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周围神经损伤再生后肌肉nAChRε亚单位基因表达的变化 被引量:2
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作者 张盈帆 江华 +2 位作者 林子豪 蔡在龙 吴包金 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期13-16,共4页
目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法... 目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。方法:构建克隆载体pMD18 T ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法的灵敏性、特异性和重复性。同法检测大鼠股薄肌支配神经损伤修复后不同时间肌肉标本内nAChRε亚单位mRNA表达的变化。结果:用该方法检测nAChRε亚单位mRNA表达,其线性检测范围为6 个数量级,最低检测下限为1×102 拷贝,最高检测上限为1×107 拷贝。大鼠股薄肌支配神经损伤后,与对照组相比ε亚单位mRNA表达的拷贝数先增加后减少,在术后第3 周降到最低后又逐渐增高,但到术后30 周仍处于低水平(P<0.01)。结论:采用Taq Man实时荧光定量RT PCR检测nAChRε亚单位mRNA的表达水平具有灵敏度高、特异性强、重复性好、线性检测范围宽的优点。神经损伤再生的晚期ε亚单位mRNA表达水平较损伤前有所降低。 展开更多
关键词 烟碱型乙酰胆碱受体ε亚单位 荧光定量逆转录聚合酶链反应 周围神经损伤 基因表达和调控
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MLP增强生肌素对nAChRγ亚基基因启动子的结合活性
2
作者 鹿培源 邵世滨 +1 位作者 倪菊华 贾弘褆 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期41-45,共5页
构建表达GAL4 MLP融合蛋白的真核表达质粒pBind MLP .哺乳动物细胞双杂交试验表明 ,MLP与生肌素E12复合物存在细胞内的相互作用 .构建表达GST融合蛋白GST MLP和GST E12的原核表达质粒pGEX 2TK MLP以及pGEX 4T 2 E12 .在E .coliBL2 1... 构建表达GAL4 MLP融合蛋白的真核表达质粒pBind MLP .哺乳动物细胞双杂交试验表明 ,MLP与生肌素E12复合物存在细胞内的相互作用 .构建表达GST融合蛋白GST MLP和GST E12的原核表达质粒pGEX 2TK MLP以及pGEX 4T 2 E12 .在E .coliBL2 1中诱导表达GST MLP、GST 生肌素和GST E12 ,并用亲和层析法纯化了这 3种GST融合蛋白 .这 3种GST融合蛋白进行的凝胶阻滞试验表明 ,MLP可以增强生肌素 E12复合物对AChRγ亚基基因启动子的结合活性 .研究初步阐明了MLP增强nAChRγ亚基基因启动子在分化C2C12细胞中的转录活性的分子机制 . 展开更多
关键词 MLP 生肌素 nachr γ亚基基因启动子 结合活性
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小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体α亚基cDNA片段的克隆和序列分析 被引量:8
3
作者 韩招久 韩召军 +2 位作者 李凤良 李忠英 陈之浩 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期29-32,共4页
