靶向突变p53蛋白的抗肿瘤药物

p53蛋白是人体内十分重要的肿瘤抑制因子,通过调节细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡等作用发挥肿瘤抑制功能。突变后的p53蛋白不仅具有显性负性效应(dominant negative effect,DN)抑制野生型p53蛋白功能,而且还通过功能获得性效应(gain of function,GOF)调节细胞代谢、侵袭、迁移等方式促进肿瘤的发生。p53蛋白在超过50%的肿瘤组织中发生突变,是肿瘤细胞区别于正常细胞的一个特异性药物靶点。因此,针对突变p53蛋白开发新型抗癌药物一直是研究的热点。长期以来,由于突变p53蛋白表面较为光滑,缺乏药物结合口袋,使其被认为是一个不可成药的靶点。随着高通量筛选技术的发展以及对突变p53蛋白结构的深入了解,许多靶向突变p53蛋白的小分子化合物被报道并在体外展现出较好的抗肿瘤活性,多款基于突变p53蛋白研发的化合物已经进入临床试验阶段。本文就靶向p53蛋白治疗肿瘤的直接和间接策略进行综述,重点针对突变p53蛋白重激活剂与降解突变p53蛋白的小分子化合物作用机制进行梳理,以期为后续开发靶向突变p53蛋白药物的创新提供帮助。

乳腺癌组织COX-2蛋白c-erbB-2 P53 VEGF-C蛋白表达及其与临床病理参数和预后的关系

目的:分析乳腺癌组织环氧化酶-2(COX-2)蛋白、人表皮生长因子受体2(c-erbB-2)、突变型P53蛋白、血管内皮生长因子C(VEGF-C)蛋白表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法:选取2017年3月至2019年5月到我院就诊103例乳腺癌患者的手术切除标本。免疫组化法测定患者入组时的COX-2、c-erbB-2、P53、VEGF-C蛋白阳性率;比较上述各指标水平与患者TNM分期、分化程度等病理参数的关系;随访患者术后3年生存资料,Kaplan-Meier分析COX-2、c-erbB-2、P53、VEGF-C蛋白水平对预后生存的影响。结果:患者TNM分期、分化程度与COX-2阳性相关(P<0.05);肿瘤直径≥3cm、淋巴结转移与c-erbB-2阳性相关(P<0.05);TNM分期、分化程度、淋巴结转移与P53阳性相关(P<0.05);淋巴结转移与VEGF-C阳性相关(P<0.05)。103例患者随访3年,随访率为100%,截止至2022年5月死亡20例(19.42%),存活83例(80.58%);根据死亡情况将阳性患者分为存活亚组及死亡亚组,死亡亚组患者入组时的组化评分均明显高于存活亚组(P<0.05)。Log-rank χ^(2)检验显示随访3年P53、VEGF-C阳性及阴性的累积存活率比较差异有统计学意义(χ^(2)=14.000、5.206,P均<0.05);COX-2、c-erbB-2阳性及阴性患者的累积存活率比较差异无统计学意义(χ^(2)=1.761、2.830,P=0.184、0.093)。结论:乳腺癌组织中COX-2、c-erbB-2、P53、VEGF-C蛋白阳性率与TNM分期、淋巴结转移、分化程度等病理参数相关,在患者预后评估中具有一定指导意义。

食管癌Mp53和mdr-1,mrp表达的相关性研究

目的 探讨食管癌组织中突变型 p5 3蛋白 (Mp5 3)与多药耐药基因 (mdr 1)和多药耐药相关蛋白基因 (mrp)的表达关系。方法 分别应用S P免疫组化法和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,对 5 4例食管癌组织的Mp5 3蛋白和mdr 1,mrp基因表达进行检测。 结果 食管标本的Mp5 3和mdr 1,mrp的阳性率均高于癌旁组织 (P <0 .0 1) ;癌组织Mp5 3阳性的mdr 1,mrp的阳性率高于Mp5 3阴性者 (P <0 .0 5 ) ;Mp5 3和mdr 1,mrp表达与食管肿瘤长度、分化程度和淋巴结转移无明显关系 (P >0 .0 5 )。随访发现 ,Mp5 3,mdr 1和 (或 )mrp阳性患者的 1,2 ,3年生存率 (73.5 %,39.1%,7.7%)低于Mp5 3和mdr 1,mrp阴性者 (82 .4 %,5 8.3%,37.5 %)。 结论 食管癌组织中Mp5 3蛋白表达阳性可能对肿瘤细胞的MDR起调控作用 ;Mp5 3和mdr 1,mrp的共表达还可能反映食管癌化疗效果差、易复发转移的生物学行为。

