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MALDI-TOF-MS高灵敏度分析EGFR基因多位点突变方法的建立与应用
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作者 黄海燕 孙杰 +8 位作者 徐炜新 王姜琳 孙亚蒙 汪国庆 叶绍云 蒋峻峰 聂芳芳 徐军 王纯 《检验医学与临床》 CAS 2023年第3期334-338,共5页
目的以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)为分析平台,建立表皮生长因子受体(EGFR)基因多位点突变的高灵敏度同步检测方法,用于辅助临床伴随诊断。方法使用MALDI-TOF-MS推荐的网站设计引物和单碱基延伸引物(UEP),设计添加... 目的以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)为分析平台,建立表皮生长因子受体(EGFR)基因多位点突变的高灵敏度同步检测方法,用于辅助临床伴随诊断。方法使用MALDI-TOF-MS推荐的网站设计引物和单碱基延伸引物(UEP),设计添加针对野生型基因组的blocker,以减少野生型模板对突变位点检测的干扰。用数字PCR定量标准品,使用定量后的标准品验证检测体系的灵敏度。收集228例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的血液标本,比较MALDI-TOF-MS平台与微滴式数字PCR(ddPCR)平台检测结果的特异度、灵敏度。结果MALDI-TOF-MS检测E746_A750del位点、T790M位点突变灵敏度达0.1%,最小突变检出拷贝数达2.8;L858R位点突变灵敏度达0.5%,最小突变检出拷贝数达12。与ddPCR检测相比,MALDI-TOF-MS检测E746_A750del、L858R和T790M位点的灵敏度、特异度、Kappa值分别为94.4%(34/36)、99.5%(191/192)、0.95,94.6%(35/37)、100.0%(191/191)、0.97,83.3%(15/18)、99.5%(209/210)、0.87。结论MALDI-TOF-MS建立的检测方法具有很高的灵敏度,与ddPCR检测具有非常高的一致性,有广阔的临床应用前景。 展开更多
关键词 MALDI-TOF-ms ddPCR EGFR基因 液态活检
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紫花苜蓿NAC类转录因子基因MsNAC2的克隆及其功能分析 被引量:31
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作者 申玉华 徐振军 +4 位作者 唐立红 杨晓坡 黄文婕 武小斌 张文波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期2925-2938,共14页
【目的】NAC转录因子是植物特有的一类转录因子,N端含有一段高度保守、约150个氨基酸组成的NAC结构域,而C端为高度变异的转录调控区。NAC转录因子不仅参与植物生长发育的调控,而且在植物抗逆反应中具有重要的调控作用。作者从紫花苜蓿... 【目的】NAC转录因子是植物特有的一类转录因子,N端含有一段高度保守、约150个氨基酸组成的NAC结构域,而C端为高度变异的转录调控区。NAC转录因子不仅参与植物生长发育的调控,而且在植物抗逆反应中具有重要的调控作用。作者从紫花苜蓿中克隆了一个NAC类转录因子基因Ms NAC2,期望通过分析其DNA和氨基酸序列特征,阐明其在紫花苜蓿中响应非生物胁迫的表达模式,通过在烟草中过量表达鉴定其生物学功能,为进一步了解Ms NAC2在紫花苜蓿中的耐逆调控机理提供试验基础,并为通过转基因技术改善紫花苜蓿抗逆力和提高其品质奠定研究基础。【方法】应用RT-PCR和RACE技术获得紫花苜蓿Ms NAC2全长序列,并进行生物信息学分析。应用real-time PCR技术分析该基因在非生物胁迫下的时空表达特征。构建Ms NAC2-GFP融合表达载体,进行基因表达的亚细胞定位分析。同时构建p BI121-Ms NAC2植物超表达载体,通过农杆菌介导法转化烟草叶盘,比较逆境胁迫条件下野生型烟草和转基因株系的表型和生理指标,鉴定超表达Ms NAC2对烟草耐逆能力的调控效应。【结果】Ms NAC2全长1 358 bp,开放阅读框长度为1 023 bp,编码340个氨基酸,编码蛋白质分子量为39.4 k D,其N端含有典型的NAC保守结构域,C端高度变异。进化树聚类分析表明,该基因与脐橙Cs NAC亲缘关系较近,属于NAC蛋白的ATAF亚家族。洋葱亚细胞定位分析表明Ms NAC2定位于细胞核。转录水平表达分析表明Ms NAC2受250 mmol·L-1Na Cl、20%PEG6000、0.1 mmol·L-1 ABA和4℃胁迫诱导而显著升高,并且Ms NAC2在根中的表达量要明显高于在叶中的表达量。抗性试验结果显示,在Na Cl、PEG和4℃冷害胁迫下,转基因烟草苗高、根长、鲜重和干重等生长指标均高于野生型。生理指标检测结果表明,在250 mmol·L-1 Na Cl、20%PEG6000和4℃处理24 h后,转基因烟草叶片丙二醛含量明显低于野生型烟草,分别为野生型的82.6%、73.2%和77.8%。脯氨酸含量高于野生型烟草,分别达1.52倍、1.72倍和2.24倍,且SOD和POD的活性均高于野生型烟草,分别为野生型的1.101倍、1.105倍、1.33倍和1.12倍、1.08倍及1.19倍。【结论】从紫花苜蓿中克隆了一个新的NAC转录因子基因Ms NAC2,该基因能够对盐、冷害和干旱胁迫产生响应,与野生型烟草相比,过量表达Ms NAC2烟草具有较强的耐盐、抗旱和抵御寒冷的能力,说明该基因可能参与调控非生物逆境胁迫的生理响应。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 ms NAC2 基因克隆 功能分析
