汉滩病毒核蛋白羧基端多肽真核表达载体的构建及其表达产物的鉴定

目的 探讨汉滩病毒 (HTNV)核蛋白羧基端多肽的抗原性 ,为建立分型检测方法奠定基础 .方法 设计并合成 S基因编码区及其 3 端 82 5 bp片段引物 ,用 PCR方法从PBV2 2 0 - S2 2原核质粒中扩增出目的片段 ,应用 TA克隆将其插入 pc DNA3.1/ V5 - His- TOPO载体中 ,并通过脂质体转染至 Vero细胞中进行瞬时表达 ,表达产物用间接免疫荧光法进行鉴定 .结果 成功构建了 pc DNA3.1- S及 pc DNA3.1- S- C真核表达载体 ,间接免疫荧光法可检测到真核表达质粒转染的 Vero细胞表达的核蛋白羧基端多肽 .结论 pc DNA3.1- S及 pc DNA3.1- S- C真核表达载体有较高的转染效率 ,能在宿主细胞中表达 。

基于生物信息学与分子结构的SARS冠状病毒主蛋白酶(SARS CoV M^(pro))多肽类抑制剂研究

用冠状病毒基因解析软件系统ZCURVE_CoV 2.0,从SARS冠状病毒(TOR2,NC_004718)的RNA基因序列出发,搜索出含有SARS冠状病毒主蛋白酶(SARS CoV Mpro)真实剪切位点的11个八肽,运用分子叠合和分子对接的方法,对11个八肽进行了分析,证明这11个八肽有相似的活性,而且11个八肽中,op4的活性最高.分析认为,op4有望成为抗SARS药物的理想前体.

汉滩病毒核蛋白羧基端多肽原核表达载体的构建及表达

本文为建立分型检测方法,探讨了汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)核蛋白羧基端多肽的抗原性。首先,分别构建编码HTNV核蛋白及其羧基端多肽的原核表达载体pRSETA-S、pRSETA-S-C;然后,将其转化入表达菌BL21(DE3)pLyss诱导表达,采用SDS-PAGE、Western-blot进行鉴定。我们成功构建了pRSETA-S及pRSETA-S-C原核表达载体。SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达,呈不溶状态,Western-blot显现目的蛋白具有良好的抗原性。为大量制备分型用核蛋白多肽抗原创造了条件。

原核表达汉城病毒核蛋白羧基端多肽及鉴定

目的建立分型检测方法,探讨了汉城病毒(SEOV)核蛋白羧基端多肽的抗原性。方法首先,分别构建编码SEOV核蛋白及其羧基端多肽的原核表达载体pRSET A-S、pRSET A-S-C;然后,将其转化入表达菌BL21(DE3)pLySs诱导表达,采用SDS-PAGE、Western-blot进行鉴定。结果成功构建了pRSET A-S及pRSET A-S-C原核表达载体;SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达,且呈不溶状态,Western-blot显现目的蛋白具有良好的抗原性。结论截短核蛋白抗原性良好,为进一步研究分型用多肽抗原创造了条件。