室旁核H_(2)S通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对盐敏感性高血压大鼠的影响

目的研究室旁核(PVN)硫化氢(H_(2)S)对高盐诱导的高血压大鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨H_(2)S降压的作用机制。方法选择40只成年雄性Dahl盐敏感性大鼠,鼠龄8周,体质量260~280 g。随机把大鼠分成正常对照组(Control组)、正常给药组(Control+GYY组)、高盐模型组(Model组)、高盐给药组(Model+GYY组),每组10只。于第4周末,利用微型渗透泵向Control+GYY组和Model+GYY组大鼠双侧PVN区域持续注射H_(2)S的缓释供体GYY4137,其余组大鼠全部注射等量人工脑脊液。连续注射6周后进行取材,通过酶联免疫吸附分析(ELISA)法来检测PVN H_(2)S及血浆去甲肾上腺素(NE)的水平,免疫荧光法检测TLR4、MyD88的表达,免疫组化法检测磷酸化核转录因子κB(p-NF-κB p65)、磷酸化κB抑制蛋白激酶β(p-IKKβ)的表达,通过Western blot法检测TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65的蛋白表达。结果Model组平均动脉压(MAP)、血浆NE较Control组升高(t=10.204、24.155、23.967、25.657、22.069、31.036、23.054、28.189,P<0.05),PVN中H_(2)S水平降低(t=14.348,P<0.05),Model+GYY组与Model组相比MAP、NE水平降低(t=8.295、12.931、10.992、16.064、12.228、16.017,P<0.05),PVN中H_(2)S水平升高(t=7.889,P<0.05)。免疫荧光或免疫组化结果显示,Model组PVN中TLR4、MyD88、pNF-κB p65、p-IKKβ因子的表达水平较Control组均升高(t=8.844、10.344、6.813、3.909,P<0.05),Model+GYY组与Model组相比PVN中TLR4、MyD88、p-NF-κB p65、p-IKKβ因子的表达水平均降低(t=4.719、4.313、3.234、4.955,P<0.05)。Western blot结果表明,与Control组相比,Model组大鼠PVN中TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平升高(t=15.951、6.537、7.394,P<0.05);与Model组大鼠相比,Model+GYY组TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平下降(t=9.415、4.901、8.997,P<0.05)。结论室旁核H_(2)S可明显降低高盐诱导的高血压大鼠的血压、降低外周交感神经活动,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

射干制剂对失眠大鼠自主活动及TLR7/MyD88信号通路的影响

目的 探研射干制剂对PCPA致失眠大鼠自主活动、脑电波以及脑组织TLR7、MyD88基因表达的影响。方法 随机将70只健康SD大鼠分为空白对照组、模型对照组、射干制剂低剂量组(26 mg·kg^(-1))、射干制剂中剂量组(52 mg·kg^(-1))、射干制剂高剂量组(104 mg·kg^(-1))、朱砂安神丸组(1.62 g·kg^(-1))、地西泮片组(0.9 mg·kg^(-1))。荧光定量PCR检测各组TLR7、My D88基因的相对表达量;采用Etho Vision大小鼠行为学系统记录大鼠自主活动情况;通过无线遥测系统记录各组睡眠时脑电图。结果 与空白组对照比较,模型对照组脑组织TLR7、MyD88相对表达量显著升高(P<0.01);同模型对照组相比,射干制剂低剂量组、射干制剂中剂量组TLR7、MyD88的mRNA表达量均降低(P<0.05),射干制剂高剂量组TLR7、MyD88 mRNA表达量显著降低(P<0.01);与空白对照组相比,PCPA造模后大鼠运动量明显增加,不同剂量射干制剂组、朱砂安神丸组及地西泮片组运动有不同程度的减少,射干制剂高剂量组运动减少较为明显;给药120 min后,与空白对照组相比,模型对照组脑电波中的δ波百分比降低(P<0.05);与模型对照组相比,射干低中剂量组、朱砂安神丸组、地西泮片组δ波百分比均升高(P<0.05)。结论 射干制剂可有效抑制大鼠兴奋性,增加脑电图δ波百分比,改善睡眠,这些作用可能是通过调节脑组织TLR7和MyD88基因的表达来实现。

基于miR-155/TLR4/MyD88信号通路探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤的抗炎作用