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蓝星睡莲花瓣类黄酮分析及花色形成关键基因鉴定
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作者 陈凯利 班文卓 +2 位作者 杜灵娟 周兴华 张雄飞 《西南大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第2期71-80,共10页
为明确蓝星睡莲(Nymphaea colorata)蓝色、白色两种花色花瓣在不同发育时期的类黄酮物质含量、成分及其代谢途径中的关键基因,本研究采用高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC-Triple TOF-MS/MS)技... 为明确蓝星睡莲(Nymphaea colorata)蓝色、白色两种花色花瓣在不同发育时期的类黄酮物质含量、成分及其代谢途径中的关键基因,本研究采用高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC-Triple TOF-MS/MS)技术,分析了蓝星睡莲5个发育时期花瓣的花青苷和黄酮醇苷含量和成分.结果表明,蓝、白花瓣中类黄酮含量差异明显,白花花瓣花青苷和黄酮醇苷含量均保持在较低水平,尤其是在S4,S5时期与蓝花达到了显著性差异,可能是造成蓝白花色差异的物质成因.在蓝星睡莲花瓣中,两种花色花瓣类黄酮成分相同,共鉴定出3种花青苷和11种黄酮醇苷.花青苷为飞燕草素-3-O-β-半乳糖苷、飞燕草素-3-O-(2″-O-没食子酰-6″-O-乙酰-β-半乳糖苷)和飞燕草素-3′-O-(2″-O-没食子酰-6″-O-乙酰-β-半乳糖苷);黄酮醇苷主要有槲皮素3-O-半乳糖苷、杨梅素3-O-α-L-(3″-O-丙二酰)-鼠李糖苷、杨梅素3-O-α-L-鼠李糖甘、杨梅素3-O-α-L-(3″-O-乙酰)-鼠李糖苷、槲皮素3-O-α-L-(3″-O-丙二酰)-鼠李糖苷等.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术进一步分析了类黄酮代谢途径相关基因在两种花色花瓣中的转录表达情况,结果表明,在蓝花花瓣5个发育时期,类黄酮3′5′-羟化酶基因(F3′5′H)、黄酮醇合成酶基因(FLS)、二氢黄酮醇4-还原酶基因(DFR)的转录表达变化与花青苷积累趋势一致,推测其可能是蓝色花瓣花青苷积累的关键结构基因;F3′5′H和糖基转移酶基因(GT)在蓝花中的表达量均明显高于白花,推测其是造成蓝白花色差异的重要基因.本研究为进一步解析蓝星睡莲花色形成分子机理提供了新的证据,为睡莲蓝色花分子育种提供了参考. 展开更多
关键词 睡莲 花青苷 黄酮醇苷 高效液相色谱 液质联用 基因表达
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对家蚕多星纹基因ms的SSR标记定位分析 被引量:3
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作者 张月华 张俊 +6 位作者 李刚 徐安英 沈兴家 孙平江 钱荷英 苗雪霞 黄勇平 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期400-405,共6页
对家蚕幼虫斑纹突变多星纹基因ms进行分子标记定位,有益于对多星纹性状的分子标记辅助选择和对该基因的定位克隆研究。利用家蚕雌性染色体在减数分裂过程中不发生交换的特点,采用幼虫斑纹为素斑(p)的家蚕品系C108,幼虫斑纹为多星纹(ms)... 对家蚕幼虫斑纹突变多星纹基因ms进行分子标记定位,有益于对多星纹性状的分子标记辅助选择和对该基因的定位克隆研究。利用家蚕雌性染色体在减数分裂过程中不发生交换的特点,采用幼虫斑纹为素斑(p)的家蚕品系C108,幼虫斑纹为多星纹(ms)的家蚕品系g02,组配正反交群体(g02×C108)F1♀×g02♂和g02♀×(g02×C108)F1♂,分别记作BC1F和BC1M,利用已经构建的家蚕SSR分子标记连锁图谱中第12连锁群上的18对SSR标记引物在亲本间进行多态性筛选。BC1F群体中的普通斑个体均表现出与(g02×C108)F1相同的杂合型带型;而所有多星纹个体的带型与亲本g02一致,为纯合型。结果筛选出S1206、S1208、S1210、C5553S3共4个与家蚕ms连锁的SSR标记。利用BC1M群体构建家蚕ms及其连锁的SSR标记遗传连锁图,连锁图的图距为34.5 cM,4个SSR标记及ms的排列次序为S1206—S1208—S1210—C5553S3—ms,ms位于34.5 cM处,与ms最近的标记为C5553S3,遗传距离为12.4 cM。依据该SSR标记遗传连锁图谱可对ms进一步精确定位。 展开更多
关键词 家蚕 幼虫斑纹 多星纹基因 基因定位 SSR标记
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MALDI-TOF-MS技术快速鉴定临床酵母样真菌的应用评价 被引量:5
