Actional Mechanism of Trifluoroacetic Acid for the Separation of Biopolymers by Reversed-phase Liquid Chromatography

The present paper covers the actional mechanism of trifluoroacetic acid for the separation of biopolymers investigated by using the parameters of stoichiometric displacement model for retention(SDM-R) in reversed-phase liquid chromatography. It was found that the trifluoroacetic acid(TFA) may participate in, or stimulate the association among displacing agent molecules in mobile phase, and decrease the affinity of both the associate molecules of the displacing agent and the TFA-protein ion-pairing. The former dominates over the separation selectivity of biopolymers as the concentration of TFA is lower than a given value, and the two contrary functions partly offset to each other and the latter dominates as its concentration is greater than the given value.

免疫磁珠净化/高效液相色谱检测植物油中黄曲霉毒素含量

采用基于免疫磁珠净化的高效液相色谱技术测定植物油中黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))、黄曲霉毒素B_(2)(AFB_(2))、黄曲霉毒素G1(AFG1)和黄曲霉毒素G_(2)(AFG_(2))含量。样品以甲醇-水(70∶30,体积比)提取后,经黄曲霉毒素总量免疫磁珠试剂盒净化,并结合免疫磁珠自动工作站,显著提升了净化效率。4种黄曲霉毒素在一定质量浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数(r^(2))均大于0.99,AFB_(1)与AFB_(2)、AFG1与AFG_(2)的定量下限分别为0.05μg/kg和0.10μg/kg。4种毒素在5种商品植物油基质中的平均回收率为74.0%~96.0%,日间和日内相对标准偏差(RSD)均小于7.0%。所建立的方法与国标GB 5009.22-2016的免疫亲和柱法无显著性差异,方法准确、灵敏,适用于植物油中4种黄曲霉毒素的同时定量分析。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定化妆品中二硬脂基二甲基氯化铵

建立了测定多种化妆品中二硬脂基二甲基氯化铵(DSDMAC)含量的高效液相色谱-蒸发光散射分析方法。样品经乙腈水溶液(体积比2∶1)超声分散后,加入氯化钠进行振荡提取,取上层有机相分析。采用AcclaimTM Surfactant柱(150 mm×4.6 mm,5µm)分离,以乙腈和100 mmol/L乙酸铵水溶液(pH 5.5)为流动相进行梯度洗脱,外标法定量。结果表明,该类化合物可在18 min内实现有效分离,在10~200 mg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数(r^(2))为0.9994,检出限(LOD,S/N=3)和定量下限(LOQ,S/N=10)分别为3.27 mg/kg和9.96 mg/kg。在100、500、1000 mg/kg加标水平下,卸妆油等10种典型空白样品的平均回收率为82.5%~101%,相对标准偏差(RSD,n=6)均不大于6.3%。采用该方法对133个市售样品进行检测,1个乳液样品中DSDMAC的测定值超出法规要求。该方法精密度好,准确度高,适用于各种化妆品中DSDMAC的测定,可为化妆品的质量安全监测提供技术支持。

利用高分辨率液相色谱串联质谱方法分析M1、M2型巨噬细胞的甘油三酯脂质谱组成

目的通过高分辨率液相色谱串联质谱方法分析M1、M2型巨噬细胞的甘油三酯脂质谱组成,揭示脂质代谢尤其是甘油三酯在巨噬细胞极化过程中的作用。方法采用小鼠骨髓细胞来源的巨噬细胞极化得到M1、M2型巨噬细胞,实时定量聚合酶链反应方法检测其极化标志基因的表达,使用高分辨率液相色谱串联质谱方法检测M0、M1、M2型巨噬细胞的甘油三酯脂质谱,对比分析不同极化状态巨噬细胞之间的差异。结果共检测到61种甘油三酯脂质分子。甘油三酯总体水平在M1型巨噬细胞中显著上调,而在M2型巨噬细胞中显著下调。在M0、M1、M2型巨噬细胞中检测到的甘油三酯分子绝大多数是长链甘油三酯。长链不饱和甘油三酯在M1型巨噬细胞中显著上调,在M2型巨噬细胞中显著下调。结论巨噬细胞极化导致其甘油三酯脂质谱组成显著改变。

