靶向突变p53蛋白的抗肿瘤药物

p53蛋白是人体内十分重要的肿瘤抑制因子,通过调节细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡等作用发挥肿瘤抑制功能。突变后的p53蛋白不仅具有显性负性效应(dominant negative effect,DN)抑制野生型p53蛋白功能,而且还通过功能获得性效应(gain of function,GOF)调节细胞代谢、侵袭、迁移等方式促进肿瘤的发生。p53蛋白在超过50%的肿瘤组织中发生突变,是肿瘤细胞区别于正常细胞的一个特异性药物靶点。因此,针对突变p53蛋白开发新型抗癌药物一直是研究的热点。长期以来,由于突变p53蛋白表面较为光滑,缺乏药物结合口袋,使其被认为是一个不可成药的靶点。随着高通量筛选技术的发展以及对突变p53蛋白结构的深入了解,许多靶向突变p53蛋白的小分子化合物被报道并在体外展现出较好的抗肿瘤活性,多款基于突变p53蛋白研发的化合物已经进入临床试验阶段。本文就靶向p53蛋白治疗肿瘤的直接和间接策略进行综述,重点针对突变p53蛋白重激活剂与降解突变p53蛋白的小分子化合物作用机制进行梳理,以期为后续开发靶向突变p53蛋白药物的创新提供帮助。

枯草芽胞杆菌α-淀粉酶高产菌株的选育

以Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ１４１４０为出发菌株，经亚硝基胍反复多次处理和筛选，该菌α－淀粉酶酶活从８０００Ｕ／ｍｌ提高到３４２００Ｕ／ｍｌ，并探讨了一种高效的α－淀粉酶选育方法．另外在摇瓶培养过程中，探讨了培养基碳源、氮源对该菌株产酶特性的影响．

产气气杆菌异淀粉酶高产菌株的选育

该文以产气气杆菌为出发菌株,经紫外线和甲基磺酸乙酯(EMS)复合诱变,从大量突变株中筛选出一株产酶稳定且酶活较高的菌株UV2-10-6,酶活由最初的2.9592U/mL提高为14.82U/mL,提高了4倍。并探讨了一种高效的异淀粉酶产生菌的选育方法,为下一步培养基优化打下基础。

大豆“南农94-16”突变体库的构建及部分性状分析

本研究对"南农94-16"大豆种子用NaN3-60Coγ射线复合诱变以及EMS诱变来构建大豆突变体库。两种方式诱变大豆分别获得54份和66份叶、茎、花、种子、子叶等性状变异的突变体。用644对SSR标记分别对其中的14株耐涝突变体和1株叶色浅绿突变体进行了鉴定。结果表明,14株耐涝突变体,有2株与对照有超过100个标记的差异,其余植株分别有1到7个标记的差异;叶色浅绿突变体与对照有39个标记的差异,遗传分析表明该性状由细胞核单基因隐性遗传控制。这些突变体可以作为新的种质资源,构建的突变体库也有助于大豆功能基因组研究的开展。

坛紫菜绿色突变体的分离与特性分析

野生型坛紫菜壳孢子苗经MNNG处理后,在它们的叶状体中,出现了许多色彩发生变异的细胞,大部分的变异细胞随后分裂形成块状的细胞块。用酶解法分离含绿色变异细胞块的叶状体的单离细胞,从细胞再生体中分离出一株绿色突变体。在叶状体活体吸收光谱特性方面,绿色突变体与野生型相比存在着明显的差异,3λmax和4λmax的峰顶分别向短波方向移动了约12 nm和3 nm。另外,绿色突变体的藻红蛋白和叶绿素a的含量下降,藻蓝蛋白的含量上升,表现出较低的PE/Chl.a和PE/PC比值,较高的PC/Chl.a比值。绿色突变体的生长和成熟均比野生型慢。

辐射育成极早熟小麦突变系的研究

自70年代以来,本所利用60Coγ射线、激光与快中子复合处理,选育出两个极早熟小麦突变系“152”和“321”,生育期分别为218和217天,比当地晚播早熟品种“鲁麦4号”还早熟2—4天。经研究,其原因主要是缩短了拨节至抽穗时间,而且灌浆早、速度快。两个突变系播种期弹性大,秋播、晚秋播或春播均能正常抽穗结实,具有弱冬性和春性双重特点,适宜麦—棉、麦—花生一年两熟地区种植。“321C”突变系籽粒蛋白质含量高达16.86％,赖氨酸含量高达0.42%,湿面筋含量高达42.0%,干面筋含量为14.0％,适宜制作优质面食,同时对育种工作也是颇有价值的优质源和早熟源。