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作者 梁铮 柏彩英 +4 位作者 罗娅莎 张文 蓝锴 李苗苗 周强 《检验医学与临床》 CAS 2015年第18期2659-2660,2663,共3页
目的评价基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在快速鉴定临床分离的酵母样真菌中的应用价值。方法收集临床分离的酵母样真菌135株,分别用VITEK MS、API20C和CHROMargar显色培养同时进行鉴定与比较,χ2检验分析VITEK MS和AP... 目的评价基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在快速鉴定临床分离的酵母样真菌中的应用价值。方法收集临床分离的酵母样真菌135株,分别用VITEK MS、API20C和CHROMargar显色培养同时进行鉴定与比较,χ2检验分析VITEK MS和API及显色培养基鉴定结果的准确率,以真菌内转录间隔区(ITS)基因测序作为鉴定结果的金标准,同时比较各种方法在临床使用中的优缺点。结果 VITEK MS、API20C和显色培养基鉴定的准确率分别为98.5%(133/135)、78.5%(106/135)、59.3%(80/135),经χ2检验分析,差异有统计学意义(χ2=51.996,P<0.05)。结论 MALDI-TOF-MS可将酵母样真菌快速、准确地鉴定到种。 展开更多
关键词 酵母样真菌 MALDI-TOF-ms质谱分析 ITS基因测序
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MS-PCR法检测血管紧张素原基因M235T多态性 被引量:2
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作者 耿茜 杨笛 +1 位作者 张寄南 马文珠 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期251-253,共3页
目的 建立新型突变基因分离聚合酶链反应 (MS PCR)法检测血管紧张素原 (AgT)基因M 2 35T多态性 ,以正确评估其与家族性原发性高血压的关系。方法 建立PCR RFLP和MS PCR法最佳实验体系 ,验证敏感性及特异性。结果  ( 1)PCR RFLP体系... 目的 建立新型突变基因分离聚合酶链反应 (MS PCR)法检测血管紧张素原 (AgT)基因M 2 35T多态性 ,以正确评估其与家族性原发性高血压的关系。方法 建立PCR RFLP和MS PCR法最佳实验体系 ,验证敏感性及特异性。结果  ( 1)PCR RFLP体系中 ,随内切酶量和消化时间的增加 ,消化反应越彻底 ,以 0 0 75 μg基因组DNA扩增产物、30UnitTth111 Ⅰ酶消化 3小时为最佳反应体系。 ( 2 )MS PCR法一次扩增即可确定AgT基因型。 ( 3) 10个标本以PCR RFLP法检测者基因型均为MT ,而MS PCR法仅 1例为MT型 ,余 9例均为TT型 ( 90 % )。结论 传统的PCR RFLP可能因消化不彻底而造成结果判断的误差 ;MS PCR以其高敏感性和特异性成为检测基因多态性的快速、简便。 展开更多
关键词 ms-PCR 血管紧张素原 基因多态性 M235T多态性 原发性高血压 基因诊断
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4E-ms杂交小麦生产体系的技术难点及应对措施 被引量:2
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作者 王世红 周宽基 +1 位作者 杨文雄 王化俊 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1312-1315,共4页
"兰州核不育小麦"是我们发现的小麦雄性不育突变体,经遗传分析,其不育性受单隐性核基因ms1g控制,具有普通小麦细胞质,不育性遗传稳定、彻底,不受光、温等变化的影响。利用该突变体[2n=42W(msms)=42]和蓝粒附加系小麦[2n=42W(M... "兰州核不育小麦"是我们发现的小麦雄性不育突变体,经遗传分析,其不育性受单隐性核基因ms1g控制,具有普通小麦细胞质,不育性遗传稳定、彻底,不受光、温等变化的影响。利用该突变体[2n=42W(msms)=42]和蓝粒附加系小麦[2n=42W(MSMS)+2(4E)]杂交,经连续自交选育,创建了"4E-ms杂交小麦生产体系",实现了小麦隐性核不育的有效保持。本文简述了4E-ms杂交小麦生产体系的应用研究进展,并对其育种应用的主要技术难点—深蓝粒的发生和累加效应产生的原因进行了分析,提出了应对措施,特别是提出通过分子设计育种,使蓝粒标记基因Ba、雄性可育基因MS和花粉致死基因ki集中于4E染色体或染色体臂上,以彻底解决深蓝粒的发生和累加效应,为杂交小麦在育种工作及实际生产中的应用提供技术支持。 展开更多
关键词 隐性核不育 4E染色体 雄性不育基因ms 花粉致死基因ki 深蓝粒累加
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澳洲香水石斛花香成分及DeTPS6的克隆与表达
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作者 孔兰 叶秀仙 +3 位作者 钟声远 林榕燕 林兵 钟淮钦 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2095-2105,共11页