饲料中四环素类药物UPLC检测方法的建立

建立了一种四环素类药物(土霉素、四环素、强力霉素、金霉素)在饲料中残留的超高效液相色谱(UPLC)分析方法。样品提取液选用浓度为0.1 mol/L的Na_(2)EDTA-Mcllvaine。四种药物在0.1~5.0μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数R2大于0.999。检出限(LOD)为0.5 mg/kg,定量限(LOQ)为1.0 mg/kg。加标的平均回收率分别为土霉素86.2%~88.4%,四环素82.1%~88.5%,强力霉素70.1%~78.1%,金霉素71.2%~74.5%,相对标准偏差(RSD)≤6.0%(n=6)。结果显示,该方法灵敏度高、重复性好、选择性强,适用于饲料中四环素类药物残留的定量检测。

超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱法快速筛查测定抗疲劳类保健食品中112种化学药

建立了一种超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱法(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)快速筛查测定抗疲劳保健中112种非法添加化学药物的方法。收集了现有补充检验方法规定的90种以及实际工作中发现的化学药共112种,利用Q-Orbitrap HRMS和Trace Finder软件采集并记录每种药物的信息,建立高分辨质谱数据库。样品采用90%甲醇(含0.1%甲酸)超声萃取,加热电喷雾电离源(H-ESI)、正离子扫描方式采集数据。通过数据库筛查和鉴定非法添加化学成分。分别对样品前处理、色谱、质谱条件进行优化,并考察了每种物质的检出限、定量下限、线性范围。结果表明,112种化合物的检出限为0.0125~0.0625 mg/kg,定量下限为0.025~0.125 mg/kg,相关系数(r^(2))均不低0.999,方法的线性关系良好,回收率为62.0%~124%,相对标准偏差(RSD)为2.4%~8.9%。方法可用于保健食品中非法添加化学药物的高通量快速筛查。利用全扫描结果,还能发现数据库以外的可疑化合物,鉴定新的非法添加物。方法已用于实际工作,适用于抗疲劳类保健食品及普通食品中非法添加化学药的快速筛查。

柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度和细胞内VCR蓄积的影响

目的:测定中药柴胡(BupleurumChineseDC,BCDC)提取物对人肝癌BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和长春新碱(Vincristine,VCR)浓度的影响,探索柴胡提取物逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法:以Fura2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL7402细胞内[Ca2+]i。高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL-7402后细胞内VCR蓄积情况的变化。结果:柴胡提取物可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001),可使细胞内VCR浓度升高(P<0.01)。结论:柴胡提取物可以增加VCR在BEL7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL7402细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)。钙离子通道阻滞作用可能为柴胡提取物逆转BEL7402细胞多药耐药的机制之一。

水中孔雀石绿、结晶紫残留量的同时测定

建立固相萃取-高效液相色谱法测定水中孔雀石绿、结晶紫的残留量。以硼氢化钾溶液将孔雀石绿、结晶紫还原为隐色孔雀石绿、隐色结晶紫,乙腈/二氯甲烷提取残留物,提取液依次通过酸性氧化铝柱/PRS柱净化、洗脱。结果表明:该方法能很好的除去水中的干扰物,方法回收率在84%～93%,隐色孔雀石绿的最低检出限为0.96μg/L,隐色结晶紫的最低检出限为1.02μg/L,适合于水中孔雀石绿、结晶紫的分析测定,具有良好的实验室应用前景。

