犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡制备与评价

试验旨在快速检测犬巴贝斯虫抗体,利用胶体金免疫层析技术制备犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡并评价其功能性。将羊抗鼠免疫球蛋白G (IgG)和犬巴贝斯虫表面抗原Bg P47重组蛋白(Bg P47 Ag)包被于NC膜上分别做为质控线和检测线,胶体金标记的鼠IgG和鼠抗犬IgG均匀喷点在聚酯纤维膜上作为标记垫,将化学品配制的玻纤溶液均匀涂在样品垫上,并用吸水纸和PVC底板制备犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡,对其特异性、灵敏度、均一性、加速稳定性、实时稳定性进行评价,并与ELISA、PCR检测结果进行对比。结果显示,该检测卡不与犬莱姆抗体(lyme Ab)阳性犬血清、犬瘟热病毒抗体(CDV Ab)阳性犬血清、犬细小病毒抗体(CPV Ab)阳性犬血清、犬无形体抗体(Anaplasma Ab)阳性犬血清、犬三联疫苗阳性免疫犬血清样本发生交叉反应;可检测浓度稀释至1∶256倍的样本;有效期可达到24个月。研究表明,该检测卡可快速、准确地检测犬巴贝斯虫抗体,为动物临床诊断和治疗提供参考。

水产品中地西泮胶体金快速检测卡产品性能评估

对水产品中地西泮胶体金快速检测卡的可靠性及实用性进行评价。通过制备地西泮胶体金快速检测卡,对其检出限、抗干扰性、稳定性等进行测试。结果表明,检测卡对地西泮的最低检出限为0.5μg/kg;检测盲样时,检测卡的假阳性率<5%,假阴性率为0;样品检测结果与液相色谱-质谱法检测结果相符;检测卡不受外源性干扰物质的影响;试纸在室温保存1年,仍然具有良好的稳定性;且同一批次内、5个批次间稳定性良好。检测卡法具有快速、准确、方便、灵敏等特点,适用于基层对水产品中地西泮残留进行定性分析。

犬瘟热、犬细小病毒胶体金二联检测卡研制

本研究通过细胞融合、间接ELISA方法筛选出4株可稳定分泌犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制了一种可同时检测CDV和CPV的胶体金二联检测卡,并对其特异性、灵敏度及准确性进行了测试。结果显示:4株杂交瘤细胞可稳定传代,分泌的单克隆抗体纯度高,效价均在1:320以上。制备的胶体金二联检测卡特异性强,只与CDV和CPV产生特异性条带,而不与其他犬类病毒反应;灵敏度高,最低检测限可达到10^(2)拷贝/μL;准确性好,与荧光定量PCR结果的符合率高于88.0%,与市面上单一病毒检测卡的符合率高于97.2%。结果表明,本研究制备的CDV、CPV胶体金二联检测卡特异性强、灵敏度高、准确性好,兼具操作简便、肉眼可判读、结果易保存和无需特殊仪器设备等优势,可用于两种疾病的临床快速诊断和大规模检测工作。

市售胶体金检测卡在部分农药残留快检中的准确度分析

随着人们对食品安全问题的日益关注,农药残留检测成为研究焦点。胶体金检测卡因其便捷性在农药快检中受到青睐。本研究通过开展快速检测实验,对三大厂家的4种农药残留检测试剂盒(氟虫腈、百菌清、啶虫脒、克百威)的准确度进行了分析。结果显示,3家试剂盒在0%和30%的标称检出限加标浓度下检测结果均为阴性,100%的标称检出限加标浓度下检测结果均为阳性,证明了其产品具有较高的准确度。本次实验平行样品的实验结果均没有差异,且三大厂家结果一致,体现其稳定性。本次验证的胶体金检测卡在农药快速检测中的结果准确,有广泛的应用前景,可与其他技术结合以提升准确性。

检测梅毒的四种方法临床应用比较

目的比较梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验（TPPA）、梅毒酶联免疫吸附试验（TP—ELISA）、快速血浆反应素环状卡片实验（RPR）、胶体金快速检测试验（SYP）4种梅毒检测方法，选择一种适合医院梅毒检测的模式。方法（1）分别用以上四种方法检测滨州医学院附属医院门诊2012年10月。2013年5月间确诊为梅毒的患者135例，其中一期梅毒46例，二期梅毒39例，三期梅毒5例，潜伏梅毒45例。（2）2012年10月～2013年5月间我院住院患者术前或输血前抽取血样32066份，先用TP—ELISA法检测，发现阳性266例，再用TPPA、RPR、SYP法分别检测。结果（1）第一组试验结果：TPPA、ELISA、RPR、SYP四种梅毒检测方法的敏感度分别是98．78％、98．78％、78．52％、91．11％。TPPA、TP—ELISA间差异无统计学意义，TPPA、ELISA、RPR、SYP四种梅毒检测方法的前两种与后两种间以及后两种互相之间差异有统计学意义。（2）第二组试验结果：266例TP—ELISA阳性标本分别用TPPA、RPR、SYP法检测，阳性率分别是85％、69％、79％。TPPA、RPR、SYP三种试验彼此间差异有统计学意义。结论TPPA法适用于其他方法检测阳性后再进行确诊试验，或者工作量较小的医疗机构；RPR适合基层医院的梅毒筛查和治疗疗效观察；TP—ELISA法适合工作量较大的医疗机构进行初筛检验；SYP法适用于基层医院或急症检测，但检测后应用其它方法进行复检。