目的探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤miR-155/Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路及炎症的影响。方法将18只雄性新西兰大白兔分为对照组、模型组和蛇伤胶囊组,每组6只。对照组正常饮食饮水,另两组注射7.5 mg/kg竹叶青蛇毒液6 h后,模型组灌胃348 mg/(kg·d)生理盐水,蛇伤胶囊组灌胃348 mg/(kg·d)蛇伤胶囊,均连续灌胃1周。观察实验兔的一般行为学,qRT-PCR检测外周血中miR-155a-5p、TLR4和MyD88表达,ELISA检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)含量。结果与对照组比较,模型组精神和食欲变差,排便稀软带血,伤口溃烂,miR-155-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达均显著增加(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著下降(均P<0.01)。蛇伤胶囊组较模型组情况明显好转,miR-155a-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达显著下降(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著增加(均P<0.01)。结论蛇伤胶囊抑制竹叶青蛇伤造成的炎症反应,维持Th1/Th2细胞平衡,其作用机制可能与抑制miR-155/TLR4/MyD88轴的表达有关。

血清MyD88和TRAF-6联合检测在儿童重度急性呼吸道感染诊断和预后评估中的价值

目的探讨血清髓系分化初级反应蛋白88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)在儿童重度急性呼吸道感染辅助诊断和预后评估中的价值。方法选取2020年1月—2022年6月南阳市中心医院儿童急性呼吸道感染患儿80例(急性呼吸道感染组)。根据病原学检测结果分为非细菌感染组(42例)和细菌感染组(38例)。根据患儿病情严重程度分为轻度组(28例)、中度组(20例)、重度组(32例)。根据患儿预后情况分为预后良好组(58例)和预后不良组(22例)。以同期80名体检健康儿童为正常对照组。采用多因素Logistic回归分析评估急性呼吸道感染患儿预后的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标诊断儿童重度急性呼吸道感染和评估预后的效能。结果急性呼吸道感染组血清MyD88、TRAF-6水平显著高于正常对照组(P<0.001)。细菌感染组血清MyD88、TRAF-6水平显著高于非细菌感染组(P<0.001)。轻度组、中度组、重度组血清MyD88、TRAF-6水平依次升高(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清MyD88、TRAF-6单项检测和联合检测诊断重度急性呼吸道感染的曲线下面积(AUC)分别为0.762、0.734、0.876。预后不良组细菌感染、下呼吸道感染、重度病情所占比例和白细胞(WBC)计数、反应蛋白(CRP)、MyD88、TRAF-6水平均显著高于预后良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,重度病情、CRP升高、MyD88升高、TRAF-6升高均是儿童急性呼吸道感染预后不良的危险因素[比值比(OR)值分别为1.693、1.864、3.218、2.869,95%可信区间(CI)分别为1.142~2.510、1.228~2.830、1.561~6.633、1.511~5.446,P<0.05]。ROC曲线分析结果显示,血清MyD88、TRAF-6、CRP单项检测和联合检测判断急性呼吸道感染患儿预后的AUC分别为0.848、0.900、0.817、0.951。结论急性呼吸道感染患儿血清MyD88、TRAF-6水平显著升高,联合检测对儿童重度急性呼吸道感染的辅助诊断和预后评估均有较高的临床价值。

MAPK通过调控TLR4/Myd88/NF-κB通路对妊娠期肠梗阻胃肠功能的影响

目的 分析MAPK通过调控TLR4/MyD88/NF-κB通路对妊娠期肠梗阻胃肠功能的影响。方法 选取105只SPF级Wistar大鼠,雌性、雄性分别为70、35只,将所有大鼠同笼放置后,共有33只雌性大鼠妊娠成功,将妊娠成功的8只作为空白组,剩余25只雌性大鼠建立肠梗阻模型,最终建模成功24只,将其分为模型组、上调组、下调组各8只。结果 与模型组相比,上调组MAPK表达量、VIP、GAS、TNF-α、IL-6水平、TLR4、Myd88、NF-κB mRNA表达量及相对表达量上升,MOT、IL-4、IL-10水平下降,下调组MAPK表达量、VIP、GAS、TNF-α、IL-6水平、TLR4、Myd88、NF-κB mRNA表达量及相对表达量下降,MOT、IL-4、IL-10水平上升(P <0.05)。结论 妊娠期肠梗阻大鼠经下调MAPK干预后胃肠功能改善,炎性反应减轻,其机制可能与TLR4/Myd88/NF-κB通路得到抑制有关。