橙色红曲菌As3.4384及其诱变体发酵产物中的桔霉素和色素的高效液相色谱研究

对橙色红曲菌As3.4384及其诱变菌株大米固态发酵物中桔霉素和色素的HPLC分离进行了优化,采用Symmetry C18(250mm×4.6mmi.d.,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(磷酸调pH3.0,77∶23,V/V),分别采用紫外检测器(UV=254nm)、荧光检测器(λex=331nm,λem=500nm)及两者串联对桔霉素和色素进行了监测。通过ESI-MS对色素进行了鉴定,并测定了经橙色红曲菌As3.4384及其诱变菌株于30℃发酵14d后的大米、糯米、小黄米、燕麦米和红米中桔霉素含量。结果表明:ESI-MS鉴定的两种色素分别为红曲菌素和红曲黄素,橙色红曲菌As3.4384发酵后的大米、糯米、小黄米、燕麦米和红米中桔霉素含量分别为151.4、100.5、5.06、80.5和150.5mg/kg,而诱变菌株发酵后的大米、糯米、小黄米、燕麦米和红米中桔霉素含量分别为0.218、3.86、0.223、2.45和4.05mg/kg。

高效液相色谱法测定3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂的活性

通过检测反应体系中烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)浓度的变化,建立了测定HMG-CoA还原酶抑制剂活性的HPLC法。使用Hypersil C18色谱柱,流动相V(K2HPO4-KH2PO4):V(甲醇)=4:1,pH7.2,流速1mL/min,柱温25℃,检测波长337nm。在NADPH浓度为0.5～100μmol/L时,其浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9995);检出限为0.01μmol/L;方法对NADPH的回收率为99.8%～100.7%;相对标准偏差(RSD)为1.04%～1.25%(n=5)。

没食子酸丙酯在麻醉大鼠体内的药物代谢动力学

用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）测定大鼠给予没食子酸丙酯（ＰＧ）３０ｍｇ·ｋｇ－１后０．５，１．５，３．５，７．０，１０．０和３０．０ｍｉｎ的血浆浓度，分析所得血药－时浓度曲线符合二室开放性模型。大鼠ｉｐ双－对硝基苯磷酸酯钠（ＢＮＰＰ）３．４ｍｇ·ｋｇ－１，再ｉｖＰＧ３０ｍｇ·ｋｇ－１，所测ＰＧ血浆浓度与对照组有显著不同，其药物代谢动力学参数ｔ１／２α，ｔ１／２β，ｋ１０，ＡＵＣ以及ＭＲＴ（０－Ｉｎ）均较对照组延长或增加，两组间各参数比较均有显著或非常显著性差异；而ＣＬ也较对照组降低１倍；并且于ｉｖＰＧ５，１０及２０ｍｉｎ后其肝脏及血浆中ＰＧ含量也较对照组增高，两组之间比较均有显著性差异。结果表明ＢＮＰＰ对ＰＧ在大鼠体内的代谢速度有显著影响．

在线加压溶剂微提取-湍流色谱-高效液相色谱法同时测定管花肉苁蓉中3种苯乙醇苷

建立了在线加压溶剂微提取-湍流色谱-高效液相色谱(online PLME-TFC-HPLC)法,并将其应用于管花肉苁蓉中松果菊苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷3种苯乙醇苷类成分含量的同时测定。微量样品粉末(0.5 mg)置于空预柱芯中并用正相硅胶填充,得到提取池后装入预柱套(Security Guard^(TM))。将预柱套置于70℃柱温箱中,将一根长聚醚醚酮(PEEK)管线(1 000 mm×0.13 mm)连于预柱套末端,采用0.1%(v/v)甲酸水为提取溶剂,以2.5mL/min的速度流经PEEK管线,产生高压,实现管花肉苁蓉的在线加压溶剂微提取,通过TurboFlow cyclone色谱柱在线净化和富集。引入两个电子六通阀,将整个分析过程分为提取阶段和洗脱阶段,并在洗脱阶段将TurboFlow cyclone色谱柱中的分析物反冲至Capcell PAK C_(18)AQ分析柱上,以0.1%(v/v)甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,以340 nm为检测波长同时定量分析松果菊苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷3种苯乙醇苷类成分。结果表明,3种苯乙醇苷类在1~200 mg/L范围内线性良好,相关系数r均大于0.999,定量限分别为0.50 mg/L(松果菊苷)、0.25 mg/L(毛蕊花糖苷)和0.38 mg/L(异毛蕊花糖苷),加标回收率为83.13%~114.00%,相对标准偏差为1.89%~13.34%。该方法简便、快速、可靠,不仅节约了药材和溶剂的使用量,而且极大地简化了前处理方法,省时省力,同时显著降低了化学成分在提取过程中降解的几率,适用于管花肉苁蓉中苯乙醇苷类化合物的含量测定。