利用简并引物 ,采用PCR等分子生物学技术 ,对小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体 (nAChR)α亚基的cDNA片段进行克隆 ,并对序列进行分析。测序结果显示 ,扩增的目的基因片段包含了nAChRα亚基的 3种亚型 (分别命名为Pxαl、Pxα2、Pxα3) ,都具有... 利用简并引物 ,采用PCR等分子生物学技术 ,对小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体 (nAChR)α亚基的cDNA片段进行克隆 ,并对序列进行分析。测序结果显示 ,扩增的目的基因片段包含了nAChRα亚基的 3种亚型 (分别命名为Pxαl、Pxα2、Pxα3) ,都具有典型的α亚基的结构 :2个相邻的半胱氨酸 ,由 2个半胱氨酸之间二硫键形成包含 15个氨基酸的胞外环 ,与烟碱和α银环蛇毒素结合有关的氨基酸残基。克隆的基因片段在氨基酸序列上和其他昆虫nAChRα亚基基因之间有高达 6 5 %~ 99%的同源性 ,表明克隆的cDNA片段是小菜蛾nAChRα亚基基因的部分序列。 展开更多
关键词 小菜蛾 烟碱型 乙酰胆碱受体 Α亚基 CDNA片段 克隆 序列分析
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二化螟抗杀虫单和甲胺磷品系的生化特性(英文) 被引量:8
4
作者 韩招久 韩召军 +1 位作者 王荫长 陈长琨 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期161-171,共11页
二化螟抗性和敏感品系分别采自浙江和安徽太湖。毒力测定结果表明 ,抗性品系对杀虫单和甲胺磷分别产生了 37 7和 5 2 7倍的抗性。代谢酶活性的测定结果显示 ,抗性品系多功能氧化酶氧脱甲基活性、氮脱甲基活性分别是敏感品系的3 3和 1 3... 二化螟抗性和敏感品系分别采自浙江和安徽太湖。毒力测定结果表明 ,抗性品系对杀虫单和甲胺磷分别产生了 37 7和 5 2 7倍的抗性。代谢酶活性的测定结果显示 ,抗性品系多功能氧化酶氧脱甲基活性、氮脱甲基活性分别是敏感品系的3 3和 1 34倍 ,而羧酸酯酶活性和谷胱甘肽转移酶活性两个品系之间没有显著差异。说明多功能氧化酶活性提高可能是二化螟对甲胺磷、杀虫单抗性的一个重要机制。为了研究二化螟可能存在的对沙蚕毒素杀虫剂靶标不敏感机制 ,采用RT -PCR等分子生物学技术 ,分别对 5个敏感个体和 4抗性个体中克隆杀虫单作用的靶标烟碱型乙酰胆碱受体α1亚基 (nAChRαsubunit 1)cDNA序列进行了分子克隆。序列比较发现一共存在 33个单核苷酸的多态性 ,其中 14个引起了编码氨基酸的改变。但是没有发现与抗性有关的特有的碱基突变。 展开更多
关键词 二化螟 抗药性 生化机制 烟碱型乙酰胆碱受体亚基(nachrα1) 单核苷酸多态性(SNP)
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烟碱型乙酰胆碱受体及其亚单位的结构功能 被引量:7
5
作者 王秋雨 金莉莉 LI Ziwei 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期221-226,共6页
烟碱型乙酰胆碱受体是配体门控的离子通道蛋白,每个受体由5个亚单位组成,每个亚单位具有4个跨膜α螺旋结构域。通道孔由5个亚单位的M2结构域(α螺旋)环绕围成,它们放射状地排列,使通道孔在膜中部逐渐变细。另外15个α螺旋相互盘绕,构成... 烟碱型乙酰胆碱受体是配体门控的离子通道蛋白,每个受体由5个亚单位组成,每个亚单位具有4个跨膜α螺旋结构域。通道孔由5个亚单位的M2结构域(α螺旋)环绕围成,它们放射状地排列,使通道孔在膜中部逐渐变细。另外15个α螺旋相互盘绕,构成通道的外环。至今已确认了17种亚单位,它们由一个共同起源的基因家族编码,在中枢神经系统、周围神经系统和肌肉组织广泛表达。众多的亚单位,再加上组织表达的特异性导致受体类型的多样性,结果使该受体具有广泛的生理、药理特性和功能。进年来,基因敲除等现代遗传操作技术提供了在体内研究各类型受体的有效手段,使人类对该受体及亚单位的结构和功能有了长足的认识。 展开更多
关键词 烟碱型乙酰胆碱受体 神经 肌肉 结构 通道开关
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运动对成长期骨骼肌神经肌肉接头N乙酰胆碱受体表达的影响 被引量:5
6
