多位点序列分析揭示我国16SrI组植原体不同株系间遗传变异和系统发育关系（英文）

【目的】16SrI组植原体对我国作物和生态植物危害严重。目前植原体尚不能分离培养,对于我国植原体不同株系间遗传变异和种群结构尚不清晰,通过多位点序列分析(MLSA)揭示我国不同地区16SrI组不同植原体株系的遗传多样性及其地理分布特征,比较不同植原体株系间不同持家基因的变异程度,为我国不同植原体株系的检测、分类鉴定和系统发育研究提供一定的参考方法和依据。【方法】应用rp,tuf,secA,secY,ipt,dnaK,fusA,gyrB,pyrG和rpoB共10个持家基因序列,结合16S rDNA序列,以全基因序列已完成的洋葱黄化植原体(OY-M)、翠菊黄化丛枝植原体(AYWB)、澳大利亚葡萄黄化植原体(CPA)、草莓致死黄化植原体(SLY)和苹果簇生植原体(CPM)共5种植原体株系为参照,分析我国10个省(市)苦楝丛枝、莴苣黄化、桑萎缩、泡桐丛枝和长春花绿变植原体株系(共18株)的遗传变异规律和系统发育关系,通过多重序列比对分析不同基因片段的序列多态性和变异程度。【结果】我国18株苦楝丛枝、莴苣黄化、桑萎缩、泡桐丛枝和长春花绿变植原体株系的rp,tuf,secA,secY,ipt,dnaK,fusA,gyrB,pyrG和rpoB多位点序列共有15种序列类型,从而揭示16SrI组不同植原体株系间丰富的遗传多样性。基于rp等10个基因多位点序列分析可将16SrI-B、D亚组的不同植原体株系清晰地分开。10株苦楝丛枝植原体株系与2株桑萎缩植原体株系系统发育关系最近,多位点序列分析可将这2种基于16S rDNA序列难以区分的植原体株系清晰地区分。10株苦楝丛枝植原体株系分为4个进化枝,其多位点序列存在8种序列类型,这4个分枝与植原体株系的地理分布关系密切。与我国长春花绿变和泡桐丛枝植原体株系相比,福建三明2株莴苣黄化植原体株系与日本洋葱黄化植原体株系OY-M系统发育关系较近。在已检测分析的植原体不同基因序列片段中,dnaK基因序列片段的变异水平最高。【结论】多位点序列分析可做为一种对植原体鉴定、区分以及株系遗传多样性全面检测的有效、可靠方法。在以后的研究中该方法可广泛应用于深入探讨植原体不同组间或亚组间株系的遗传变异和系统发育关系。

一株凡纳滨对虾病原弧菌的分离鉴定与毒力分析

2012年6∽9月福建省沿海城市凡纳滨对虾养殖高位池发生病害，主要症状表现为肝胰腺发白肿大，空肠，死亡率50％以上．本研究对发病现场患病对虾的肝胰腺进行了微生物分离鉴定， BOX-PCR 鉴定所分离的菌株为一株优势细菌，编号为1937．通过16S rRNA 基因分析确定该菌株为弧菌属（Vibrio sp．）．进一步基于 rpoD、topA 和 toxR 3个基因的多位点序列分析（MLSA），表明该菌株为副溶血弧菌（Vibro parahaemolyticus）．从该菌株中还扩增获得副溶血弧菌特异性的溶血素基因．人工浸浴感染试验表明，菌株1937对凡纳滨对虾后期幼体表现出较强致病性，半致死浓度为1．33×106 cfu ／cm3．肌肉注射感染试验表明该菌株对凡纳滨对虾成虾也具有致病性，半致死浓度为1．42×106 cfu ／cm3，并且注射后成虾肌肉白浊，肝胰腺发白，致死率高于其他已报道的致病性弧菌，该菌株极有可能为此次发病的主要病原菌．抗生素试验表明，该菌株对诺氟沙星等29种抗生素中的20种比较敏感．这些研究结果对于该病原菌导致的虾病暴发的防控有参考价值．