多重机制杂质吸附萃取净化-快速液相色谱-串联质谱法测定鱼组织中11种同化激素

建立了准确、灵敏的鱼组织中11种同化激素(勃地酮、雄烯二酮、诺龙、美雄酮、甲睾酮、睾酮、醋酸睾酮、群勃龙、丙酸睾酮、康力龙、氟甲睾酮)的多重机制杂质吸附萃取净化-快速液相色谱-串联质谱的分析方法。鱼组织均质样品经甲醇提取后,在上清液中加入一定量的C18固体吸附剂、中性氧化铝吸附剂和氨基功能化纳米吸附剂实现快速净化。采用Shim-Pack XR-ODSⅡ色谱柱(100 mm×2.0 mm,2.2μm)分离,以乙腈(含0.1%甲酸)和水(含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子多反应监测(MRM)模式下检测,外标法定量。结果表明,11种目标化合物在线性范围内具有良好的线性关系,相关系数大于0.999,其在鱼组织中的检出限(S/N>3)为0.03～0.4μg/kg,定量限(S/N>10)为0.1～1.5μg/kg,平均回收率为80.9%～98.1%,相对标准偏差(RSD)为5.2%～11.5%。该方法简便、快速、准确,可用于鱼组织中同化激素的定性、定量监测。

高效液相色谱法分析武夷岩茶中的生物碱含量

选取10种典型武夷岩茶(5种肉桂和5种水仙)作为研究对象,以绿茶、铁观音和红茶为对照,通过高效液相色谱法检测样品叶片及冲泡茶汤中的可可碱、茶碱和咖啡碱含量,并依据各样品的生物碱含量进行主成分分析。试验结果发现,武夷岩茶叶片中的咖啡碱、可可碱和茶碱含量分别约占茶叶干重的2.341%,0.065%,0.011%,低于绿茶、铁观音和红茶;茶叶经过60s沸水冲泡后,约46.56%,46.36%,50.15%的咖啡碱、可可碱和茶碱溶于茶汤中。此外,通过主成分分析发现,武夷岩茶的3种生物碱含量与绿茶、铁观音和红茶的生物碱含量有显著差异。

一种高灵敏度的小檗碱高效液相色谱分析方法

根据在卤代烃类溶剂中的小檗碱在紫外线的激发下可产生强烈的荧光这一特性，采用正相色谱－荧光检测的方法建立了小檗碱的高灵敏度检测方法。色谱柱为ＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂＳＩ６０（５μ）２０ｃｍ×４．０ｍｍｉ．ｄ．。流动相为二氯甲烷－甲醇－二乙胺－冰醋酸（９０：９：０．４：０．５）。荧光检测波长Ｅｘ＝３６５ｎｍ，Ｅｍ＝５１０ｎｍ。方法的检测限为０．２ｎｇ（Ｓ／Ｎ≥２．５），在０．２ｎｇ～２０ｎｇ范围内具有良好的线性关系。