血清MyD88、IL-33、LCR水平与AECOPD合并呼吸衰竭患者预后的相关性分析

目的探讨血清髓样分化因子88(MyD88)、白细胞介素-33(IL-33)、乳酸清除率(LCR)水平在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并呼吸衰竭患者中的表达及与预后的相关性。方法本研究为回顾性队列研究。纳入2022年1月至2023年12月神木市医院呼吸与危重症医学科收治的AECOPD合并呼吸衰竭患者120例,根据入院治疗28 d后的预后情况分为预后良好组(生存)84例和预后不良组(死亡)36例。入院时收集患者的基本资料,包括年龄、性别、吸烟史、COPD病程等。患者入院后未治疗前测量急性生理学及慢性健康状况评分系统(APACHEⅡ)评分确定是否为急性加重期,同时测量入院后未治疗前的血小板计数(PLT)、中性粒细胞计数、血肌酐(Scr)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GCT)、MyD88、IL-33水平,测量入院后未治疗前及经过治疗、间隔24 h的乳酸水平。采用logistic回归分析探讨影响预后的独立因素,Spearman相关性分析用于评估血清生物标志物与患者预后之间的相关性。采用χ^(2)检验、t检验。结果预后良好组中男50例,女34例,年龄(70.68±3.36)岁,COPD病程(18.74±3.65)年;预后不良组中男21例,女15例,年龄(70.41±3.27)岁,COPD病程(18.59±3.78)年。多因素logistic回归分析表明,APACHEⅡ评分、中性粒细胞计数、MyD88、IL-33、LCR均是AECOPD合并呼吸衰竭患者预后不良的影响因素(均P<0.05)。Spearman相关性分析表明,血清MyD88、IL-33与不良预后呈正相关(r=0.641、0.640,均P<0.05),LCR与不良预后呈负相关(r=-0.695,P<0.05)。受试者操作特征曲线(ROC)表明,联合血清MyD88、IL-33、LCR预测AECOPD合并呼吸衰竭患者预后不良的曲线下面积为0.987(95%CI 0.972~1.000)、灵敏度为94.4%、特异度为97.6%、约登指数为0.920,诊断效能最高。结论在AECOPD合并呼吸衰竭预后不良患者中,血清MyD88、IL-33表达上调,LCR水平降低,三者联合应用具有良好的诊断效能。

重症腺病毒肺炎患儿血清IL-6R和MYD88水平与患儿预后的关系

目的分析重症腺病毒肺炎患儿血清白细胞介素-6受体(IL-6R)和髓样分化因子88(MYD88)水平与患儿预后的关系。方法将沧州市中心医院2020年6月至2022年6月收治的腺病毒肺炎患儿146例纳入研究,根据患儿病情严重程度分为非重症组(50例)和重症组(96例);根据重症腺病毒肺炎患儿出院时病情将患儿分为预后良好组(63例)及预后不良组(33例)。血清IL-6R和MYD88水平检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)。分析重症腺病毒肺炎患儿血清IL-6R、MYD88水平及二者与序贯器官功能衰竭(SOFA)评分、Murray肺损伤评分、白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、血小板计数(PLT)的相关性。采用Logistic回归分析重症腺病毒肺炎患儿预后的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IL-6R和MYD88水平对重症腺病毒肺炎患儿预后的预测价值。结果重症组血清IL-6R、MYD88水平及SOFA评分、Murray肺损伤评分均高于非重症组(P<0.05)。预后不良组WBC>10×10^(9)/L、CRP≥8 mg/L及PLT≥10×10^(9)/L患儿比例均高于预后良好组(P<0.05),IL-6R、MYD88水平及SOFA、Murray肺损伤评分均高于预后良好组(P<0.05)。血清IL-6R和MYD88呈正相关(P<0.05)。血清IL-6R、MYD88均与SOFA评分、Murray肺损伤评分、WBC、CRP以及PLT呈正相关(P<0.05)。经Logistic回归分析,IL-6R、MYD88升高是影响重症腺病毒肺炎患儿预后的危险因素(P<0.05)。经ROC曲线分析,血清IL-6R和MYD88联合预测重症腺病毒肺炎患儿预后的曲线下面积(AUC)优于各自单独预测(P<0.05)。结论重症腺病毒肺炎患儿血清IL-6R和MYD88水平显著升高,二者与患儿预后密切相关,二者联合较各自单独使用可更好地预测患儿预后。

自拟心衰保元汤辅助治疗慢性心力衰竭患者的临床效果及对血清MyD88和Galectin-3的影响

目的探究分析自拟心衰保元汤辅助治疗慢性心力衰竭患者的临床效果及对血清髓样分化因子88(MyD88)和半乳糖凝集素-3(Galectin-3)的影响。方法选取南阳市第二人民医院2021年5月至2022年5月收治的108例慢性心力衰竭患者,随机分为观察组(54例)和对照组(54例)。对照组患者接受曲美他嗪治疗,观察组接受曲美他嗪联合自拟心衰保元汤辅助治疗,治疗时间为1个月。比较两组患者中医证候疗效和治疗前后心功能、心室重构[左心室心肌治疗指数(LVMI)、平均室壁应力(MWS)]、血管内皮功能[内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、血管性血友病因子(vWF)]、血清MyD88、Galectin-3水平及不良反应发生情况。结果观察组临床总有效率(96.30%)优于对照组(83.33%)(P<0.05)。治疗后,两组患者LVEF升高,而LVEDD、BNP、LVMI、MWS、ET-1、NO、vWF和血清Galectin-3、MyD88降低,且观察组较对照组变化更明显(P<0.05)。观察组和对照组患者不良反应总发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论自拟心衰保元汤辅助有助于延缓慢性心力衰竭患者心室重构,促进血管内皮细胞功能提高,进而改善患者心功能,并能降低血清MyD88、Galectin-3水平,疗效显著,且安全可靠。