作者 安楠 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2011年第11期56-60,共5页
研究目的:通过分析骨骼肌神经肌肉接头(NMJ)N乙酰胆碱受体(nAChR)亚基在成长期(离乳-性成熟)的表达特征,了解NMJ发育过程中的变化及运动对这一过程的影响。研究方法:对3周龄SD雄性大鼠进行运动增强(跑台运动)和运动减弱(尾... 研究目的:通过分析骨骼肌神经肌肉接头(NMJ)N乙酰胆碱受体(nAChR)亚基在成长期(离乳-性成熟)的表达特征,了解NMJ发育过程中的变化及运动对这一过程的影响。研究方法:对3周龄SD雄性大鼠进行运动增强(跑台运动)和运动减弱(尾部悬吊)干预,测定γ-、ε-、-δnAChR mRNA在3~8周龄的表达水平。结果:1)大鼠腓肠肌γ-、ε-、-δnAChR的表达水平在出生后3~5周迅速下降,至5周龄时仅有微量的表达;2)悬吊组-γnAChR在5周龄时表达水平高于对照组;运动组-γnAChR在8周龄时表达水平低于对照组;3)ε-和δ-nAChR表达水平在组间无显著性差异。结论:骨骼肌NMJ的发育在出生后早期具有典型的敏感期;运动训练可以促进胚胎型-γnAChR的消退,限制运动则显著延缓这一过程;成熟后的NMJ具有一定的结构稳定性。 展开更多
关键词 运动 神经肌肉接头 成长期 发育 N乙酰胆碱受体亚基 动物实验
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生肌素引起组蛋白H3和H4高度乙酰化及染色质溶解性增加
7
作者 宫明 倪菊华 贾弘褆 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期92-95,共4页
为研究生肌素在染色质重建过程中的作用 ,采用生肌素真核表达载体转染C2C12肌细胞 ,细胞核经微球菌核酸酶消化后 ,提取DNA进行SDS PAGE分析 .生肌素转染的细胞 ,其核小体 (染色质 )在Mg2 + 溶液中的溶解性明显增加 ,提示染色质组蛋白乙... 为研究生肌素在染色质重建过程中的作用 ,采用生肌素真核表达载体转染C2C12肌细胞 ,细胞核经微球菌核酸酶消化后 ,提取DNA进行SDS PAGE分析 .生肌素转染的细胞 ,其核小体 (染色质 )在Mg2 + 溶液中的溶解性明显增加 ,提示染色质组蛋白乙酰化程度提高 .组蛋白经TAU SDS(2 D)双相凝胶电泳分析 ,发现在转染生肌素真核表达载体 2 4h后 ,组蛋白H4的乙酰化修饰程度最高 .采用抗乙酰化组蛋白H3和H4抗体进行的Western印迹分析进一步证明了乙酰化的发生 .上述变化与染色质的活跃程度相关 .RT PCR结果显示 ,生肌素的靶基因烟碱样乙酰胆碱受体 (nAChR)α亚基和肌酸激酶 (MCK)基因在转染后表达水平提高 .结果提示 ,强制性表达外源性生肌素可引起肌细胞核染色质重建 。 展开更多
关键词 生肌素 组蛋白乙酰化 染色质重塑 烟碱样乙酰胆碱受体α-亚基
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烟粉虱烟碱型乙酰胆碱受体α亚基Btα4基因的克隆和序列分析 被引量:2
8
作者 姚明德 杨亦桦 +1 位作者 武淑文 吴益东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期61-66,共6页
利用RT-PCR和RACE技术,对烟粉虱烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α亚基的1个基因进行了克隆和序列分析。获得的烟粉虱nAChRα亚基基因的全长cDNA序列含有2 090 bp,其开放阅读框编码564个氨基酸。根据该基因编码的氨基酸序列与其他昆虫乙酰胆... 利用RT-PCR和RACE技术,对烟粉虱烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α亚基的1个基因进行了克隆和序列分析。获得的烟粉虱nAChRα亚基基因的全长cDNA序列含有2 090 bp,其开放阅读框编码564个氨基酸。根据该基因编码的氨基酸序列与其他昆虫乙酰胆碱受体α亚基氨基酸序列之间的相似性,将该基因命名为Btα4(GenBank注册号为EF590120)。Btα4编码的α亚基含有2个结构域:N端的胞外结构域和C端的跨膜结构域,N端的胞外结构域含有2个相邻的半胱氨酸(α亚基特征序列)、15个氨基酸构成的半胱氨酸环和乙酰胆碱结合区。研究结果对于揭示烟粉虱潜在的对新烟碱类杀虫剂靶标抗性的分子机制具有重要意义。 展开更多