不同温度条件下抗菌素氟苯尼考在家蚕体内的药代动力学特征

氟苯尼考是新一代氯霉素类抗菌素,可用于家蚕细菌病防治。针对全年各养蚕季节环境温度相差较大的情况,研究不同环境温度下氟苯尼考在家蚕体内的药代动力学特征,为不同养蚕季节的蚕病防治合理用药提供科学依据。以500μg/m L氟苯尼考药液浸渍后的桑叶给不同温度条件下饲养的家蚕5龄第5天幼虫添食,采用高效液相色谱法(HPLC)检测添食药物后不同时间蚕体血浆中的药物浓度,经药理学计算软件DAS 2.0分析显示:给药后蚕体血浆中氟苯尼考的浓度不断上升,30℃处理区与24℃处理区的峰值分别出现在给药后3 h和4 h;添食3 h后停止给药,30℃处理区蚕体中的血药浓度逐渐下降,至停药1.5 h后低于24℃处理区。试验结果表明,氟苯尼考在家蚕体内不同时间的血药浓度变化受环境温度影响,高温环境下蚕体对药物的吸收快,但消除也快,故在夏秋蚕季高温环境下使用氟苯尼考防治家蚕细菌病,需要适当增加添食药物的浓度。

注射用头孢硫脒与四种常用注射液的配伍稳定性考察

目的 考察注射用头孢硫脒在4种临床常用注射液中的配伍稳定性.方法 根据《中华人民共和国药典》（2010版）规定的注射液pH值的上下限,调节0.9％氯化钠注射液、5％葡萄糖注射液、10％葡萄糖注射液以及5％葡萄糖＋0.9％氯化钠注射液的pH值,并按临床常用剂量,配制头孢硫脒与上述注射液及原pH值注射液的配伍溶液,考察上述12种配伍液于0、0.5、1、2、3、4、5、6h的pH值、颜色和澄明度等外观变化,用高效液相色谱法考察在上述时间点下配伍液中头孢硫脒的含量变化.该方法采用BDS-C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,磷酸盐缓冲液：乙腈（80∶20）为流动相,检测波长为254 nm,柱温为30℃,进样量1μl.结果 头孢硫脒专属性好,能达到基线分离,线性范围为1～12 mg/ml（R=1.0000）,日内精密度相对标准差＜2.0％,12种配伍液在6h内峰面积变化均＜4％.结论 头孢硫脒与不同pH值的0.9％氯化钠注射液、5％葡萄糖注射液、10％葡萄糖注射液以及5％葡萄糖＋0.9％氯化钠注射液配伍后稳定,临床上可配伍使用.

废水中萃取性石油烃的测定

建立了废水中萃取性石油烃(EPH)的液液萃取/硅酸镁净化/气相色谱分析方法,考察了溶剂萃取、萃取物净化和浓缩、气相色谱分析等条件。结果表明:活化硅酸镁净化过程中石油烃的回收率为99.7%～100.0%,不同浓度极性非烃模拟物棕榈酸甲脂或油酸甲脂的脱除率为90.7%～100%;酸碱条件下各萃取3次EPH的回收率为90.3%～92.5%;EPH空白加标回收率为92.0%,EPH基体加标回收率为81.5%,方法检出限为15.2gμ/L,某炼油厂废水6次测定的相对标准偏差为4.1%。

薄层色谱-氢火焰离子检测分析重质油的族组成

报道了薄层色谱-氢火焰离子检测法在重质油的族组成分析中的应用。方法可有效分离和检测重质油的族组成(饱和烃、芳香烃、胶质等)。该方法具有快速、准确、样品及溶剂用量少等特点。在一定试验条件下,原油的种类和实际点样量不影响氢火焰离子检测的响应值。

抗疟药伯喹的肝微粒体体外代谢的研究

以硅胶薄层层析和高效液相色谱分析法研究了伯喹的肝微粒体体外代谢的主要代谢产物谱。结果表明肝微粒体代谢可同时产生伯喹的喹啉环氧化代谢产物——5-羟基伯喹(5-OH PQ)与侧链氧化脱氨基代谢产物——羧酸伯喹(CPQ);定量比较研究表明在微粒体代谢中前者的生成量远大于后者。