基于天枢与上巨虚穴经皮神经电刺激观察对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织TLR9/MyD88/NF-κB蛋白表达的影响

目的基于“合募配穴”原则观察经皮神经电刺激(transcutaneous electrical nerve stimulation,TENS)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠结肠组织Toll样受体9(toll-like receptor 9,TLR9)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨TENS治疗UC的相关机制。方法从48只SPF级成年SD大鼠中随机抽取12只作为空白组。其余36只通过2-4-6三硝基苯磺酸(2-4-6 trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)/乙醇法制备UC大鼠模型,成模后再次随机分为模型组、TENS组、阳性药物组,每组12只。成模后第1天开始干预:模型组仅行捆绑固定;TENS组捆绑固定后刺激天枢、上巨虚两穴;阳性药物组用225 mg/kg剂量的柳氮磺胺吡啶混悬液灌胃。以上各组干预均每天1次,共10次。观察记录各组大鼠每天食量和体质量。干预结束后,HE染色观察各组大鼠结肠组织病理学变化;ELISA法检测结肠组织白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)炎性因子的含量;Western blot法检测结肠组织TLR9、My D88、NF-κB蛋白的表达量变化。结果(1)与空白组相比:模型组大鼠结肠组织出现明显溃疡面,上皮细胞大面积萎缩,炎性因子大量浸润,IL-6、TNF-α炎性因子含量升高(P<0.05);TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表达量上调(P<0.05)。(2)与模型组相比:TENS组和阳性药物组结肠组织损坏情况较轻,上皮细胞黏液较充分,腺体分支较少,炎性细胞浸润面积小;IL-6、TNF-α含量减少(P<0.05);TLR9、NF-κB蛋白表达量降低(P<0.05)。(3)与阳性药物组相比:TENS组TNF-α、IL-1β的含量及TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表达量相对较高(P<0.05)。结论TENS能够保护肠道上皮细胞,减轻肠道炎症,其机制可能与降低结肠细胞促炎因子水平,抑制TLR9/MyD88/NF-κB信号通路蛋白的过表达有关。

血清HDAC4和MYD88水平与急性脑梗死rt-PA静脉溶栓后出血转化的关系研究

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)和髓样分化蛋白88(MYD88)水平与重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓后发生出血转化的关系。方法选取2020年5月至2022年5月在该院就诊并进行rt-PA静脉溶栓治疗的169例ACI患者作为研究对象,并根据患者进行rt-PA静脉溶栓后是否发生出血转化将其分为转化组(46例)和非转化组(123例),另外选取同期在该院进行体检的156例体检健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验对各组血清HDAC4、MYD88水平进行检测,并对转化组和非转化组的一般资料进行比较;采用Pearson相关对ACI患者血清HDAC4和MYD88水平的相关性进行分析;采用多因素Logistic回归分析影响ACI患者rt-PA静脉溶栓后出血转化的相关因素;进一步通过受试者工作特征(ROC)曲线评估HDAC4、MYD88水平及二者联合对ACI患者rt-PA静脉溶栓后出血转化的诊断价值。结果ACI组血清HDAC4水平低于对照组,血清MYD88水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);非转化组和转化组ACI患者的性别、年龄、体重指数、空腹血糖及高血脂、冠心病占比比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而患者心房颤动占比、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、发病至溶栓时间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);转化组较非转化组血清HDAC4水平降低,血清MYD88水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析结果显示,ACI患者血清HDAC4水平与MYD88呈负相关(r=-0.401,P<0.001);多因素Logistic回归分析显示,心房颤动、发病至溶栓时间、NIHSS评分、MYD88水平是ACI患者rt-PA静脉溶栓后发生出血转化的危险因素,HDAC4水平是ACI患者rt-PA静脉溶栓后发生出血转化的保护因素(P<0.05);血清HDAC4、MYD88联合检测ACI患者rt-PA静脉溶栓后发生出血转化的曲线下面积为0.876,灵敏度和特异度分别为65.22%和98.37%,优于HDAC4和MYD88单独诊断(Z二者联合-HDAC4=2.298,P=0.022;Z二者联合-MYD88=2.545,P=0.011)。结论ACI患者血清HDAC4和MYD88水平与rt-PA静脉溶栓后发生出血转化密切相关。

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路介导的NLRP3炎性小体活性探讨振腹推拿改善CUMS模型大鼠海马组织炎性损伤的手法机制研究

