益生菌及肠内外营养对重症急性胰腺炎大鼠肠道黏附分子及免疫屏障的影响

目的:观察益生菌及肠外、肠内营养对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道黏附分子MAdCAM-1及免疫屏障的影响.方法:经胆胰管逆行注射50g/L牛磺胆酸钠制作SAP模型24h后,分别给予肠外营养(PN组),肠外+肠内营养(PN+EN组),肠外+肠内营养+益生菌(益生菌组),持续6d,7d时处死,检测腹腔脏器组织菌群易位率,免疫组化法测定末端回肠和Peyer结MAdCAM-1,CD4,CD8,IgA.结果:益生菌组、PN+EN组CD4、CD8T细胞数量及IgA,MAdCAM-1表达高于PN组(P<0.05);益生菌组Peyer结MAdCAM-1,CD8表达高于PN+EN组(P<0.05).PN组菌群易位率(70.2%)、7d死亡率(75.6%)高于益生菌组(27.5%,50.0%)、PN+EN组(30.5%,52.4%)(P<0.01或P<0.05),但后两组间差异无显著性意义.结论:EN能增加MAdCAM-1表达,提高SAP时肠免疫屏障,减少菌群易位,提高生存率.加用益生菌后总体改善不明显.

清肠栓对三硝基苯磺酸诱导结肠炎大鼠结肠黏膜地址素细胞黏附分子-1表达的影响

目的:探讨黏膜地址素细胞黏附分子-1(MAdCAM-1)在三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠结肠炎发病过程中的作用;研究清肠栓是否通过抑制MAdCAM-1在结肠黏膜的表达,而发挥其抗炎愈疡作用.方法:用TNBS制备实验性大鼠结肠炎模型,大鼠随机分为清肠栓高剂量组、清肠栓低剂量组、柳氮磺胺吡啶组(SASP)、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组及正常组.模型Ⅰ组造模3d时,其余5组在给药7d时处死大鼠.取大鼠结肠病变部位标本,进行组织病理学评价,用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测结肠组织中LTB4和TNF-α水平,免疫组化染色法和Western blot分析法检测结肠黏膜MAdCAM-1蛋白表达.结果:造模3d时,模型Ⅰ组大鼠结肠黏膜出现明显组织损伤;经过7d处理后,清肠栓组大鼠黏膜组织损伤减轻.模型组结肠黏膜LTB4和TNF-α水平比正常组上升(436.38±66.56,396.81±69.43vs203.76±42.84;394.78±61.53,413.43±47.39vs233.84±55.24,均P<0.01);与模型Ⅱ组比较,各治疗组LTB4和TNF-α水平均下降,尤以清肠栓高剂量组下降明显(275.74±36.35,282.72±47.94,P<0.01).正常组大鼠结肠黏膜固有层MAdCAM-1可见少量表达,模型Ⅰ组大鼠结肠黏膜阳性染色细胞数明显增多;与模型Ⅱ组比较,清肠栓高剂量组、低剂量组和SASP组MAdCAM-1表达均明显下调,尤其在清肠栓高剂量组下调更为显著.结论:清肠栓通过抑制结肠黏膜促炎症因子LTB4和TNF-α释放,以及下调MAdCAM-1表达,而发挥其抗炎愈疡作用.

芪黄煎剂对胃切除大鼠肠淋巴细胞MAdCAM-1、ICAM-1及其mRNA表达的影响

目的观察大鼠胃切除术后小肠内滴注芪黄煎剂对黏膜地址素细胞黏附分子-1(mucosal addressin cell adhension molecule-1,MAdCAM-1)与细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及其mRNA表达的影响。方法将60只SD大鼠分为3组,每组20只。假手术组大鼠仅行腹部皮肤切开后缝合手术,模型组大鼠胃切除后给予肠内营养液能全素,芪黄煎剂组大鼠胃切除后先给予芪黄煎剂再滴注营养液能全素。连续给药7d后,采用免疫组织化学法检测MAdCAM-1、ICAM-1蛋白表达水平,采用RTPCR荧光定量法检测MAdCAM-1、ICAM-1mRNA相对表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠PP结中MAdCAM-1、ICAM-1及其mRNA表达水平均明显下降(P<0.05);与假手术组比较,芪黄煎剂组大鼠PP结中MAdCAM-1、ICAM-1及其mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论芪黄煎剂能增加肠黏膜效应部位MAdCAM-1、ICAM-1及其mRNA表达水平,改善胃切除术后肠黏膜免疫屏障功能。

