Objectif L＇objectif de ce travail est d＇etablir une méthode d＇analyse du polymorphisme de la conformation monochaine （ PCMC ）, capable de détecter la mutation ponctuelle du géne hMLH1 dans le cance...Objectif L＇objectif de ce travail est d＇etablir une méthode d＇analyse du polymorphisme de la conformation monochaine （ PCMC ）, capable de détecter la mutation ponctuelle du géne hMLH1 dans le cancer colique en utilisant l＇ l ctrophor se capillaire associée a it la fluorescence laser-induite （FLI-EC）. Méthodes Les exons 12 du gdne hMLH1 du sang périphérique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains témoins sont amplifies par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analysé par FLI-EC. Les échantillons anormaux ont été confirmés par séquen age EC. Les effets de la concentration du milieu （ LPA ） , de la temperature de séparationéet du voltage de séparation sur le comportement de EC ont été aussi etudiés. Résultats L＇analyse de PCMC par la methode FLI-EC a retrouvé une mutation hétérozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de Tl l51A a été objectivée par la séquen age EC de ces échantillons, aucune mutation n＇a été retrouvée chez les 20 sujets sains témoins. La séparation des pics d＇ADN monochainaux a été facilitée par une légdre augmentation de la concentration de LPA （4%-6%）, une légdre baisse de la temperature de séparation （20℃） et une légére élévation du voltage de séparation （9kV）. Conclusion Une concentration adequate de LPA, une temperature de séparation appropriée et un voltage de séparation bien approprié améliorent considérablement l＇efficacité du FLI-EC. L＇application de cette méthode pour détecter la mutation ponctuelle du géne hMLH1 est d＇une rapiditY, d＇une efficacité, et d＇uneéreproductivit consid rables. Cette méthode de réalisation facile reste trés prometteur pour le dépistage rapide et massive des mutations génétiques.展开更多
文摘Objectif L＇objectif de ce travail est d＇etablir une méthode d＇analyse du polymorphisme de la conformation monochaine （ PCMC ）, capable de détecter la mutation ponctuelle du géne hMLH1 dans le cancer colique en utilisant l＇ l ctrophor se capillaire associée a it la fluorescence laser-induite （FLI-EC）. Méthodes Les exons 12 du gdne hMLH1 du sang périphérique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains témoins sont amplifies par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analysé par FLI-EC. Les échantillons anormaux ont été confirmés par séquen age EC. Les effets de la concentration du milieu （ LPA ） , de la temperature de séparationéet du voltage de séparation sur le comportement de EC ont été aussi etudiés. Résultats L＇analyse de PCMC par la methode FLI-EC a retrouvé une mutation hétérozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de Tl l51A a été objectivée par la séquen age EC de ces échantillons, aucune mutation n＇a été retrouvée chez les 20 sujets sains témoins. La séparation des pics d＇ADN monochainaux a été facilitée par une légdre augmentation de la concentration de LPA （4%-6%）, une légdre baisse de la temperature de séparation （20℃） et une légére élévation du voltage de séparation （9kV）. Conclusion Une concentration adequate de LPA, une temperature de séparation appropriée et un voltage de séparation bien approprié améliorent considérablement l＇efficacité du FLI-EC. L＇application de cette méthode pour détecter la mutation ponctuelle du géne hMLH1 est d＇une rapiditY, d＇une efficacité, et d＇uneéreproductivit consid rables. Cette méthode de réalisation facile reste trés prometteur pour le dépistage rapide et massive des mutations génétiques.