目的 观察振腹推拿对抑郁症模型大鼠海马组织Toll样受体4(Toll-like Receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloiddifferentiationfactor88,MyD88)/核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路介导的NLR蛋白3(NLR protein 3,NLRP3)炎性小体活性的影响,探讨振腹推拿改善抑郁症模型大鼠海马区炎性损伤的作用机制。方法 将40只大鼠随机分为4组,采用慢性不可预见性温和应激方法复制抑郁症大鼠模型。采用离子钙接头蛋白-1(ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba1)免疫荧光染色检测各组大鼠海马组织海马回(cornuammonis, CA)的小胶质细胞活化程度,采用酶联免疫吸附法法检测大鼠海马组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α、白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6、IL-10的含量,采用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR(Real time-PCR,RT-PCR)法检测各组大鼠海马组织中TLR4、MyD88、磷酸化核因子-κB(phospho-nuclear factor kappa-B,p-NF-κB)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)蛋白及其基因表达。结果 (1)与正常组比较,模型组大鼠海马组织CA1、CA2、CA3、CA4区的活化小胶质细胞占比均显著升高(P<0.01)。与模型组大鼠比较,振腹组、氟西汀组大鼠海马组织CA1、CA2、CA4区的活化小胶质细胞占比均显著降低(P<0.01),氟西汀组大鼠海马组织CA3区的活化小胶质细胞占比与模型组相比降低有统计学差异(P<0.05),振腹组大鼠海马组织CA3区的活化小胶质细胞占比与模型组相比仅有降低趋势。(2)与正常组比较,模型组大鼠海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1含量显著升高(P<0.01),IL-10含量显著降低(P<0.01)。与模型组大鼠比较,振腹组、氟西汀组大鼠IL-10含量均显著升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6、Caspase-1含量均显著降低(P<0.01)。(3)与正常组比较,模型组大鼠海马组织TLR4、MyD88、p-NF-κB、NLRP3、ASC的蛋白和mRNA含量均显著升高(P<0.01)。与模型组大鼠比较,氟西汀组大鼠海马组织TLR4、MyD88、p-NF-κB、NLRP3的蛋白含量均显著降低(P<0.01),ASC的蛋白含量下降有统计学意义(P<0.05);氟西汀组大鼠TLR4、MyD88、p-NF-κB、NLRP3、ASC的mRNA含量均显著降低(P<0.01)。与模型组大鼠比较,振腹组大鼠海马组织TLR4、ASC的蛋白含量下降有统计学意义(P<0.05),MyD88、p-NF-κB、NLRP3的蛋白含量显著降低(P<0.01);振腹组大鼠TLR4、MyD88、NF-κB、NLRP3的mRNA含量均显著降低(P<0.01),ASC的mRNA含量均降低有统计学意义(P<0.05)。结论 振腹推拿缓解抑郁模型大鼠抑郁样行为的其机制与抑制海马组织中TLR4/MyD88/NF-κB通路介导的NLRP3炎性小体活性、改善海马组织炎性损伤有关。

瑞马唑仑调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对烧伤大鼠肠上皮细胞凋亡的影响

目的探究瑞马唑仑(Rem)调节Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对烧伤大鼠肠上皮细胞凋亡的影响。方法将造模成功的烧伤大鼠随机分为模型组(Model组),药物低、中、高剂量处理组(Rem-L组、Rem-M组、Rem-H组)和高剂量瑞马唑仑+TLR4激活剂组(Rem-H+LPS组),另取健康的大鼠作对照组(Control组)。在对大鼠尾静脉采血且行安乐死后取其肠组织样本。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;HE染色观察肠组织形态;TUNEL检测试剂盒检测细胞凋亡;免疫组化检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达;免疫印迹实验检测凋亡蛋白Bax及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白表达。结果与Control组相比,Model组细胞排列紊乱,有炎症表现,IL-1β、IL-6水平、细胞凋亡率升高,Bax、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB表达上调,ZO-1、Occludin表达下调(P<0.05);与Model组比较,Rem-L、Rem-M、Rem-H组肠黏膜炎症浸润逐渐减轻,IL-1β、IL-6水平、细胞凋亡率降低,Bax、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB表达下调,ZO-1、Occludin表达上调,呈剂量依赖性(P<0.05);与Rem-H组相比,Rem-H+LPS组组织炎症加重,IL-1β、IL-6水平、细胞凋亡率升高,Bax、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB表达上调,ZO-1、Occludin表达下调(P<0.05)。结论Rem可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路缓解烧伤大鼠肠上皮细胞的损伤,从而保护肠黏膜。