花香是评价石斛商业价值的重要性状之一。为探究石斛花香物质的形成机理,本研究采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法(HS-SPME-GC-MS)、转录组测序和PCR技术分析了不同花期澳洲香水石斛花香物质变化及其与萜类合成关键酶基因表达间... 花香是评价石斛商业价值的重要性状之一。为探究石斛花香物质的形成机理,本研究采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法(HS-SPME-GC-MS)、转录组测序和PCR技术分析了不同花期澳洲香水石斛花香物质变化及其与萜类合成关键酶基因表达间的关系。结果表明,澳洲香水石斛中共检测到17种花香物质,其中1,4-二甲氧基苯、α-蒎烯和苯乙醇的含量相对较高,盛花期的花香释放量呈现明显的昼夜节律变化和组织特异性。基于转录组数据,筛选到77个与萜类合成相关的差异表达基因(DEGs),并成功克隆DeTPS6的全长,为1749 bp。DeTPS6蛋白具有萜类合成酶家族的保守结构域,属于TPS-b亚家族。亚细胞定位分析结果显示,DeTPS6定位于胞质。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果显示,DeTPS6在澳洲香水石斛的盛花期中高表达,且呈现显著的昼升夜降的变化趋势,与花香物质的含量呈正相关。本研究为DeTPS6生物学功能的探讨提供了理论基础。 展开更多
关键词 石斛 花香 顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法(HS-SPME-GC-ms) 萜类合成酶基因 表达分析
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MS-PCR法评估家族性原发性高血压病人血管紧张素原基因M235T多态性 被引量:1
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作者 耿茜 杨笛 +1 位作者 张寄南 马文珠 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2001年第4期336-339,共4页
本文采用新型高敏感、特异的MS PCR法对中国苏皖地区 94例具高血压家族史和 36例无家族史者检测血管紧张素原M2 35T基因型。具有高血压家族史的原发性高血压病人 (FH组 )、具家族史的非高血压者 (FNH组 )、无家族史的正常对照 (N组 )和... 本文采用新型高敏感、特异的MS PCR法对中国苏皖地区 94例具高血压家族史和 36例无家族史者检测血管紧张素原M2 35T基因型。具有高血压家族史的原发性高血压病人 (FH组 )、具家族史的非高血压者 (FNH组 )、无家族史的正常对照 (N组 )和无家族史的高血压病人 (NFH组 )血管紧张素原 (Angiotensinogen ,AGT)基因TT型 /T等位基因频率分别为 0 5 81/ 0 77、0 5 6 3/ 0 77、0 346 / 0 5 8和 0 4/ 0 5 5。有家族史者T等位基因频率远高于无家族史者。小样本研究认为中国苏皖地区人群原发性高血压的发病与AGTM2 35T基因多态性密切相关 ,T等位基因具更高的发病风险。各组间年龄分析结果显示AGTM2 展开更多
关键词 ms-PCR 家族性原发性高血压 血管紧张素原基因多态性 PCR-RFLP
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MALDI-TOF-MS检测人群中骨形成蛋白4基因编码区突变方法的建立
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作者 许铭炎 邓小玲 +4 位作者 陈锡和 刘庭英 陈庆珊 姚小武 唐世杰 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2011年第4期302-305,共4页
目的:应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术建立检测人群中骨形成蛋白4(BMP4)基因编码区突变的平台。方法:采用PCR扩增BMP4基因,产物纯化后利用MALDI-TOF-MS技术对广东籍100例非综合征型唇腭裂患儿及91例健康对照... 目的:应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术建立检测人群中骨形成蛋白4(BMP4)基因编码区突变的平台。方法:采用PCR扩增BMP4基因,产物纯化后利用MALDI-TOF-MS技术对广东籍100例非综合征型唇腭裂患儿及91例健康对照者外周血进行BMP4基因突变的检测并进行测序验证。结果:采用MALDI-TOF-MS平台检测的191份样本均未发现BMP4基因编码区存在T102A、R162Q及R198X突变,与测序结果一致。结论:成功建立基于MALDI-TOF-MS检测BMP4基因编码区突变的平台,该方法具有高通量、快速、准确的特点。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱 BMP4基因 突变
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用两步MS-PCR结合ELISA检测HIV-1逆转录酶基因的耐药性突变 被引量:2