十枣汤对荷瘤小鼠p53突变及内皮素表达的影响

目的观察十枣汤对荷H22腹水瘤种小鼠的抗肿瘤作用。方法小鼠随机分为空白对照组、荷瘤模型组、环磷酰胺(CTX)阳性对照组和十枣汤高、中剂量组。除空白对照组外,其余4组小鼠均以皮下注射瘤细胞悬液0.2 mL造模。于造模第2天,分别灌胃相应药物或生理盐水,或注射CTX。采用免疫组化方法检测瘤体内突变的p53蛋白;放射免疫法测定小鼠血浆内皮素(ET)水平。结果各用药组突变型p53表达水平明显低于荷瘤模型组(P<0.01),而3组间比较差异无显著性意义(P>0.05);模型组小鼠血浆ET水平明显高于空白对照组(P<0.01),各用药组ET水平均有不同程度下降(P<0.05,P<0.01)。结论十枣汤可以降低突变型p53蛋白表达,降低血浆ET水平并减少肿瘤的血供,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。

大鼠肝癌变中p53点突变及其蛋白表达的研究

目的 研究大鼠肝癌变中突变型Ｐ５３蛋白（ｍＰ５３）的表达及 ｐ５３基因第６外显子点突变。方法 通过ＤＥＮ诱发的启动模型和肝癌模型，应用免疫组化、ＭＤＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和直接测序技术分别研究ｍＰ５３表达和 ｐ５３基因第６外显子点突变。结果 ｍＰ５３阳性细胞仅见于癌前个别肝细胞增生结节中，８／１８例（４４．４４％）肝细胞癌呈ｍＰ５３阳性；８例ｍＰ５３阳性肝癌中仅有１例（１２．５０％）被检出ｐ５３基因第６外显子发生点突变，即第２０８位密码子第１碱基Ｃ—Ｇ颠换。结论 在 ＤＥＮ诱发的启动模型和肝癌模型中 ｐ５３基因突变可发生于大鼠肝癌变之癌前及肝癌形成阶段，且第６外显子突变率低。

膀胱移行细胞癌P-gp表达与凋亡相关蛋白p53、bcl-2的关系

目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中MDR 1基因产物P gp表达与凋亡相关蛋白 p5 3、bcl 2的相互关系及其临床意义。方法 采用免疫组化S P法检测 10 7例原发性膀胱移行细胞癌组织中P gp、p5 3、bcl 2蛋白的表达情况。 结果 P gp、p5 3、bcl 2蛋白的阳性表达率分别为 6 3.6 %、72 .9%、5 4.2 % ,三者的过度表达均与膀胱癌的病理分级、临床分期和术后腔内化疗后复发有关 ;P gp表达与 p5 3、bcl 2蛋白的表达密切相关 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。 结论 P gp、p5 3、bcl 2蛋白的过度表达不仅是判定原发性膀胱移行细胞癌恶性程度和预后的重要指标 ,而且凋亡相关蛋白 p5 3、bcl 2可能参与膀胱移行细胞癌多药耐药的形成。

突变型P53蛋白及DNA含量在宫颈癌动脉介入化疗前后的表达及意义

目的检测突变型P53蛋白及DNA含量在宫颈癌新辅助动脉介入化疗前后的变化,探讨其与宫颈癌动脉介入化疗疗效的关系。方法取正常宫颈组、宫颈癌介入化疗前和化疗后4周各21例的宫颈组织标本,采用免疫组化方法进行突变型P53蛋白检测,用流式细胞术测定其DNA含量(DI)。结果21例宫颈癌患者中,动脉介入化疗前突变型P53蛋白检测阳性者5例,阳性率为23.81%;动脉介入化疗后突变型P53蛋白检测阳性者15例,阳性率为71.43%;两者之间有显著性差异(P<0.01);对照组无阳性表达。宫颈癌组介入化疗前和介入化疗后的DNA含量(DI)分别为1.40+0.33和1.21+0.16,有显著性差异(P<0.05),且均高于正常宫颈组1.09+0.10(P<0.01,P<0.05)。结论宫颈癌组织的突变型P53蛋白的表达在动脉介入化疗前后有显著性差异,动脉介入化疗可能诱导宫颈癌组织中突变型P53蛋白的表达。介入化疗能抑制宫颈癌DNA的复制,抑制肿瘤的增殖。