舒芬太尼调节TLR4/MyD88/NF-kB通路对重症肺炎大鼠肺损伤的影响

目的:探讨舒芬太尼(Sufentanil,Sufen)对重症肺炎(Severe pneumonia,SP)大鼠肺损伤及Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子-κB(Toll-like receptor 4/myeloid differentiation factor 88/nuclear factor-κB,TLR4/MyD88/NF-κB)通路的影响。方法:构建SP大鼠模型;将造模成功大鼠分为重症肺炎组(SP组)、舒芬太尼低、高剂量组(Sufen-L、Sufen-H组)、舒芬太尼高剂量+TLR4激活剂LPS组(Sufen-H+LPS组),每组24只,另取24只正常大鼠作为对照组(Control组);检测肺泡灌洗液中炎症因子水平及肺泡灌洗液沉淀物中炎症细胞数目;检测肺组织湿干重比(Wet/Dry,W/D);HE染色观察各组大鼠肺组织病理变化;Western blot检测肺组织中TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达水平。结果:SP组较Control组肺组织遭到破坏损伤严重,其中肺间质增厚,肺泡水肿并伴有大量炎性细胞浸润,TNF-α、IL-1β、IL-6水平和EOS、NEU炎症细胞数目及W/D比、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05);Sufen-L、Sufen-H组较SP组大鼠肺组织损伤减轻,肺泡结构逐渐完整,水肿减轻,炎症细胞浸润逐渐减少,TNF-α、IL-1β、IL-6水平和EOS、NEU炎症细胞数目及W/D比、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低,其中Sufen-H组优于Sufen-L组(P<0.05);Sufen-H+LPS组较Sufen-H组大鼠肺组织损伤加剧,肺泡结构破坏严重,肺泡水肿明显,炎性细胞浸润增加,TNF-α、IL-1β、IL-6水平和EOS、NEU炎症细胞数目及W/D比、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:Sufen改善SP大鼠的肺损伤,与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

瑞马唑仑对颅脑损伤大鼠脑组织损伤及TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

目的:探讨瑞马唑仑(Rem)对颅脑损伤(BI)大鼠脑组织损伤及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法:构建BI大鼠模型;将所有大鼠分为对照组(Control组)、颅脑损伤组(BI组)、瑞马唑仑低、中、高剂量组(Rem-L、Rem-M、Rem-H组)、瑞马唑仑高剂量+TLR4激活剂LPS组(Rem-H+LPS组);检测大鼠脑组织含水量;ELISA检测大鼠脑组织中的炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察大鼠脑组织的形态学变化;TUNEL法检测脑组织神经元凋亡情况;Western blot法检测大鼠脑组织TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65、Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果:与Control组相比,BI组大鼠脑组织神经元变性坏死,数量减少,体积缩小,损伤严重,神经功能评分、脑组织含水量、神经元凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.05);与BI组相比,Rem-L、Rem-M、Rem-H组大鼠脑组织神经元细胞损伤逐渐减少,细胞结构相对较清晰,神经功能评分、脑组织含水量、神经元凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65表达依次降低,Bcl-2表达依次升高(P<0.05);与Rem-H组相比,Rem-H+LPS组大鼠脑组织损伤加重,神经功能评分、脑组织含水量、神经元凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论:瑞马唑仑可以通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路改善颅脑损伤大鼠的脑组织损伤。

α7nAChR抑制MyD88依赖性Zonulin释放改善脑梗死大鼠肠道炎症和肠屏障损伤

目的:观察α7型烟碱乙酰胆碱受体(α7nAChR)激动剂PNU282987对脑梗死大鼠肠道炎症和肠屏障损伤的影响。方法:将36只雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、中脑动脉栓塞(MCAO)组和PNU282987组。MCAO组和PNU282987组采用Longa改良线栓法制备MCAO模型,PNU282987组腹腔注射1 mg/kg PNU282987,连续7 d。苏木精—伊红(HE)染色观察肠道黏膜病理改变,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-6)水平及血清二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(DLA)、内毒素(ET)水平,免疫组化法检测结肠组织Toll样受体2(TLR2)蛋白表达,western blotting法检测结肠组织紧密连接关键蛋白咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin-1)、连蛋白(Zonulin)、带状闭合蛋白(ZO-1)、TLR2、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白表达。结果:与sham组比较,MCAO组大鼠肠上皮脱落、肠绒毛排列紊乱及黏膜下层炎性浸润,血清DAO、DLA、ET水平及结肠组织TNF-α、IL-6含量显著增高,结肠组织Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白表达显著下调,Zonulin、TLR2、MyD88、p-NF-κB蛋白表达显著上调(均P<0.05)。与MCAO组比较,PNU282987组大鼠肠上皮损伤减轻,血清DAO、DLA、ET水平及结肠组织TNF-α、IL-6含量显著降低,结肠组织Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白表达显著上调,Zonulin、TLR2、MyD88、p-NF-κB蛋白表达显著下调(均P<0.05)。结论:PNU282987可以显著改善脑梗死大鼠肠道炎症及肠屏障损伤,其机制可能与抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路有关。