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作者 何红秋 程绍辉 +2 位作者 刘斌 陈慰祖 王存新 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期42-46,共5页
高效抗逆转录病毒治疗法(HAART)的推广使用有效地抑制了HIV-1病毒的传播和艾滋病(AIDS)的发病率、死亡率。近年来,HIV-1逆转录酶基因突变所导致的耐药性已成为HAART治疗失败的主要原因,耐药性突变的检测对于指导病人用药以及新药开发具... 高效抗逆转录病毒治疗法(HAART)的推广使用有效地抑制了HIV-1病毒的传播和艾滋病(AIDS)的发病率、死亡率。近年来,HIV-1逆转录酶基因突变所导致的耐药性已成为HAART治疗失败的主要原因,耐药性突变的检测对于指导病人用药以及新药开发具有重要意义。发展了一种检测HIV-1逆转录酶基因耐药性突变的新方法。采用两步MS-PCR方法检测HIV-1B亚型野生型和耐药突变型逆转录酶基因突变,检测点包括M41L、K70R、K103N、Y181C和T215,并在两步MS-PCR基础上,设计比野生型引物长的突变型引物,结合微孔板杂交ELISA呈色技术检测各点突变。结果显示,简化的两步MS-PCR能保持灵敏度和特异性高的优点,ELISA的阳性结果与阴性结果的比值(P/N)达到要求,两步MS-PCR结合ELISA方法灵敏度高,操作简单、结果直观、成本低、相对耗时短且能进行高通量检测,使其无论在HIV-1耐药性突变及其它的点突变检测中都具有较好的临床应用前景。 展开更多
关键词 两步ms-PCR ELISA HIV-1 逆转录酶基因 耐药性
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MALDI-TOF-MS结合引物延伸反应检测K-ras基因型方法的建立
12
作者 刘忠臣 郑薇薇 +1 位作者 李庆阁 赵家宏 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期541-543,共3页
目的:建立MALDI-TOF-MS结合引物延伸的方法检测K-ras基因12位密码子7种基因型的研究模型并探讨其应用价值。方法:以自行构建的K-ras质粒DNA为模板,经目的片断扩增,去磷酸化,再用两条未经修饰的普通引物,在dATP、ddTTP、ddCTP和ddGTP混... 目的:建立MALDI-TOF-MS结合引物延伸的方法检测K-ras基因12位密码子7种基因型的研究模型并探讨其应用价值。方法:以自行构建的K-ras质粒DNA为模板,经目的片断扩增,去磷酸化,再用两条未经修饰的普通引物,在dATP、ddTTP、ddCTP和ddGTP混和物存在的体系中进行引物延伸反应,最后用MALDI-TOF-MS检测引物延伸产物质荷比(m/z),得到质谱图,根据质谱图中各个峰的峰值进行基因分型研究。结果:用MALDI-TOF-MS结合引物延伸的方法,可以准确区分7种不同基因型。该方法可同时对384份样品进行检测。结论:MALDI-TOF-MS结合引物延伸的方法准确度高,反应体系稳定并具有快速、高通量、自动化的特点,可能成为肿瘤早期诊断的检测方法。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸飞行时间质谱法 引物延伸 基因 RAS 突变
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MS-275增强顺铂致肝癌细胞凋亡效应的实验研究
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作者 张海元 许光华 张静 《长江大学学报(自科版)(下旬)》 CAS 2010年第4期1-3,共3页
目的:探讨MS-275与化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对肝癌细胞系HLE增殖的抑制效果。方法:通过MS-275联合化疗药物顺铂处理培养的肝癌细胞系HLE,体外细胞毒性实验(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡率... 目的:探讨MS-275与化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对肝癌细胞系HLE增殖的抑制效果。方法:通过MS-275联合化疗药物顺铂处理培养的肝癌细胞系HLE,体外细胞毒性实验(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡率。结果:MTT结果显示:0.5μmol/LMS-275与6.25μg/ml DDP联合应用后5d,HLE细胞增殖抑制率达(97.86士5.62)%,明显高于单用MS-275组的(51.75±2.31)%和DDP组的(43.48士2.39)%(P<0.05)。流式细胞术结果显示:MS-275与DDP联合应用明显导致细胞S期减少,G_2/M期阻滞;MS-275联合DDP组细胞凋亡率为(17.46士2.57)%,明显高于单用MS-275组的(7.62士0.59)%和DDP组的(7.36±0.47)%(P<0.05)。结论:MS-275与DDP联合应用能显著提高对肝癌细胞系HLE增殖的抑制作用。 展开更多
关键词 肝癌 细胞系 ms-275 顺铂 基因治疗
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HDAC抑制剂MS-275诱导人肺腺癌细胞系A549基因表达谱分析 被引量:1