大肠腺癌p53基因cDNA突变与突变型p53基因蛋白表达的相互关系和意义

目的：探讨大肠腺癌突变型ｐ５３基因蛋白表达与ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变间的相互关系和意义。方法：对１００例新鲜大肠腺癌组织采用ＰＡｂ２４０单克隆抗体免疫组织化学染色（ＬＳＡＢ法）检测突变型ｐ５３基因蛋白表达、ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变，并比较它们间相互关系。结果：１００例大肠腺癌中，７６例ＰＡｂ２４０单抗阳性（７６％），５１例ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变阳性（５１％）；ＰＡｂ２４０单抗反应与ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变比较，两者皆阳性４９％，两者中一者阳性２９％，两者皆阴性２２％（Ｐ＜０．０００１）。结论：ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变与其基因蛋白产物结构改变高度吻合。

乳腺癌P53和Ki-67表达的相关性及临床意义

目的探讨突变型P53和核蛋白抗原Ki-67在乳腺癌组织中的表达及其相互之间的关系,为乳腺癌的诊断、治疗和预后提供可靠的依据。方法随机收集2012年3月—2015年8月期间于包头医学院第一附属医院就诊的100例女性原发性乳腺癌患者,术后行病理及免疫组化检测乳腺癌组织中P53和Ki-67的表达。结果 100例乳腺癌肿块其P53和Ki-67的阳性表达率分别为56.0%、41.0%。P53和Ki-67间有一定的关联性,P53与Ki-67表达呈正相关(P<0.05)。结论P53和Ki-67在乳腺癌中的表达既相互独立又相互关联,通过多项指标联合检测,会更准确地判断乳腺癌的预后,同时可以为靶向药物的个体化治疗提供参考依据。

人端粒酶逆转录酶与p53蛋白在甲状腺癌组织中的表达、相关性及临床意义

目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA)与突变型p53蛋白在甲状腺癌和甲状腺良性组织中的表达、相关性及临床意义。方法采用原位杂交法检测hTERTmRNA的表达,采用免疫组织化学法检测突变型p53蛋白的表达。结果①hTERTmRNA和突变型p53蛋白在甲状腺癌中高表达(P<0.05)。②hTERTmRNA与p53蛋白阳性率与甲状腺癌的临床病理分型,有无淋巴结转移,肿瘤TNM分期有关(P<0.05),与患者年龄,性别无关。③hTERTmRNA与p53蛋白在甲状腺癌组织中的表达呈显著正相关,具有统计学意义(P<0.05)。结论①hTERTmRNA和突变型p53蛋白的高表达在甲状腺癌的发生发展过程中起到重要作用。②p53蛋白调控hTERTmRNA的表达,p53蛋白在甲状腺癌中表达的增高可激活hTERTm-RNA,从而导致甲状腺癌的发生。③hTERTmRNA和p53蛋白在甲状腺癌中表达的变化可用于评估其生物学行为和判断预后,对临床上甲状腺癌的靶向治疗起到重要的指导作用。

突变P53功能研究新进展与个性化的肿瘤治疗新策略

p53是迄今为止研究最多的一种抑癌蛋白,最新研究仍在不断地揭示p53在调控机体代谢、生殖方面的新功能。同时,也揭示了不同p53突变蛋白的获得性新功能在肿瘤发生中的促进作用。这些研究对于了解p53突变的个性化新功能,寻找再激活野生型p53,校正突变p53的新途径奠定了基础,不同突变p53蛋白的个性化治疗将是未来肿瘤治疗的热点。文章综述了已发现的一些突变p53的获得性新功能,及针对不同的p53功能缺陷进行的p53蛋白功能再激活的策略:通过小分子或多肽再激活肿瘤细胞中的p53突变蛋白的野生型功能;通过重组的腺病毒在肿瘤细胞中表达野生型p53蛋白;通过抑制MDM2与p53的相互作用稳定野生型p53蛋白。对p53不同位点突变的深入研究可以帮助我们制定更合理的个性化治疗方案,寻求更有效的肿瘤治疗新途径。