MyD88和TRIF在新生儿脑损伤中的表达及其与炎症反应的关系

目的探讨髓样分化因子88(MyD88)和β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)在新生儿脑损伤中的表达及其与炎症反应的关系。方法前瞻性选取2021年10月至2023年9月入同济大学附属妇产科医院诊断并接受治疗的新生儿脑损伤患儿103例为研究对象,作为新生儿损伤组。同时选择同期无神经系统疾病的正常新生儿80例,作为对照组。收集所有新生儿的临床资料,并采集外周静脉血3 mL,检测两组新生儿血清中降钙素原、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-2、IL-1β、IL-8和IL-6水平,采用实时荧光定量PCR检测血清中MyD88和TRIF mRNA表达,采用Pearson相关性分析对MyD88和TRIF mRNA表达与炎症反应的关系进行分析,并采用受试者操作特征(ROC)曲线评估MyD88和TRIF mRNA表达在新生儿脑损伤中的诊断价值。结果两组新生儿的胎龄、年龄、出生体重、男性占比、生产方式比较,差异均无统计学意义(P>0.05);脑损伤组Apgar评分为(7.42±1.87)分,明显低于对照组[(8.78±4.72)分],差异有统计学意义(P<0.05)。脑损伤组新生儿血清降钙素原、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8和IL-6水平分别为(6.21±0.73)ng/L、(5.94±1.83)pg/mL、(8.93±2.95)pg/mL、(3.17±1.02)pg/mL、(32.98±9.83)pg/mL、(14.51±4.37)pg/mL,均明显高于对照组[(0.59±0.18)ng/L、(2.68±0.79)pg/mL、(4.19±1.36)pg/mL、(1.29±0.73)pg/mL、(7.37±2.91)pg/mL、(2.97±0.85)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。脑损伤组新生儿血清中MyD88和TRIF mRNA表达水平分别为2.46±0.73、2.11±0.65,均明显高于对照组(1.03±0.29、0.79±0.22),差异均有统计学意义(P<0.05)。MyD88和TRIF mRNA表达均与炎症反应指标降钙素原、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8和IL-6均呈正相关(P<0.05)。血清MyD88 mRNA检测诊断新生儿脑损伤的最佳临界值为1.561,敏感度和特异度分别为77.50%和86.25%,ROC曲线下面积(AUC)为0.868(95%CI:0.804~0.932);血清TRIF mRNA检测诊断新生儿脑损伤的最佳临界值为1.249,敏感度和特异度分别为78.75%和87.64%,AUC为0.883(95%CI:0.823~0.938);MyD88联合TRIF mRNA诊断的敏感度和特异度分别为88.75%和93.64%,AUC为0.903(95%CI:0.852~0.955),MyD88联合TRIF mRNA诊断的AUC明显优于血清MyD88和TRIF单独检测的AUC(P<0.05)。结论脑损伤新生儿血清中MyD88和TRIF表达升高,且与炎症反应因子呈正相关,血清MyD88和TRIF检测对新生儿脑损伤具有一定的诊断价值,二者联合检测诊断价值更高。

太平洋牡蛎MyD88-3基因克隆及溶藻弧菌感染后的表达模式

【目的】克隆太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)新型髓样分化因子88(MyD88)基因MyD88-3,分析其在溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)感染后的表达模式,为探究太平洋牡蛎MyD88基因在免疫调控中的作用和太平洋牡蛎健康养殖提供理论依据。【方法】克隆CgMyD88-3基因编码区(CDS),运用ProtScale、SWISS-MODEL和InterPro等进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR分析溶藻弧菌感染前后,CgMyD88-3基因在太平洋牡蛎不同组织中的表达情况。【结果】CgMyD88-3基因CDS长度为537 bp,共编码178个氨基酸残基,CgMyD88-3蛋白相对分子量为20.74 kD,理论等电点为6.10。亚细胞定位预测结果显示CgMyD88-3蛋白位于细胞质,含5个酪蛋白激酶II磷酸化位点(17TEED20、29SNLE32、76TQNE79、118TAND121、123TKED126)和3个蛋白激酶C磷酸化位点(26TMK28、148TAK150、169SEK171)。CgMyD88-3氨基酸序列只含1个TIR(Toll/interleukin-1 receptor)结构域,不含Death结构域。CgMyD88-3氨基酸序列与美洲牡蛎(Crassostrea virginica)CvMyD88-like氨基酸序列相似性最高,为100%,基于MyD88氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,CgMyD88-3先和美洲牡蛎CvMyD88-like聚为一支,然后与太平洋牡蛎CgMyD88-T1和CgMyD88-T2聚为一支。实时荧光定量PCR检测发现,CgMyD88-3基因在健康太平洋牡蛎6种组织中均有表达,相对表达量最高的为外套膜组织,鳃组织次之,在其他组织中依次为血细胞>性腺>消化腺>闭壳肌。溶藻弧菌感染后,太平洋牡蛎闭壳肌、消化腺、血细胞和鳃组织中的CgMyD88-3基因相对表达量均明显升高,在闭壳肌、消化腺和血细胞中感染72 h后达最高,在鳃中感染6 h后达最高,而在外套膜组织中感染后各时间段的CgMyD88-3基因相对表达量均低于0 h。【结论】CgMyD88-3基因在健康的太平洋牡蛎各组织中均有分布,在外套膜中的相对表达量最高。溶藻弧菌刺激可诱导CgMyD88-3基因高表达,表明CgMyD88-3基因可能在太平洋牡蛎抵御外界微生物及病原体感染中扮演重要角色。