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作者 何宝坤 潘德思 +2 位作者 马增春 王宇光 高月 《解放军药学学报》 CAS 2008年第4期304-307,共4页
目的研究HDAC抑制剂MS-275对人肺腺癌A549细胞基因表达谱的影响,探讨MS-275抗肿瘤的分子机制。方法运用制备的包含8064个人类基因的cDNA芯片检测MS-275诱导人肺腺癌A549细胞基因表达谱的变化。结果MS-275(2μmo·lL-1)处理A549细胞... 目的研究HDAC抑制剂MS-275对人肺腺癌A549细胞基因表达谱的影响,探讨MS-275抗肿瘤的分子机制。方法运用制备的包含8064个人类基因的cDNA芯片检测MS-275诱导人肺腺癌A549细胞基因表达谱的变化。结果MS-275(2μmo·lL-1)处理A549细胞16h后,cDNA芯片分析筛选出MS-275对A549细胞的影响基因803个,其中上调基因440个,下调基因363个,其中包括许多与细胞凋亡、细胞分化、DNA修复等相关基因如p21、DR6。结论MS-275通过外源性凋亡信号、内源性凋亡信号和细胞周期阻滞等多种分子机制诱导A549细胞凋亡。 展开更多
关键词 ms-275 A549细胞 基因芯片 表达谱分析
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运用GC-MS代谢谱研究AMPKα_2基因与2型糖尿病的关系
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作者 杨常成 范伟 梁逸曾 《中南药学》 CAS 2014年第8期739-742,共4页
目的探究AMPKα2基因在代谢方面的作用。方法运用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)结合化学计量学方法中的多元分辨(SIA)和模式识别方法(PCA),对AMPKα2基因敲除(AMPKα2-KO)和C57BL/6 J小鼠血清的代谢物谱进行了全面研究。结果与对照组C57BL... 目的探究AMPKα2基因在代谢方面的作用。方法运用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)结合化学计量学方法中的多元分辨(SIA)和模式识别方法(PCA),对AMPKα2基因敲除(AMPKα2-KO)和C57BL/6 J小鼠血清的代谢物谱进行了全面研究。结果与对照组C57BL/6J小鼠相比,AMPKα2-KO小鼠的核糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、胆固醇含量明显下降,而α-羟基丁酸、β-羟基丁酸、亚油酸含量明显升高。结论 AMPKα2基因在糖和脂肪酸代谢方面具有重要的作用。 展开更多
关键词 AMPKα2 基因敲除 2型糖尿病 GC-ms
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MALDI-TOF MS鉴定酵母菌应用评价 被引量:4
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作者 张博筠 叶乃芳 王中新 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第4期501-504,共4页
目的评估MALDI-TOF MS鉴定酵母菌的能力。方法分别用VITEK MS和API ID 32C系统同时鉴定387株临床分离酵母菌。以ITS测序结果作为比较标准。比较MALDI-TOF MS、API ID 32C结果准确率。结果 VITEK MS鉴定酵母菌准确率为97.7%,API ID 32C... 目的评估MALDI-TOF MS鉴定酵母菌的能力。方法分别用VITEK MS和API ID 32C系统同时鉴定387株临床分离酵母菌。以ITS测序结果作为比较标准。比较MALDI-TOF MS、API ID 32C结果准确率。结果 VITEK MS鉴定酵母菌准确率为97.7%,API ID 32C鉴定准确率为93.0%,差异有统计学意义(χ~2=9.439,P=0.002);MALDITOF与ITS测序相比,差异无统计学意义。结论 MALDITOF可对临床常见酵母菌快速、准确鉴定到种。 展开更多
关键词 酵母样真菌 ITS基因测序 MALDI-TOF ms
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MALDI-TOFMS在氯吡格雷基因多态性检测中的应用 被引量:2
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作者 邓卿 伊远学 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第5期543-547,共5页