一种快速检测氟喹诺酮类药物的胶体金试纸卡的研制

利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中的氟喹诺酮类药物试纸卡,并配合胶体金试纸卡读数仪使用。结果表明,该试纸卡对恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星的检测限为20μg/L,对依诺沙星、恶喹酸的检测限为40μg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率均为0。该试纸卡能够准确、可靠、简便地检测牛奶中残留的氟喹诺酮类药物,适合大量样品的现场检测。

一种快速检测氟喹诺酮类药物的胶体金试纸卡——配合胶体金试纸卡读数仪使用

利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中的氟喹诺酮类药物试纸卡,并配合胶体金试纸卡读数仪使用,结果显示,该试纸卡对恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星的检测限为20μg/L,对依诺沙星、恶喹酸的检测限为40μg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率均为0。该试纸卡能够准确、可靠、简便地检测牛奶中残留的氟喹诺酮类药物,适合大量样品的现场检测。

食品中瘦肉精常用检测方法及快速检测技术研究进展

瘦肉精能加速畜禽体内的瘦肉生长,但会对人们健康造成威胁。综述了现有瘦肉精检测方法的研究进展,主要介绍了感官检测法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法的优劣,重点分析了瘦肉精快速检测方法,介绍常见瘦肉精胶体金快速检测卡优化和改进措施,为后续不断深入研发新型快速检测技术提供依据,确保消费者舌尖上肉制品的安全,推动肉类食品加工行业的可持续发展。

盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的研制

本文研究建立了一种检测盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的方法。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记盐酸克伦特罗与莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,盐酸克伦特罗与莱克多巴胺偶联OVA抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡。试验结果表明,该联检速测卡的灵敏度分别为CLEN 3 ng/mL、RAC 5 ng/mL,检测时间为3 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。

猪流行性腹泻病毒抗原免疫层析检测方法的建立与临床应用

本试验应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测猪粪便中流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,并应用于临床检测。用胶体金标记抗PEDV单克隆抗体B1,摸索与优化标记条件并制备成金垫;将抗PEDV的单克隆抗体B2和羊抗鼠IgG多克隆抗体喷在硝酸纤维素膜上,优化确定最佳包被浓度,组装成试纸条并做成带有样本采集部件的检测卡。结果表明,PEDV快速检测卡可检测最低病毒含量为100 TCID 50/mL;临床检测腹泻猪粪便样本,与PCR试剂盒结果对比,本检测卡灵敏度为94.7%,特异性为100%。表明该方法简单快速,结果准确,适合猪场现场采集发生腹泻的猪只粪便,及时检测猪发病感染情况。

胶体金免疫快速检测卡与酶联免疫法检测小麦中呕吐毒素的技术比较

以2016年新上市小麦为检测对象,采用胶体金免疫快速检测卡法和酶联免疫法对小麦中呕吐毒素含量进行测定,比较2种方法的符合率。结果表明:2种方法测定结果符合率达到93.4%。胶体金免疫快速检测卡操作简便快速,成本低,适用于新粮上市现场入库把关大量样品的快速初筛;而酶联免疫法检测时间较长,成本更高,更适合经胶体金免疫快速检测卡初筛后呈阴性样品的确证以及呕吐毒素含量的准确定量。

犬冠状病毒胶体金检测卡制备与评价

为快速检测犬冠状病毒,研究利用胶体金免疫层析技术制备和评价犬冠状病毒抗原检测卡。试验通过将胶体金标记的CCV Ab1和鼠IgG涂布于聚酯纤维膜上作为标记垫,生物素耦联的CCV Ab2处理在样品垫上,链霉亲和素和羊抗鼠IgG包被于NC膜上分别为检测线和质控线,与吸水纸和PVC底板制备犬冠状病毒抗原胶体金检测卡,并对其评价。结果:该检测卡不与其他病毒发生交叉反应,可检测浓度低至2 ng/mL的样本,24月是稳定的。结论:该测试板具有良好的特异性、灵敏度、重复性和稳定性,并且与RT-qPCR的结果较符合。因此,该检测卡能快速、准确地检测犬冠状病毒,为动物临床诊断和治疗提供参考。