黏膜地址素细胞黏附分子与溃疡性结肠炎

黏膜地址素细胞黏附分子(mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1)是一种选择性表达于肠道黏膜及其相关淋巴组织的血管内皮细胞表面的黏附分子,主要介导淋巴细胞向肠道黏膜部位定向归巢．在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的炎症部位MAdCAM-1表达明显增加．本文综述MAdCAM-1的分子结构、分布、生物学功能及其在UC发病中的作用,要重视其作为UC潜在治疗靶标的意义．

黏膜地址素细胞黏附分子-1的表达与胃癌的关系

目的探讨黏膜地址素细胞黏附分子-1(MadCAM-1)的表达与胃癌发生的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测50例行胃癌根治术所收集的癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织中MadCAM-1的表达情况。结果MadCAM-1表达率在正常胃黏膜、癌旁组织和癌组织中分别为78%(39/50)、64%(32/50)和40%(20/50)。癌组织中的阳性表达率明显低于正常组织(P<0.01)和癌旁组织(P<0.01);而正常组织与癌旁组织之间差异无统计学意义(P>0.05);MadCAM-1阳性表达率低年龄组(<45岁)表达低于高年龄组(>45岁,P<0.05);MadCAM-1的阳性表达率与Borrmarn分型、肿瘤部位、肿瘤大小及癌细胞的浸润深度和分化程度无关(P>0.05)。结论MadCAM-1参与肿瘤局部免疫过程,与胃癌发生有关。

维多珠单抗治疗炎症性肠病的机制与临床应用研究进展

炎症性肠病(IBD)是一类病因未明的肠道慢性复发性炎症性疾病,其治疗仍以传统药物为主。由于传统药物不良反应较明显,近年来衍生出多种生物制剂,如抗肿瘤坏死因子(TNF)制剂、整合素拮抗剂等。作为一种人源化的抗α4β7整合素单克隆抗体,维多珠单抗(Vedolizumab)通过抑制α4β7整合素与黏膜地址素细胞黏附分子-1(MAdCAM-1)相互作用,选择性阻断记忆T细胞向炎症肠道组织转运,减轻肠道炎症反应,因而主要用于对抗TNF生物制剂失效的IBD患者。本文对维多珠单抗治疗IBD的机制、临床疗效及安全性进行综述。

MadCAM-1与整合素β7免疫细胞浸润在食管癌发生中的作用

目的探讨M adCAM-1(m ucosal addressin cell adhesion m olecu le-1)的变化及整合素β7免疫细胞浸润在食管癌发生中的作用。方法用免疫组织化学SP法,检测50例行食管癌根治术所收集的癌组织、癌旁组织、正常食道黏膜组织中M adCAM-1与免疫细胞上整合素β7的表达。结果M adCAM-1表达率在正常食道黏膜、癌旁组织及癌组织中分别为78%(39/50),64%(32/50)和40%(20/50)。癌组织中的阳性表达率明显低于正常组织(P<0.01)和癌旁组织(P<0.01);而正常组织与癌旁组织之间差异无统计学意义(P>0.05);M adCAM-1阳性表达患者中在低年龄组(<45 y)中的表达低于高年龄组(>45 y)(P<0.05);M adCAM-1阳性表达率与TNM分型、肿瘤部位、肿瘤大小及癌细胞的浸润深度和分化程度无关(P>0.05)。M adCAM-1阳性表达组中β7免疫细胞数量癌组织中明显低于癌旁及正常组织(P<0.01)。结论M adCAM-1参与肿瘤局部免疫过程,与食管癌发生、发展有关。食管癌组织中M adCAM-1的表达减少,β7免疫细胞浸润减少。提高M adCAM-1表达是肿瘤免疫治疗的一种方法。