笃斯越桔耐弱碱突变体的离体筛选与鉴定

以笃斯越桔组培苗为试验材料,建立了EMS诱变体系,采用EMS诱变与NaHCO3共同胁迫处理的方法,筛选耐弱碱候选突变体,并进行了相关生理指标的鉴定,以明确其突变体株系的耐弱碱能力。结果显示:(1)0.4%EMS浸泡笃斯越桔茎段4h为较适宜的诱变剂量,存活率达46.7%;在含0.1%EMS的培养基中处理3d,存活率达50.0%;EMS浸泡处理后,NaHCO3适宜剂量为8mmol·L-1,经3次交替培养后,筛选出2株候选耐弱碱突变体。(2)相关生理指标鉴定表明,2株候选突变体的SOD和POD活性及游离脯氨酸含量显著高于对照,MDA含量显著低于对照。研究表明,该研究获得的笃斯越桔候选突变体具有一定的耐弱碱能力。

重组改构人肿瘤坏死因子对肺腺癌致恶性胸腔积液封胸治疗的临床疗效分析

目的恶性胸腔积液（malignant pleural effusion,MPE）严重危害晚期肺癌患者生存质量,目前对其尚无理想治疗方法。文中回顾性分析重组改构人肿瘤坏死因子（recombinant human mutant tumor necrosis factor-alpha,rhu-TNF）治疗肺腺癌所致MPE的临床疗效与不良反应。方法回顾性收集2013年3月至2014年7月南京军区南京总医院呼吸与危重症医学科确诊的肺腺癌所致恶性胸膜腔积液患者70例,常规胸腔积液引流后,根据3~4万单位/kg分别以200万单位和300万单位剂量行胸腔内注射rhu-TNF,观察其疗效及不良反应。结果 200万单位和300万单患者有效率分别为75.68%和87.88%,差异无统计学意义（P=0.23）。注药前使用地塞米松的患者不良反应比不使用者明显减轻,差异有统计学意义（P=0.021）,但地塞米松的使用对rhu-TNF的疗效无影响（P=0.486）。结论 rhu-TNF是治疗肺腺癌所致MPE的高效、安全药物。地塞米松可减轻患者不良反应且不影响rhu-TNF疗效。

无花果细胞系耐盐性与抗氧化酶活性的变化

经 60Coγ射线辐射后再由羟脯氨酸筛选出的无花果抗羟脯氨酸细胞AH 具有更强的耐盐力。将这些细胞进一步分成不同的细胞系, 培养在含有NaCl167 mmol/L的MS培养基上,7 d 后, 不同细胞间存活率和相对生长量表现出一定差异, 最高的是AH22 和AH33 ,而AH2 细胞几乎全部死亡。盐胁迫诱导绝大多数细胞SOD、POX、CAT和APX 活性增加, 而且盐分对细胞生长的抑制程度与POX、CAT和APX 活性增加倍数存在一定的负相关关系, 而SOD相反。耐盐细胞AH22 的POX、CAT 和APX 活性分别增加了24 .1 倍、48.7 倍和16.5 倍。

绿玉树试管苗物理化学诱变及其抗寒突变体的筛选

以已建立的微体繁殖体系为基础 ,对绿玉树再生丛芽进行Co60 γ射线不同剂量的辐射和不同浓度EMS诱变处理 ,以HYP为突变体选择压 ,筛选出抗HYP突变体小苗 ,并对突变体小苗进行抗寒测试。结果表明 :辐射剂量影响丛芽的增殖、突变率及芽苗的生长 ,1 5KR为绿玉树丛芽辐射诱变比较适宜的剂量。 0 .2 %的EMS亦能诱导绿玉树丛芽块产生突变芽 ,但与正常培养获得的再生小苗相比 ,诱变后产生的抗HYP芽苗生长缓慢 ,再生小苗矮小。抗HYP突变小苗的抗寒性比正常植物的抗寒性强。