新型冠状病毒胶体金检测卡产品的性能评估

[目的]参考新型冠状病毒抗原/抗体检测试剂注册技术审评要点,对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)胶体金免疫层析检测卡的产品性能进行评估。[方法]通过双抗体制备的胶体金免疫层析检测卡,针对其检测限、特异性、稳定性等方面进行测试。[结果]检测卡产品对新型冠状病毒N蛋白的灵敏度(最低检测限)为50 ng/mL;检测10种呼吸道重要病原菌、12种病毒无阳性反应;检测结果不受内源性、外源性干扰物质的影响;试纸在室温保存1 a仍然具有良好的稳定性;且同一批次内、3个批次间稳定性良好。[结论]制备的胶体金免疫层析检测卡产品,检测22种非新型冠状病毒结果为阴性,具有较高特异性;检测结果不受25种干扰物质影响;产品批内、批间质量稳定,可在15 min内获取检测结果。产品性能指标符合评审要求,可进行临床试验验证对真病毒的特异性与灵敏性。

胶体金免疫层析技术快速检测谷物中3种真菌毒素的研究

目的应用胶体金免疫层析技术开发一种快速检测谷物中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和呕吐毒素(DON)的三联检测卡。方法优化胶体金溶液p H值、金标抗体量及抗原包被量制备3种胶体金试纸条,将试纸条组装成检测卡,研究该卡的检测限、准确度、特异性和稳定性。结果 AFB_1、ZEN和DON 3种试纸条的胶体金溶液最适p H值分别为7.5、7.5和7.0,金标抗体量分别为4.2、7.2和9.6μg/ml,抗原包被量分别为1.0、1.4和0.8 mg/ml。检测卡的检测结果与仪器检测结果基本一致,重复性较好,与结构类似物及其他霉菌毒素无交叉反应,在室温条件下可以保存12个月。结论该三联检测卡操作简便、快速、准确、稳定,且能同时检测3种真菌毒素,在谷物的现场检测中有较好的应用前景。

新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的研制

本文研究建立一种检测新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的方法,能对大量样品进行定量检测。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法,标记新型瘦肉精多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,新型瘦肉精偶联OVA抗原和羊抗鼠Ig G分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成新型瘦肉精多残留胶体金检测卡。通过灵敏度、假阳性、假阴性试验测试,梯度浓度显色结果表明,该检测卡的灵敏度分别为克伦特罗3 ng/m L、莱克多巴胺5 ng/m L、沙丁胺醇3 ng/m L、西马特罗5 ng/m L、班布特罗5 ng/m L、妥布特罗5 ng/m L、特布他林8 ng/m L、氯丙那林5 ng/m L、马布特罗5 ng/m L、溴布特罗8 ng/m L,检测时间为3 min,检测滴加的最优尿液量为70~90μL,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。联检技术能实现现场快速检测,提高检测速度和准确性、降低检测成本,可作为生产过程监管和大批量样本的筛选。

新型冠状病毒中和抗体胶体金测试卡检测不同人群中和抗体的可行性分析

目的:比较2种不同原理制备的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中和抗体胶体金测试卡与SARS-CoV-2假病毒中和实验的相关性,评估半定量的中和抗体胶体金测试卡用于不同人群的SARS-CoV-2中和抗体检测的可行性。方法:分别采用厂家A胶体金测试卡(双抗原夹心法)、厂家B胶体金测试卡(竞争阻断法)和SARS-CoV-2假病毒中和法进行检测,比较这2种胶体金方法与中和实验的相关性和敏感度;在确定了测试卡厂家后,检测新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情暴发前制备的静注人免疫球蛋白及特异性免疫球蛋白,考察其特异性;对ELISA高稀释倍数新冠疫苗免疫后血浆进行原倍和稀释品检测,判断是否有hook效应;检测不同ELISA稀释倍数档位的单份免疫后血浆,判断阳性率,观察色度变化;将ELISA低稀释倍数血浆按照比色卡筛选120NT_(50)和300NT_(50)这2个档位血浆,制备混浆,比较胶体金测试卡与ELISA和中和抗体的相关性。结果:厂家A和厂家B对英国国家生物制品标准化和质量控制研究所(NIBSC)第1代国际标准品20/136(抗SARS-CoV-2人免疫球蛋白国际标准品)的检测限分别为0.6125和5 IU·mL^(-1);对不同档位的混浆(新冠病毒疫苗免疫后血浆及COVID-19康复者恢复期血浆)的检测结果与中和抗体效价相关性好,检测ELISA高稀释倍数(10000以上)新冠病毒疫苗免疫后血浆未出现hook效应;不同ELISA稀释倍数的单份血浆的阳性率在稀释倍数160以上达到100%,但是色度深浅不一,在稀释倍数640以上色度均一性较高,且色度随着ELISA稀释倍数增高整体逐渐变深。按照比色卡色度筛选的Ppool 120NT_(50)和Ppool 300NT_(50)与中和抗体效价接近。结论:采用双抗原夹心法的厂家A中和抗体测试卡检测COVID-19康复者恢复期血浆和新冠病毒疫苗免疫后血浆的结果与假病毒中和实验效价的相关性优于采用竞争抑制法的厂家B产品及间接ELISA,且检测线的色度深浅与中和抗体水平正相关,可半定量检测用于不同人群的中和抗体筛查。