磷酸化p38MAPK在实验性自身免疫性脑脊髓炎轴索损伤中的作用

目的观察p38MAPK在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的活化及其与早期神经元轴索损伤的关系和变化规律,以及p38MAPK阻滞剂SB203580对轴索损伤的调节作用。方法使用SJL雌性小鼠建立EAE模型,分别对模型组、SB203580组和对照组各时间点取脑和脊髓,行HE和Luxol Fast Blue(LFB)染色,并行磷酸化p38MAPK抗体染色;对相邻脑组织切片同时行淀粉样前体蛋白(APP)免疫组化检测。用图像分析系统对脑白质病灶内神经元胞浆阳性信号数目、覆盖面积及阳性信号平均密度值进行测量。结果PLP肽段免疫的小鼠发病具有缓解-复发的特点,局部白质区域出现脱髓鞘改变。与模型组比较,SB203580组改变较轻,符合其行为学观测结果,且小鼠的体重增加明显高于模型组(P<0.01)。除对照组,其余各组在各时间点均有APP蛋白表达。与模型组相比,SB203580组干预后APP蛋白表达较轻,阳性细胞数目与强度均明显下降(P<0.01);磷酸化p38MAPK在EAE小鼠免疫后第7天就有明显表达。与模型组相比,SB203580组p38MAPK表达较轻,阳性数目与强度均明显下降(P<0.01)。结论p38MAPK阻滞剂SB203580不仅能够抑制EAE中p38MAPK活化,而且可以有效下调EAE轴索损伤的标志性指标APP的表达;p38MAPK可能参与了EAE的轴索损伤过程。

不同浓度十二烷基磺酸钠在提取甲醛固定石蜡包埋组织β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1中的作用

目的:探索从甲醛固定、石蜡包埋(formaldehyde-fixed,paraffin-embedded,FFPE)的脑组织中提取β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1(BACE-1)的有效方法。方法:将大鼠FFPE脑组织分别加入不同浓度十二烷基磺酸钠(SDS,0%,0.5%,1%,2%和4%)提取BACE-1,新鲜大鼠脑组织作为对照组。提取的BACE-1蛋白量采用Western blot进行检测。结果:未用SDS处理的固定组织提取不到BACE-1,随着SDS浓度的逐渐升高,固定组织中提取的BACE-1蛋白也逐渐增加,4%SDS处理的FFPE组织与新鲜组织提取的BACE-1蛋白量没有明显差别。结论:SDS处理是FFPE组织提取BACE-1的必需条件,高浓度(4%)SDS处理是FFPE组织提取BACE-1的一种有效方法。