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马铃薯SSR标记多重PCR反应体系优化研究
被引量:
4
1
作者
王绍鹏
刘尚武
+2 位作者
李勇
刘伟婷
吕典秋
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期17-23,共7页
以马铃薯品种克新18为试验材料,探讨了多重PCR反应体系主要成分、引物不同比例关系及退火温度对SSR标记扩增的影响。在不改变其他成分浓度的条件下,对PCR反应体系的4个组分(Taq酶、MgCl2、模板DNA、dNTPs)进行浓度或用量梯度试验;利用...
以马铃薯品种克新18为试验材料,探讨了多重PCR反应体系主要成分、引物不同比例关系及退火温度对SSR标记扩增的影响。在不改变其他成分浓度的条件下,对PCR反应体系的4个组分(Taq酶、MgCl2、模板DNA、dNTPs)进行浓度或用量梯度试验;利用正交设计L(934)对反应体系的4对引物组合(STM0014、Pat、SSI、UGP)在3个水平上进行优化;最终确立了马铃薯SSR标记多重PCR反应优化体系,总体积为20μL;2.5μL 25 mmol.L-1 MgCl2,0.6μL 10 mmol.L-1 dNTPs,Taq酶0.8 U,模板DNA 80 ng;4 mmol.L-1的4对引物之间的用量比为2:1:2:3,退火温度为54.7℃。优化后的反应体系重复性好,扩增结果稳定可靠,能够明显区分不同的马铃薯品种。为进一步探讨马铃薯品种资源遗传多样性、构建DNA指纹图谱打下了坚实的基础。
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关键词
马铃薯
SSR标记
多重
pcr
反应体系
优化
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职称材料
食源性致病菌通用型多重荧光PCR快速检测体系的建立
被引量:
1
2
作者
余以刚
何秋彤
+2 位作者
刘千根
肖性龙
吴晖
《现代食品科技》
EI
CAS
2010年第8期880-883,共4页
以两种食源性致病菌(沙门氏菌、单增李斯特菌)为模板,对通用型多重荧光PCR快速检测体系进行了研究。建立的通用型多重荧光PCR反应体系为:25μL反应液中,Tris-HCl为50mmol/L、pH值为8.8、KCl15mmol/L、(NH4)2SO4为8mmol/L、Mg2+为3mmol/L...
以两种食源性致病菌(沙门氏菌、单增李斯特菌)为模板,对通用型多重荧光PCR快速检测体系进行了研究。建立的通用型多重荧光PCR反应体系为:25μL反应液中,Tris-HCl为50mmol/L、pH值为8.8、KCl15mmol/L、(NH4)2SO4为8mmol/L、Mg2+为3mmol/L、dNTP为1.0mmol/L、引物和探针的终浓度分别为1μmol/L和0.5μmol/L、加入0.5μLDMSO,2.5U/份的Taq酶与等量的Taq酶抗体。
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关键词
食源性致病菌
多重荧光
pcr
通用型反应体系
检测
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职称材料
题名
马铃薯SSR标记多重PCR反应体系优化研究
被引量:
4
1
作者
王绍鹏
刘尚武
李勇
刘伟婷
吕典秋
机构
黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所黑龙江省马铃薯工程技术研究中心
出处
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期17-23,共7页
基金
黑龙江省科技厅国际合作项目(WC05B08)
文摘
以马铃薯品种克新18为试验材料,探讨了多重PCR反应体系主要成分、引物不同比例关系及退火温度对SSR标记扩增的影响。在不改变其他成分浓度的条件下,对PCR反应体系的4个组分(Taq酶、MgCl2、模板DNA、dNTPs)进行浓度或用量梯度试验;利用正交设计L(934)对反应体系的4对引物组合(STM0014、Pat、SSI、UGP)在3个水平上进行优化;最终确立了马铃薯SSR标记多重PCR反应优化体系,总体积为20μL;2.5μL 25 mmol.L-1 MgCl2,0.6μL 10 mmol.L-1 dNTPs,Taq酶0.8 U,模板DNA 80 ng;4 mmol.L-1的4对引物之间的用量比为2:1:2:3,退火温度为54.7℃。优化后的反应体系重复性好,扩增结果稳定可靠,能够明显区分不同的马铃薯品种。为进一步探讨马铃薯品种资源遗传多样性、构建DNA指纹图谱打下了坚实的基础。
关键词
马铃薯
SSR标记
多重
pcr
反应体系
优化
Keywords
potato
SSR marker
multiplex pcr reaction system
optimization
分类号
S532 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
食源性致病菌通用型多重荧光PCR快速检测体系的建立
被引量:
1
2
作者
余以刚
何秋彤
刘千根
肖性龙
吴晖
机构
华南理工大学食品安全与检测研究中心
出处
《现代食品科技》
EI
CAS
2010年第8期880-883,共4页
基金
广东省自然科学基金项目资助(项目编号:9151064101000070)
文摘
以两种食源性致病菌(沙门氏菌、单增李斯特菌)为模板,对通用型多重荧光PCR快速检测体系进行了研究。建立的通用型多重荧光PCR反应体系为:25μL反应液中,Tris-HCl为50mmol/L、pH值为8.8、KCl15mmol/L、(NH4)2SO4为8mmol/L、Mg2+为3mmol/L、dNTP为1.0mmol/L、引物和探针的终浓度分别为1μmol/L和0.5μmol/L、加入0.5μLDMSO,2.5U/份的Taq酶与等量的Taq酶抗体。
关键词
食源性致病菌
多重荧光
pcr
通用型反应体系
检测
Keywords
foodborne pathogens
multiplex
real-time
pcr
universal
reaction
system
detection
分类号
TS207.4 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马铃薯SSR标记多重PCR反应体系优化研究
王绍鹏
刘尚武
李勇
刘伟婷
吕典秋
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
下载PDF
职称材料
2
食源性致病菌通用型多重荧光PCR快速检测体系的建立
余以刚
何秋彤
刘千根
肖性龙
吴晖
《现代食品科技》
EI
CAS
2010
1
下载PDF
职称材料
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