化癥口服液对荷瘤小鼠p53突变及内皮素表达的影响

目的:探讨化癥口服液对荷H22小鼠的抗肿瘤作用和可能的机制。方法:75只健康小鼠随机分为5组,即空白对照组、荷瘤模型组、化癥口服液高、中剂量组(简称高、中剂量组)和阳性对照组。除空白对照组外,其余4组小鼠均以皮下注射瘤细胞悬液,0·2ml/只造模。于造模第2天,空白对照组和荷瘤模型组小鼠以生理盐水(NS)灌胃。高、中剂量组小鼠分别予100%、50%浓度的化癥口服液10ml/kg灌胃,2次/d,共10天。阳性对照组小鼠以CTX10ml/kg腹腔内注射,隔日1次,共5次。免疫组化方法检测瘤体内突变的p53蛋白;放射免疫法测定小鼠血浆内皮素(ET)水平。结果:荷瘤模型组小鼠的突变型p53表达水平明显高于其他3组(P<0·05),3个治疗组小鼠突变型p53表达都有不同程度的下降,3组间比较差异无显著性意义(P>0·05);模型组小鼠血浆ET水平明显高于空白对照组(P<0·001),其余各组的比较,ET水平均有不同程度下降,尤以高剂量组接近空白对照组水平,且与中剂量组和阳性对照组相比,差异有显著性意义(P<0·05)。结论:化癥口服液可以降低突变型p53蛋白表达,降低血浆ET水平并减少肿瘤的血供,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。

p53突变蛋白在甲状腺组织中的表达及意义

目的 :探讨抑癌基因 p5 3突变蛋白在甲状腺良恶性病变组织中表达的意义。 方法 :应用免疫组织化学方法 ,检测术前未行特殊治疗 48例甲状腺癌和 15例良性病变中 p5 3突变蛋白的表达。 结果 :p5 3突变蛋白在良性病变中无阳性表达 ,恶性肿瘤中为16/4 8(3 3 .3 % ) ,其中 ,分化性腺癌为 12 /4 3 (2 7.9% ) ,未分化癌为 4/5 (80 % )。在恶性肿瘤中 ,其表达高于良性病变 (P <0 .0 5 )。但与年龄、性别、肿瘤直径、AMES分级无明显相关。结论 :p5 3突变蛋白表达于甲状腺恶性肿瘤 ,在细胞恶性转化中发挥重要作用。

突变型p53蛋白与P-糖蛋白在涎腺粘液表皮样癌中的表达及意义

目的:探讨突变型p53蛋白与多药耐药蛋白P-糖蛋白在涎腺粘液表皮样癌(MEC)的表达及意义。方法:应用免疫组织化学技术(SP法)检测突变型p53蛋白和P-糖蛋白在37例涎腺MEC及12例正常涎腺组织中的表达,分析二者表达与涎腺MEC临床病理特点的联系及二者表达之间的相关性。结果:37例涎腺MEC中突变型p53蛋白阳性表达率为54.1%(20/37),正常涎腺组织无表达,差异有统计学意义(P<0.001);涎腺MEC中P-糖蛋白阳性表达率为91.9%(34/37),正常涎腺组织阳性表达率为58.3%(7/12),差异有统计学意义(P<0.05)。37例涎腺MEC中突变型p53蛋白的阳性表达与临床分期、分化程度、有无淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。37例涎腺MEC中突变型p53蛋白的阳性表达与P-糖蛋白的阳性表达有明显相关性(P<0.05)。结论:突变型p53蛋白和P-糖蛋白在涎腺MEC中均有较高水平表达,突变型p53蛋白过表达与涎腺MEC的生长、分化及淋巴结转移的生物学行为关系密切。检测涎腺MEC中突变型p53蛋白和P-糖蛋白的表达可为临床拟定化疗方案提供依据,也可为判断涎腺MEC的预后提供参考。

p53、p73与生存素及caspase-7蛋白酶在喉癌组织中的表达及临床意义

目的探讨p53、p73、生存素(survivin)及caspase7蛋白酶在喉癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化(SP法)检测49例喉癌组织和42例喉正常组织中突变型p53、p73、survivin及caspase-7蛋白的表达水平,并分析其与喉癌临床病理参数和预后的关系。结果突变型p53、p73、survivin及caspase-7蛋白在喉癌组织中有较高阳性表达率,分别为71.4%、87.8%、91.8%、95.9%,而在喉正常组织中其阳性表达率明显降低(P<0.05),分别为21.4%、23.8%、76.2%、47.6%。四种蛋白表达与喉癌临床病理参数和预后分析显示,突变型p53、p73蛋白表达随着喉癌临床分期的演进而增加,且喉癌中有淋巴结转移的p53、p73蛋白表达显著高于无淋巴结转移组(P<0.05),p73蛋白表达还与喉癌病理分级和临床不良预后密切相关(P<0.05);survivin蛋白表达与喉癌临床分期和病理分级相关(P<0.05);caspase-7蛋白高表达患者,其病理分级和预后较好(P<0.05)。相关性分析发现喉癌组织中Survivin蛋白表达分别与p73(r=0.372,P<0.01)、caspase-7(r=0.476,P<0.01)蛋白表达呈正相关。结论突变型p53、p73、survivin及caspase-7蛋白在喉癌组织中均存在高表达,Survivin蛋白表达分别与p73、caspase-7蛋白表达正相关,p73、survivin、caspase-7蛋白表达均与患者临床预后有关,可成为喉癌治疗、预后判断的潜在生物学指标。

