白术提取物对IEC-6细胞迁移过程Rho GTPaes及肌球蛋白II表达的影响

目的观察白术提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移多胺介导钾通道激活信号通路指标Rho GTPaes(Rho A、Rac1和Cdc42)表达的影响,对肌球蛋白II(myosinⅡ)分布和表达的影响,以探讨益气健脾中药白术对胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法荧光定量PCR法检测Rho A、Rac1和Cdc42 mRNA表达;Western blot法检测Rho A、Rac1和Cdc42蛋白表达;免疫荧光法检测myosinⅡ蛋白分布和表达。结果白术提取物能提高细胞迁移过程Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达,逆转多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达抑制;提高细胞迁移过程myosinⅡ表达,从而增加细胞骨架应力纤维形成,改善DFMO所致的myosinⅡ蛋白表达和分布的抑制。结论白术提取物促进IEC-6细胞迁移的作用机制,与其影响多胺介导钾通道激活信号通路有关。

偶联因子6抑制肌球蛋白轻链磷酸化增加跨内皮细胞电阻

目的探讨偶联因子6(CF6)对人肺微血管内皮细胞(LMVEC)跨内皮细胞电阻(TER)的影响。方法体外培养LMVEC,于不同时间给予不同剂量(高剂量:10^(-6) mol/L,低剂量10^(-6) mol/L)的CF6刺激,通过细胞电阻测定仪(ECIS)及Western blot观察其对TER及相关活化信号分子的影响。结果与对照组比较,CF6刺激组细胞形态无明显改变,但TER值显著增加,随着CF6孵育时间的增加,TER值明显增加,TER(ohm)峰值出现在15h后(1.39±0.02 vs 1.00±0.02,P<0.01),增加观察时间至24h发现TER维持在高水平(1.350±0.018 vs 1.000±0.023,P<0.01)。用10^(-6)和10^(-7)mol/L的CF6孵育,TER虽剂量增加,但是组间差异无统计学意义(1.39±0.02 vs 1.37±0.01)。CF6刺激组明显抑制磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)水平,但是高、低剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。并且和TER测定结果相似,CF6抗体能够中和CF6刺激引起的p-MLC水平降低。结论 CF6可能通过抑制细胞骨架运动调节蛋白p-MLC水平,增加TER,参与内皮细胞渗透性的调节。

用表面等离子体共振技术筛选与禽流感病毒基质蛋白M1相互作用的蛋白

目的:筛选与禽流感病毒基质蛋白M1相互作用的蛋白。方法:表达禽流感病毒基质蛋白M1,经Ni2+柱亲和层析纯化,用表面等离子体共振(SPR)技术捕获BHK-21细胞裂解液中与M1相互作用的细胞蛋白,并进行质谱分析。结果:获得了纯度在85%以上的基质蛋白M1,并利用此蛋白捕获到宿主细胞肌球蛋白重链6。结论:肌球蛋白重链6与禽流感病毒基质蛋白M1可能存在体外相互作用。

小鼠Sca-1阳性心脏内源性干细胞的分离、扩增及标记物观察

目的分离、扩增干细胞抗原1(Sca-1)阳性心脏内源性干细胞,并观察其标记物情况。方法取C57BL/6小鼠心肌组织,用磁珠分选法分离Sca-1阳性内源性心脏干细胞,并对其传代扩增。观察初分离及传代过程中细胞形态的变化,用流式细胞仪检测初分离及扩增后(第5代)Sca-1阳性心脏干细胞阳性率,以RT-PCR法检测Sca-1阳性及阴性心脏干细胞肌球蛋白重链6(MYH6)、肌钙蛋白T(c Tn T)、心肌转录因子4(GATA4)标记物的表达。结果初分离的Sca-1阳性心脏干细胞为圆形,比血细胞小;传代后细胞呈现星形,伸出较长的伪足,第5代后形状差异不大。原代、第5代心肌细胞Sca-1阳性心脏干细胞阳性率分别为81.0%±10.4%、90.0%±5.0%,P>0.05;Sca-1阳性心脏干细胞MYH6、c Tn T、GATA4相对表达量分别为0.50±0.21、0.72±0.04、0.72±0.05,阴性心脏干细胞分别为0.20±0.02、0.86±0.06、0.71±0.05,两者MYH6、c Tn T比较,P均<0.05。结论成功分离出Sca-1阳性心脏干细胞,且传代稳定、纯度较高,高表达MYH6。

五味子丙素缓解血管紧张素Ⅱ诱导的心脏炎性反应和心肌重构

目的探究五味子丙素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠心肌重构和炎性反应的影响。方法研究时间为2018年7月至2019年1月。皮下注射AngⅡ诱导C57BL/6小鼠心肌重构。将C57BL/6小鼠分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+五味子丙素组(AngⅡ+ShC组),皮下注射AngⅡ前一天开始给药处理,8周后,处死小鼠,收集心脏组织。采用ELISA法检测组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/白介素-6(IL-6)的含量,RT-PCR法检测IL-6、TNF-α、心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、肌球蛋白重链(MYHC)、转化生长因子β(TGF-β)、胶原IV(Collagen IV)和β-肌动蛋白(β-actin)的mRNA表达;生化试剂盒检测血液中的CK-MB。结果与AngⅡ组比较,五味子丙素治疗组心脏损伤被逆转,心重比降低[(6.32±0.99)‰比(4.93±0.17)‰,P<0.05],心功能相关基因ANP[(3.37±0.60)比(1.41±0.37)倍,P<0.05)和BNP[(2.51±0.75)比(0.78±0.55)倍,P<0.05]、促肥大基因MYHC[(2.57±0.74)比(1.18±0.26)倍,P<0.05)、纤维化相关基因TGF-β[(5.25±0.94)比(1.78±0.57)倍,P<0.05)和胶原IV[(3.70±1.47)比(1.68±0.56)倍,P<0.05]的mRNA表达下调,心脏组织TNF-α/IL-6的mRNA[分别为(7.18±2.85)比(2.92±0.86)倍,P<0.05和(12.89±5.40)比(4.29±3.43)倍,P<0.05]和蛋白表达水平[分别为(4.80±0.78)比(2.09±0.41)ng/mg,P<0.05和(2.56±0.73)比(1.23±0.41)ng/mg,P<0.05]均显著降低。结论五味子丙素能有效缓解AngⅡ诱导的小鼠心肌重构,并伴随缓解炎性反应。