干扰素疗法与HBV前C区点突变关系的初步研究

用错配引物聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析（ｍｐＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对１５例血清ＨＢｅＡｇ阳性、ＨＢＶ－ＤＮＡ斑点杂交阳性的慢性乙型肝炎患者进行了干扰素疗法与ＨＢＶ前Ｃ区基因１８９６位点突变之间关系的观察。结果显示，治疗前后ＨＢＶ野生株（Ｗ）和突变株（Ｍ）的变化有四种类型，即Ｗ→Ｗ（８例）；Ｗ＋Ｍ→Ｗ＋Ｍ（３例）；Ｗ→Ｗ＋Ｍ（３例）；Ｗ＋Ｍ→Ｗ（１例）。以ＨＢｅＡｇ阴转率和ＨＢＶ－ＤＮＡ阴转率为指标分析干扰素疗效，ＨＢＶ野生株感染组和野生株与突变株混合感染组之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：干扰素治疗后部分患者可发生ＨＢＶ前Ｃ区基因点突变。该突变株的存在似不影响干扰素的疗效。

微环境治疗改善难治性创面细菌耐药疗效分析

目的探讨创面微环境个体化治疗在改善难治性创面细菌耐药中的应用。方法整群选取2013年6月—2015年6月期间在该院完成治疗的63例非手术难治性创面患者随机分为个体化治疗组和常规治疗组,个体化治疗组31例,常规治疗组32例,治疗前比较两组患者在性别、年龄方面差异无统计学意义。在全身治疗的基础上,将耐药突变选择窗理论应用于临床,设计创面微环境个体化治疗方案,对两组患者治疗前后分别进行创面分泌物细菌培养及药敏试验检测,统计分析所得数据。结果个体化治疗组中9例（9/31）检出耐药菌,常规治疗组中21（21/32）例检出耐药菌,差异有统计学意义（χ~2=8.45,P〈0.05）。结论创面微环境个体化治疗能够有效的改善难治性创面患者治疗中广泛耐药菌感染状况。

降氰菌突变株处理合成氨企业含氰废水的研究

从合成氨废水污染的土壤和排水沟底泥中经过多次富集、分离,筛选出了具有较高耐氰和降氰能力的野生型菌株,经过紫外诱变得到2株具有高效降氰能力的突变株HN-1和HN-4。利用接触氧化法进行合成氨企业含氰废水的降氰处理时加入突变株HN-1和HN-4,处理效果大大增强,在水力停留时间(HRT)2 h的情况下,氰的降解率可达90%以上。

低剂量重组改构人肿瘤坏死因子联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效观察

目的观察低剂量重组改构人肿瘤坏死因子(rmh TNF)联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效。方法选取重庆市中医院2014年5月—2015年6月收治的80例晚期NSCLC患者。随机分为试验组48例和对照组32例。试验组给予rmh TNF联合化疗方案治疗,对照组给予单纯化疗,两组均采用NP、TP方案化疗。比较两组患者的临床疗效及毒副作用发生情况。结果试验组有效率为33.3%,高于对照组的21.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前两组患者KPS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后试验组KPS评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论静脉滴注低剂量的rmh TNF联合化疗药物治疗NSCLC的近期疗效理想,可显著改善患者的生活质量。

小麦条锈菌的紫外诱变处理及致病性变异体的筛选

用紫外线以不同时间处理小麦条锈菌水源致病类型1-4、条中29-3、条中23-2,当夏孢子致死率达90%左右时,确定为最适诱变时间分别为12、8、5min.以紫外线12min处理水源致病类型1时,经6批次筛选未获得突变体.以8 min处理条中29-3,得到在Hybrid46上表现3型的菌系,在尤皮Ⅱ号上表现4型的菌系和在阿夫上表现2型的菌系,分别命名Hybrid46菌系、尤Ⅱ菌系和阿夫菌系,三菌系经4代转接该品种,最后获得2个稳定的突变菌系,包括毒性突变产生的尤Ⅱ菌系和非毒性突变产生的阿夫菌系.以5 min处理条中23-2得到两个突变菌系:在尤皮Ⅱ号上表现3型的菌系和在水源11上表现2型的菌系,分别命名为尤Ⅱ-23菌系和水源11菌系,其中尤Ⅱ-23菌系经4次转接仍保持毒性.