黑炭与铅联合暴露致Z310细胞黏附分子表达变化

目的探讨黑炭与铅联合暴露对大鼠脉络丛上皮细胞系Z310细胞中细胞黏附分子表达和调控细胞黏附分子的微小RNA(miRNA)影响。方法(1)将Z310细胞随机分为对照组、黑炭暴露组、铅暴露组和联合暴露组,铅暴露组、黑炭暴露组细胞分别予剂量为10μmol/L的乙酸铅和10 mg/L的黑炭染毒,联合暴露组予上述剂量的黑炭与乙酸铅染毒;12.0 h后,采用蛋白印迹法检测Z310细胞中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、黏膜血管地址素细胞黏附分子-1(MAdCAM-1)的蛋白表达,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测调控ICAM-1基因的miR-326、miR-328-3p和miR-542-3p的表达。(2)将Z310细胞或miRNA-326 mimic转染成功的Z310细胞随机分为对照组、miRNA-326转染对照组、联合暴露组和miRNA-326转染联合暴露组,2个对照组细胞均不予染毒处理,2个联合暴露组均予剂量为10 mg/L的黑炭染毒和10μmol/L的乙酸铅染毒12.0 h,采用蛋白印迹法检测ICAM-1的蛋白表达。结果(1)黑炭暴露组细胞中的ICAM-1、VCAM-1、MAdCAM-1和铅暴露组细胞中ICAM-1蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05);联合暴露组细胞中ICAM-1和MAdCAM-1蛋白相对表达水平分别高于其余3组(P值均<0.05),VCAM-1蛋白相对表达水平均高于对照组和铅暴露组(P值均<0.05)。黑炭暴露组和铅暴露组细胞中miR-326相对表达水平均低于对照组(P值均<0.05),联合暴露组细胞中miR-326相对表达水平分别低于其余3组(P值均<0.05);4组细胞中miR-328-3p和miR-542-3p相对表达水平比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(2)ICAM-1蛋白相对表达水平在miR-326转染对照组细胞中低于对照组(P<0.05),在联合暴露组、miR-326转染联合暴露组细胞中均高于对照组和miR-326转染对照组(P值均<0.05),在miR-326转染联合暴露组细胞中低于联合暴露组(P<0.05)。结论黑炭与铅单独暴露均可导致Z310细胞中ICAM-1、VCAM-1、MAdCAM-1表达不同程度的上调;黑炭与铅联合暴露对ICAM-1和MadCAM-1表达上调具有协同作用,以ICAM-1变化最为显著。黑炭与铅联合暴露可能通过下调miR-326表达进而上调ICAM-1蛋白的表达。

参青方对溃疡性结肠炎大鼠黏膜地址素细胞黏附分子表达的影响

目的探讨参青方治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法采用三硝基苯磺酸灌肠诱导建立大鼠溃疡性结肠炎模型。SD大鼠60只,随机分为正常组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、美沙拉嗪组、参青方低剂量组、参青方高剂量组共6组,每组10只。运用免疫组织化学染色、RT-PCR、Western-blot实验技术检测模型大鼠结肠黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)的表达。结果正常组大鼠结肠黏膜MAdCAM-1可见少量表达,模型组MAdCAM-1蛋白表达与基因转录量均高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01);参青方高、低剂量组及美沙拉嗪组与模型Ⅱ组比较,MAdCAM-1的表达均明显下调,差异具有统计学意义(P<0.01),且以参青方高剂量组降低趋势更为明显。结论参青方具有治疗大鼠溃疡性结肠炎的作用,其机制与降低MAdCAM-1在结肠黏膜的表达有关。

肠移植早期黏膜地址素细胞黏附分子在大鼠移植小肠及其肠系膜淋巴结的表达

目的探讨黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)在大鼠小肠移植早期移植肠及其肠系膜淋巴结中的表达及意义。方法选用近交系F_(344)/N和BN大鼠建立全小肠异位移植模型后分3组：第1组,非手术对照组(F_(344)/N)；第2组,同基因移植组(F_(344)/N→F_(344)/N)；第3组,异基因移植组(BN→F_(344)/N)。术后1、3、5、7 d取各组移植肠及其肠系膜淋巴结检测MAdCAM-1表达的分布及变化,同期进行移植肠组织病理学检查。结果同基因移植组各检测时点的肠黏膜组织表现与正常小肠的组织学特征基本相同；异基因移植组肠黏膜组织表现符合轻→中→重度排斥反应的渐进过程,2周后移植肠绒毛变的低平,散在黏膜上皮脱落,移植肠相关肠系膜淋巴结萎缩明显。MAdCAM-1在急性排斥反应期,高表达于移植肠固有层及其肠系膜淋巴结,特别是高表达于肠黏膜固有层中的扁平血管内皮细胞表面。同基因移植组术后MAdCAM-1的表达在1-7 d均无明显量的变化；而异基因移植组MAdCAM-1在移植肠中的表达呈上升趋势,而在其肠系膜淋巴结中的表达呈下降趋势。结论MAdCAM-1与小肠移植急性排斥反应的进展关系密切。