目的探讨基因多态性与氯吡格雷个体化用药的相关性及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在氯吡格雷基因多态性检测中的应用价值。方法选取2015-2017年武警重庆总队医院住院的急性冠状动脉综合征(ACS)及拟进行经皮冠状动脉... 目的探讨基因多态性与氯吡格雷个体化用药的相关性及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在氯吡格雷基因多态性检测中的应用价值。方法选取2015-2017年武警重庆总队医院住院的急性冠状动脉综合征(ACS)及拟进行经皮冠状动脉介入术(PCI)的患者160例,在氯吡格雷抗血小板治疗后第5天测定血小板聚集率;同时采用MALDI-TOF MS技术检测CYP2C19*2*、CYP2C19*3、CYP2C19*4、CYP2C19*5、CYP2C19*17和ABCBI、PON1、CES1基因多态性。结果根据血小板最大聚集率(MAR)将研究对象分为氯吡格雷抵抗(CR)组(n=75)和非氯吡格雷抵抗(NCR)组(n=85)。160份样本等位基因检出率为100%,两组均未发现CYP2C19*4、CYP2C19*5、CYP2C19*17突变;携带CYP2C19*2等位基因A及CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3代谢型发生氯吡格雷抵抗的风险较高,携带ABCB1等位基因A的GA、AA代谢型发生氯吡格雷抵抗风险较高,携带PON1等位基因T的CT、TT代谢型发生氯吡格雷抵抗的风险较高,携带CES1等位基因T的CT、TT代谢型发生氯吡格雷抵抗的风险较低,差异均有统计学意义(P<0.05);携带CYP2C19*3等位基因A发生氯吡格雷抵抗风险较高,CYP2C19*3/*3型发生氯吡格雷的风险较低,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CYP2C19*2、ABCBI、PON1基因突变增加氯吡格雷抵抗的风险,CES1基因突变降低氯吡格雷抵抗风险;MALDI-TOF MS具有准确性高、检测通量大、速度快、成本低等特点,适用于氯吡格雷基因多态性检测,指导临床个体化用药。 展开更多
关键词 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 氯吡格雷 基因多态性
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Study on Quality Improvement Effect and Separate Character of Soybean Male Sterile (MS1) Recurrent Selection Population 被引量:2
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作者 ZHAO Shuang-jin ZHANG Meng-chen JIANG Chun-zhi YANG Chun-yan LIU Bing-qiang CUI Jue 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2007年第5期545-551,共7页
To solve the problem that soybean has narrow genetic base, we constructed a series of male sterile recurrent selection populations, and studied the effects of quality improvement and practical value. An LD-base popula... To solve the problem that soybean has narrow genetic base, we constructed a series of male sterile recurrent selection populations, and studied the effects of quality improvement and practical value. An LD-base population, which fits to our ecology type was constructed by 6 years' gene enrichment through the introduction of new genes from 23 local varieties and recurrent selection. The LD-base populations were then improved by making crosses with high protein and high oil genotypes. As a result we obtained a high protein sub-population (db) and a high oil sub-population (gy), For the db sub-population, the protein content is 1.18% higher than the base population, 22.38% of the individuals contain 45% or more of protein, which is 10.99% higher than the base population. For the gy sub-population, oil content is 0.24% higher than the base population. Individuals with oil content of 20% or more are 11.05% higher than the base population. The quantitative characters such as flowering date, mature