ⅱ_(1)~Ⅱ_(2)。通过MTT法评价了目标化合物的体外抗肿瘤活性。结果与结论合成了15个未见文献报道的苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑类化合物,其结构经1H-NMR、MS谱确证。大部分化合物显示出较强的抗肿瘤活性,其中Ⅱ1的活性最佳,对A549和H2228细胞的抗增殖活性的IC50值分别为5.41μmol·L^(-1)和15.30μmol·L^(-1),是harmine活性的2~3倍,具有进一步研究价值。

下咽癌Twist1、Twist2蛋白的表达与患者临床病理特征的关系

目的探讨下咽癌组织Twist1、Tvvist2蛋白的表达与患者临床病理特征的关系。方法回顾性分析2014年5月至2019年9月辽阳市中心医院收治的58例下咽癌患者的临床资料和病理资料,应用免疫组织化学法检测患者癌组织及癌旁组织Twist1、Twist2蛋白表达情况,术后进行随访,记录患者生存情况,分析癌组织Twist1、Twist2蛋白表达与患者临床病理分期和预后之间的关系。结果58例下咽癌患者癌组织Twist1、Twist2蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05),其中T分期T_(3)+T_(4)期患者、临床分期Ⅲ+Ⅳ期患者的Twist1、Twisl2蛋白阳性表达率均明显高于T_(1)+T_(2)期和T_(3)+T_(4)期(P<0.05),淋巴结转移阳性者的阳性表达率明显高于无淋巴结转移者,病理分级为中低分化者阳性表达率明显高于高分化者(P<0.05)。术后随访52例患者,随访率89.67%,其中28例复发(53.85%),术后1、3、5年生存率分别为80.77%(42/52)、53.85%(28/52)、21.15%(11/52)。Twist1、Twist2蛋白阳性表达者的3、5年生存率显著低于阴性表达者(P<0.05)。Cox多因素分析显示术后复发、临床分期、Twist1阳性表达、Twlst2阳性表达是影响患者生存的独立危险因素(P<0.05)。结论Twist1、Twist2蛋白在下咽癌组织中的表达强度较癌旁正常组织明显增强,其表达水平与患者的T分期、临床分期、病理组织分型和淋巴结转移有关,同吋Twist1、TVist2蛋白的高表达是患者预后的独立影响因素,二者可能是下咽癌患者预后的判断潜在指标。

中晚期食管鳞癌组织SOX2和Twist1表达及对放化疗疗效影响

目的研究SOX2和Twist1在中晚期食管鳞癌组织中表达情况及其与中晚期食管鳞癌同期放化疗疗效的关系。方法收集2014-04-06-2019-10-27郑州大学附属肿瘤医院收治的40例Ⅱ~Ⅲ期食管鳞癌患者肿瘤组织及相应的癌旁组织标本,采用免疫组化方法检测SOX2和Twist1表达水平;患者均行同期放化疗,治疗结束后4周进行近期疗效评价和远期生存随访。根据近期疗效分为敏感组和抗拒组。分析疗效与SOX2和Twist1的相关性。结果治疗结束后4周评价疗效,其中完全缓解、部分缓解和未缓解分别为13、15和12例。所有患者中位随访时间为17个月(95%CI为13.901~20.099),1年、3年和5年总生存率分别为62.5%、30.3%和25.3%。敏感组Twist1阳性表达率为3.57%(1/28),低于抗拒组的41.67%(5/12),χ^(2)=6.807,P=0.009;SOX2阳性表达率为32.14%(9/28),低于抗拒组的75%(9/12),χ^(2)=6.234,P=0.013。中晚期食管鳞癌组织中Twist1与SOX2表达不相关,r=0.124,P=0.446。生存分析显示:SOX2阴性表达组(评分<3分)生存率高于阳性表达组(评分≥3分),差异有统计学意义,χ^(2)=5.263,P=0.022;Twist1阴性表达组(评分<3分)生存率高于阳性表达组(评分≥3分),差异有统计学意义,χ^(2)=16.850,P<0.001。COX多因素回归分析显示,淋巴结转移情况(HR=6.092,95%CI为1.151~32.236,P=0.034)和SOX2表达(HR=13.106,95%CI为1.966~87.373,P=0.008)为患者独立预后因素。结论中晚期食管鳞癌组织中SOX2和Twist1均高表达,且与放疗敏感性和生存有关联,二者表达水平没有相关性。SOX2和Twist1可能是预测中晚期食管鳞癌放疗疗效新的分子标志物。