mdr1和GSTπ基因缄默逆转K562/A02细胞多药耐药性的研究

目的研究短发夹状小分子干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)对白血病多药耐药细胞株K562/A02 mdr1和谷胱甘肽S-转移酶(GST)π基因的表达和功能的影响.方法根据mdr1mRNA第79～99位和GSTπ mRNA第308～327位核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的shRNA,克隆入pSilencer2.1-U6 neo,克隆产物为pSilence-mdrl和pSilence-GSTπ,转染K562/A02细胞株.用实时荧光定量PCR检测K562/A02细胞mdr1和GSTπ mRNA的表达;MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC50).结果经pSilence-mdr1转染后的K562/A02细胞mdr1 mRNA表达量下降了71.5%,从(2.80±1.65)×108拷贝/μgRNA下降至(3.90±2.37)×107拷贝/μg RNA(P＜0.01);同时pSilence-GSTπ作用后,K562/A02细胞GSTπ mRNA表达量较对照组下降了39.8%,从(2.30±1.14)×105拷贝/μg RNA下降至(5.40±2.45)×104拷贝/μg RNA(P＜O.01);空载体转染后阿霉素的耐药指数为23,pSilence-mdr1转染后为8,pSilence-GSTπ转染后为10,差异有统计学意义(P＜0.01).结论shRNA可有效逆转K562/A02细胞mdr1和GSTπ的多药耐药性.

多重耐药鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶基因及插入序列ISAba1的检测

检测分析鲍曼不动杆菌的耐药性,了解多重耐药鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶基因的流行特征,探究插入序列ISAba1与其耐药性的关系。采用琼脂二倍稀释法检测83株多重耐药鲍曼不动杆菌的药物敏感性;采用PCR检测β-内酰胺酶基因及ISAba1-OXA-23-like、ISAba1-OXA-51-like、ISAba1-ADC的基因连锁。83株多重耐药鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物的耐药率非常高。β-内酰胺酶基因TEM、SHV、NDM-1、ADC、DHA、OXA-23-like、OXA-51-like、OXA-58-like,检出率分别为83.1%(69株),91.6%(76株),2.4%(2株),100%(83株),1.2%(1株),95.2%(79株),100%(83株),4.8%(4株);ISAba1-OXA-23-like,ISAba1-OXA-51-like,ISAba1-ADC的连锁检出率分别为92.8%(77株),22.9%(19株),80.7%(67株)。多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药十分严重,携带多种β-内酰胺酶及插入序列ISAba1是本组测试菌耐药的主要原因。