槲皮素对NB4细胞株p53及蛋白的影响

目的研究治疗白血病的有效药物。 方法将槲皮素作用于培养的NB4细胞株 ,应用RT -PCR及Westernblot方法 ,研究不同浓度槲皮素 (30、6 0、90 μmol/L)诱导细胞 2 4、48、72、96、12 0h后 ,急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株中突变型p5 3基因及蛋白表达的情况。 结果证实其在 30～ 90 μmol/L浓度时对突变型p5 3基因无影响 ,而对突变型p5 3蛋白的表达有抑制作用。 结论本研究为槲皮素应用于急性早幼粒细胞白血病的研究提供了有效手段。

槲皮素对体外培养NB4细胞株p53表达的影响

目的 为研究治疗白血病的有效药物。方法 将槲皮素作用于培养的 NB4细胞株 ,应用 RT- PCR及western blot方法 ,研究不同浓度槲皮素 (30、6 0、90μm)诱导细胞 2 4、48、72、96、12 0 h后 ,白血病 NB4细胞株中突变型 p5 3基因及蛋白表达的情况。结果 证实其 30～ 90 μm浓度时对突变型 p5 3基因没有影响 ,而对突变型 p5 3蛋白的表达产生抑制作用。

奥曲肽联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞增殖及突变型p53蛋白表达的影响

目的:通过生长抑素类似物奥曲肽(OCT)联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞作用及对p53蛋白的影响为大肠癌的临床治疗提供一定的理论依据。方法:采用结肠癌细胞原代培养,采用MTT比色分析法测定奥曲肽与5-FU联合是否抑制作用增强;流式细胞仪间接免疫荧光技术检测药物作用后的肿瘤细胞突变型p53蛋白表达情况。结果:5-FU和奥曲肽联合应用对大肠癌的抑制率高于单独应用。5-FU和1.0μg/mlOCT组均抑制突变型p53蛋白的表达,联合用药组更为明显。结论:奥曲肽和5-FU都能抑制肿瘤细胞的突变型p53蛋白的表达,且联合应用抑制作用强于两者的单独应用,这可能是奥曲肽能增强5-FU对结肠癌细胞抑制作用的机制之一。

原发性胆囊癌P53基因突变产物的表达及其意义

作者应用ＡＢＣ免疫组化法研究４０例胆囊癌和５例正常胆囊粘膜标本中突变型Ｐ５３蛋白的表达及其意义。结果显示胆囊癌中突变型Ｐ５３蛋白表达阳性率为５０％，正常胆囊粘膜全部为阴性。突变型Ｐ５３蛋白的表达阳性率在不同的病理分级、淋巴结是否转移及预后患者间差异显著（Ｐ＜０．０１）。在Ｎｅｖｉｎ分期间未测出显著相关性（Ｐ＞０．０５）。结果提示突变型Ｐ５３基因参与了胆囊肿瘤的恶性转化过程，其表达阳性率高的胆囊癌预后不良，是反应胆囊癌生物学行为和预后的重要指标。

甘氨脱氧胆酸诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡中对P53表达的影响

目的探讨甘氨脱氧胆酸(GDCA)在诱导SMMC-7721细胞凋亡中对P53表达的影响。方法用膜联蛋白V(annexinV)检测细胞凋亡,RT-PCR分析p53 mRNA变化,免疫组化技术分析P53蛋白表达。结果GDCA可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,具有明显的时间和剂量依赖。200μmol/L GDCA处理组在48 h和72 h的细胞凋亡率分别为(7.67±2.35)%、(12.93±1.48)%;400μmol/L GDCA处理组则分别为(13.14±2.56)%、(14.22±2.11)%。GDCA可明显提高p53 mRNA水平,且较强地抑制突变的P53蛋白的表达。结论GDCA具有诱导SMMC-7721细胞凋亡作用。