槲皮素对体外培养NB4细胞株p53表达的影响

目的 为研究治疗白血病的有效药物。方法 将槲皮素作用于培养的 NB4细胞株 ,应用 RT- PCR及western blot方法 ,研究不同浓度槲皮素 (30、6 0、90μm)诱导细胞 2 4、48、72、96、12 0 h后 ,白血病 NB4细胞株中突变型 p5 3基因及蛋白表达的情况。结果 证实其 30～ 90 μm浓度时对突变型 p5 3基因没有影响 ,而对突变型 p5 3蛋白的表达产生抑制作用。

竹亚科刚竹属一些种下变异类型分类地位的再认识

对《中国植物志》第九卷第一分册中记载的竹亚科Bambusoideae刚竹属Phyllostachys Sieb.et Zucc.24个栽培型的分类地位作了重新评述,认为其变异是自然发生的,应给予一个适当的分类等级。将其处理为1种、1变种、21变型及1栽培型,并提出4个新组合和18个新异名。

慢性乙型肝炎患者血清HBV恩替卡韦耐药基因突变模式调查

目的探讨核苷(酸)类经治的慢性乙型肝炎(CHB)患者血清恩替卡韦耐药基因突变模式的变化。方法2016年10月~2020年10月我院收治的核苷(酸)类经治的CHB患者107例,采用巢氏PCR法扩增血清HBV RT基因,应用MEGA4软件鉴定病毒基因型。采用脂质体体外转染HepG2细胞,分别给予恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦或替诺福韦作用,采用实时荧光定量PCR法检测培养上清HBV DNA载量。结果在本组107例CHB患者中,恩替卡韦耐药基因rtS202G/M204V/L180M检出率为40.2%,显著高于rtT184A/M204V/L180M(22.2%)、rtT184L/M204V/L180M(23.4%)、rtS202G/M204i/L180M(3.7%)、rtM250V/M204V/L180M(5.6%)、rtM250L/M204I/L180M(5.6%)和rtT184I/S202G/M204V/L180M(5.6%)等基因型(P<0.05);恩替卡韦耐药患者曾经拉米夫定治疗率为38.3%,显著高于应用过阿德福韦治疗者的22.4%(P<0.05);36例rtT184^(sub)耐药基因感染者血清HBV DNA为(3.0±0.5)lgIU/ml,10例rtT184/S202^(sub)感染者血清HBV DNA为(4.1±0.8)lgIU/ml,显著高于47例rtS202^(sub)感染者【(1.9±0.2)lgIU/ml,P<0.05】或14例rtM250^(sub)感染者【(2.1±0.2)lgIU/ml,P<0.05】;体外在恩替卡韦作用的携带rtS202G/M204V/L180M突变株细胞培养上清HBV DNA为(3.1±0.1)lg IU/ml,显著高于rtT184A/M204V/L180M突变株【(2.1±0.1)lg IU/ml,P<0.05】,而在拉米夫定或阿德福韦酯作用细胞,培养上清HBV DNA水平无显著性差异(P>0.05),在替诺福韦作用细胞培养上清,HBV DNA水平均很低。结论核苷(酸)经治CHB患者恩替卡韦耐药突变基因型主要为rtS202G/M204V/L180M,变异株对拉米夫定、阿德福韦酯和恩替卡韦抵抗,但对替诺福韦仍敏感。

变异冬红果无菌体系的建立

[目的]建立变异冬红果初代培养无菌体系。[方法]以变异冬红果茎段为外植体,采用3种不同的消毒方法,通过统计污染率、褐化死亡率和成活率,比较变异冬红果茎段较适宜的消毒方法。[结果]用0.05%氯化汞消毒的最佳方式为氯化汞消毒20 min,污染率为17.78%,褐化死亡率为11.11%,成活率为71.11%;用0.1%氯化汞消毒的最佳方式为氯化汞消毒8 min,污染率为22.22%,褐化死亡率为20.00%,成活率为50.00%;用75%乙醇结合0.1%氯化汞消毒的最佳方式为75%乙醇30 s结合0.1%氯化汞10 min进行消毒,污染率为5.56%,褐化死亡率为55.56%,成活率为38.89%。[结论]变异冬红果茎段最佳的消毒方式为0.05%氯化汞消毒20 min,污染率为17.78%,褐化死亡率为11.11%,成活率为71.11%。

γ辐照与赤霉素复合处理育成小麦新品种西辐九号

选用西昌反修麦为材料，经６０Ｃｏγ射线辐照之后，播种前用赤霉素（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｉｎ）浸种复合处理。诱变育成矮秆抗倒，株型紧凑，幼苗直立，叶片短宽，适应性较广，耐瘠，耐湿，抗条锈病小麦新品种西辐九号，一般产量６８４０ｋｇ／ｈｍ２。研究表明，γ辐照与赤霉素复合处理能减轻辐射损伤，有效的提高辐照当代的田间出苗率，拓宽突变谱，扩大变异群体，提高有益突变频率。