date, pod habit, and hilum color, etc., all showed wide range of separation, and the segregation ratio approached balance. The c.v. of branch number of ms1 recurrent population (72.8%) is higher than general cross-population (57.3%), and the c.v. of 100 seed weight of ms1 (18.1%) is higher than general cross population (16.5%), the coefficient of variation of plant height, pods per plant, and seeds per pod were not significantly different. It was demonstrated in this paper that the quality character of ms 1 male sterile recurrent selection population was improved by adding new genes. And the segregation of other characters widened, making the populations suitable for the objective of soybean breeding. In this paper, we also discussed the breeding method, key technology, and selection effect of soybean ms 1 population. 展开更多
关键词 SOYBEAN recurrent selection population ms 1 gene quality improvement segregating characteristics
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ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS进行K-ras基因分型 被引量:1
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作者 刘忠臣 郑薇薇 李庆阁 《中国肿瘤》 CAS 2005年第4期256-260,共5页
[目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[结果]在相同的扩增条件下,采用A... [目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[结果]在相同的扩增条件下,采用ARMS实时PCR方法,第一个位点的野生型和突变型的ΔCt值至少为,但第8二个位点野生型和突变型的ΔCt值仅为1~2左右。第二个位点改用MALDI鄄TOF-MS分型方法,采用一条公用引物和dATP,ddTTP,ddCTP和ddGTP的混和物,12密码子第二位点基因分型可以准确检测。[结论]ARMS实时PCR方法分析速度快,操作简便,但它需要合适的反应条件及高质量模板。MALDI-TOF-MS分型方法虽然步骤较多,但准确度高,反应体系稳定并具有高通量潜力。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 扩增阻碍突变系统方法 实时PCR 基因分型 K-RAS基因 基因突变
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用gap基因和MALDI-TOF MS技术对临床常见凝固酶阴性葡萄球菌快速分子鉴定 被引量:3
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作者 翟鑫 冯柏娥 +1 位作者 张雪静 刘朝军 《转化医学杂志》 2019年第4期237-239,244,共4页
目的研究旨在通过对比gap基因和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)蛋白质质谱鉴定,建立对临床常见凝固酶阴性葡萄球菌( coagulase negati... 目的研究旨在通过对比gap基因和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)蛋白质质谱鉴定,建立对临床常见凝固酶阴性葡萄球菌( coagulase negative staphylococcus,CNS )的快速分子学鉴定。方法用gap基因对临床常见 CNS 进行扩增和测序,获得序列在GenBank中进行比对,构建进化树进行同源分析,同时与MALDI-TOF MS蛋白质质谱鉴定比较。结果Gap基因相似率为39%~98%,有足够序列差异区分 CNS 。进化树同源分析显示, CNS 分类具有较高的可信度(大于77%);MALDI-TOF MS蛋白质质谱鉴定与gap基因鉴定符合率为100%。结论MALDI-TOF MS蛋白质质谱鉴定可以用于 CNS 的快速、准确鉴定,比传统方法和分子方法具有优势。 展开更多
关键词 Gap基因 MALDI-TOFms 凝固酶阴性葡萄球菌 鉴定
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