鸢尾黄素通过调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路改善血管性痴呆大鼠认知缺陷

目的:分析鸢尾黄素通过调节Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路改善血管性痴呆(VD)大鼠认知缺陷的作用。方法:72只大鼠随机分为假手术组、模型组、鸢尾黄素低、中、高剂量[25、50、100 mg/(kg·d)]组和阳性对照组[吡拉西坦324 mg/(kg·d)],每组12只。除假手术组外,其余组大鼠均复制VD模型。建模成功后,鸢尾黄素不同剂量组和阳性对照组分别灌胃不同剂量鸢尾黄素、吡拉西坦,其余组灌胃等剂量生理盐水,连续灌胃28 d。Morris水迷宫实验检测空间学习记忆能力。高效液相色谱-电化学检测海马组织间液神经递质水平。RT-qPCR和Western blot检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)、高亲和力受体酪氨酸激酶(TrkB)表达。Western blot检测海马组织TLR4/MyD88/NF-κB途径相关蛋白。结果:与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期延长,目标区域停留时间和穿越平台次数降低(P<0.05);与模型组相比,鸢尾黄素中、高剂量组逃避潜伏期缩短,目标区域停留时间和穿越平台次数增加(P<0.05)。模型组去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)水平低于假手术组(P<0.05),鸢尾黄素中、高剂量组NE、DA、5-HT和5-HIAA水平高于模型组(P<0.05)。与假手术组相比,模型组BDNF、TrkB mRNA和蛋白水平降低,TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平上升(P<0.05);与模型组相比,鸢尾黄素中、高剂量组BDNF、TrkB mRNA和蛋白水平上升,TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平降低(P<0.05)。结论:鸢尾黄素可改善VD大鼠认知缺陷,可能通过调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路实现。

TLR4/MyD88/NF-κB信号通路在嗅觉障碍小鼠模型中的表达变化

目的探讨TLR4/MyD88/NF-κB信号通路在嗅觉障碍中的表达变化。方法40只健康BALB/c小鼠分为观察组与对照组,各20只。通过定量逆转录PCR检测小鼠Toll样受体4(Toll-like receptors,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88,My D88)以及核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)水平;通过蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测TLR4、My D88及NF-κB蛋白含量;免疫组化检测嗅觉标记蛋白(mouse olfactory marker protein,OMP)表达情况。结果建模后观察组小鼠觅食时间长于对照组(P<0.05);观察组小鼠TLR4、My D88以及NF-κB mRNA相对表达量明显高于对照组(P<0.05);观察组小鼠TLR4、My D88以及NF-κB蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);观察组小鼠OMP阳性细胞数量明显低于对照组(P<0.05)。结论TLR4/MyD88/NF-κB信号通路在嗅觉障碍小鼠模型中的表达增强。

葛根芩连汤对湿热下注型溃疡性结肠炎患者TLR4/MyD88信号通路的影响

目的:分析葛根芩连汤对湿热下注型溃疡性结肠炎(UC)患者Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平的影响。方法:选择100例唐山市中医医院2020年5月—2023年5月收治的UC患者为研究对象,随机分为观察组和对照组,每组50例。对照组进行常规灌肠配合美沙拉嗪肠溶片治疗;观察组在对照组治疗基础上加用葛根芩连汤内服。比较两组治疗效果、治疗前后中医证候积分变化、TLR4、MyD88水平、炎症因子水平以及不良反应发生情况。结果:观察组总有效率高于对照组(P<0.05);治疗后两组中医证候积分下降,且观察组低于对照组(P<0.05);治疗后两组TLR4、MyD88水平下降,且观察组TLR4、MyD88水平低于对照组(P<0.05);治疗后两组炎症因子水平均降低,且观察组炎症因子水平低于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:葛根芩连汤治疗湿热下注型UC患者的疗效显著,可明显改善临床相应症状,调节TLR4/MyD88信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平,降低炎症反应,且安全性较高,值得临床推广。