肠血管活性多肽或生长抑素对多器官功能障碍综合征鼠肠黏膜MAdCAM-1表达的影响

目的探讨肠血管活性多肽（VIP）或生长抑素（SST）对多器官功能障碍综合征（MODS）大鼠小肠黏膜地址素黏附分子-1（MAdCAM-1）表达的影响及其对MODS防治的意义。方法36只雄性Wistar大鼠随机分为6组（每组6只），包括对照组（正常大鼠）、VIPI组和SST1组（分别经VIP和SST处置的正常大鼠）、MODS组（MODS大鼠）、VIP2组和SST2组（分别经VIP和SST处置的MODS大鼠）。采用肠缺血再灌注方法制作MODS大鼠（出现全身炎症反应，〉2个器官功能障碍）模型。VIP或SST以0．2ρmol·g^-1·h^-1静脉输入和0．25ρmol／g腹腔注入大鼠体内。各组收集的肠淋巴细胞用^51Cr标记后回输入大鼠体内，γ计数器测定其在肠相关淋巴组织（GALT）的数量分布；Western blot测定各组小肠黏膜MAdCAM-1的表达；组织化学法观察各组小肠黏膜组织学变化。数据采用t检验进行分析。结果VIP1组和SST1组小肠弥散淋巴组织MAdCAM-1表达的峰浓度值分别为（157．67±2．52）、（154．33±3．22），Peyer＇s结为（136．00±1．00）、（137．00±1．00），较对照组[（165．33±1．53）、（152．67±2．31）]无显著改变（P〉0．05）；归巢至小肠弥散淋巴组织^51Cr-细胞量占总^51Cr-细胞量的1．04％±0．59％、1．01％±0．83％，较对照组（1．07％±0．61％）无显著改变（P〉0．05）；Peyer＇s结为1．83％±0．90％、1．56％±0．64％，显著低于MODS组[（3．85％±2．02％），P〈0．05]。VIP2组和SST2组小肠弥散淋巴组织MAdCAM-1表达的峰浓度值分别为（158．00±2．65）、（154．33±1．53），Peyer＇s结为（156．33±1．53）、（151．33±2．31），较MODS组[（175．33±2．52）、（173．00±2．65），P〈0．05]；归巢至小肠弥散淋巴组织^51Cr-细胞量占总^51Cr-细胞量的1．58％±0．42％、1．45％±0．26％，Peyer＇s结为2．14％±1．49％、0．81％±0．35％，显著低于MODS组[（3．23％±1．69％）、（5．04％±1．23％），P〈0．05]，并伴有肠黏膜组织学损害的减轻。结论增加MODS大鼠血循环中的VIP或SST，可通过抑制肠黏膜MAdCAM-1表达，减少肠淋巴细胞归巢至GALT，减轻MODS时肠黏膜的炎性损伤。

小鼠MAdCAM-1分子剪切体的克隆及表达

目的 获得小鼠粘膜血管定居因子 (MAdCAM 1)分子剪切体cDNA ,并在原核细胞中进行有效表达。方法 从BALB/c小鼠的肠系膜淋巴结中提取总RNA ,利用RT PCR方法获得小鼠MAdCAM 1分子剪切体cDNA ,构建原核表达载体并进行表达 ,纯化融合蛋白制备多抗。结果 核酸序列分析表明获得了正确的小鼠MAdCAM 1分子剪切体cDNA ;小鼠MAdCAM 1剪切体以融合蛋白的形式得到表达 ,主要以包涵体形式存在 ;免疫印迹分析表明 ,小鼠MAdCAM 1剪切体蛋白可被小鼠MAd CAM 1分子的标准单抗及自制多抗识别。结论 小鼠MAdCAM 1剪切体cDNA、表达蛋白及多抗的获得 ,为进一步研究该分子的生物学活性做好准备。