关键词 烟粉虱 烟碱型乙酰胆碱受体 Α亚基 Bta4 新烟碱类杀虫剂
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烟碱暴露对成瘾相关烟碱型乙酰胆碱受体的影响及调控机理 被引量:1
9
作者 耿怡佳 陈欢 +2 位作者 朱欣潮 侯宏卫 胡清源 《生命科学研究》 CAS CSCD 2019年第2期152-161,共10页
烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs)是由5个亚基组合形成的配体门控离子通道。根据亚基组成和排列的不同, nAChRs存在多种亚型。由于结构与乙酰胆碱相似,烟碱也是nAChRs的激动剂。大量研究表明,烟碱能影响n... 烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs)是由5个亚基组合形成的配体门控离子通道。根据亚基组成和排列的不同, nAChRs存在多种亚型。由于结构与乙酰胆碱相似,烟碱也是nAChRs的激动剂。大量研究表明,烟碱能影响nAChRs的表达和活性。同时, nAChRs又介导了烟碱成瘾的机制。文中基于最新的研究成果,简要综述了nAChRs的类型、分布和测定方法,并重点阐述了烟碱调控nAChRs表达的机制以及nAChRs在烟碱成瘾过程中的介导作用。 展开更多
关键词 烟碱型乙酰胆碱受体(nachrs) 亚基 烟碱 受体上调:机制
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鸡AChRγ亚基基因远上游增强子样作用依赖生肌因子 被引量:4
10
作者 肖国芝 贾弘 张迺蘅 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第5期521-524,共4页
先前曾报告鸡AChRγ亚基基因5'连接区-538/-288片段(含一对E盒子)与生肌调节因子(myogenin)的相互作用,为进一步观察DNA-myogenin相互作用对γ基因转录激活功能的影响,利用瞬时表达体系研究... 先前曾报告鸡AChRγ亚基基因5'连接区-538/-288片段(含一对E盒子)与生肌调节因子(myogenin)的相互作用,为进一步观察DNA-myogenin相互作用对γ基因转录激活功能的影响,利用瞬时表达体系研究了鸡nAChRγ亚基基因5'端-538/-288片段调控机能。CAT分析表明:γ基因-538/-288片段可显著激活tk启动子在分化的C2C12肌细胞中的转录活性,但不能激活在未分化C2C12肌细胞中的转录活性。这种组织特异性转录激活作用与距离无关,因而是一个典型的增强子;-538/-288片段的增强子样作用既依赖于两毗邻E盒子的完整性,又依赖于myogenin等生肌调节因子的存在。强化表达myogenin可激活pBLCAT2-γ(-538/-433)和pBLCAT2-γ(-432/-288)(各含一个E盒子)在分化肌细胞中的表达,究竟是克隆片段中的独立E盒子对这种表达起贡献还是出现在克隆位点附近的反向E盒子(GTCGAC)或tk启动子中的另一个E盆子起作用?尚不十分清楚。 展开更多
关键词 AchRγ亚基基因 增强子 生肌因子
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鸡AChRγ亚基基因远端E盒子与myogenin的相互作用 被引量:3
11
作者 肖国芝 贾弘 张迺蘅 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第5期516-520,共5页
业已证明,鸡nAchRγ亚基基因5'连接区,-509/-302,-324/+36片段可独立激活异源启动子SV40的转录活性;γ基因近端两个E盒子(CANNTG)与生肌调节因子(myogenin)的相互作用及转录激活分... 业已证明,鸡nAchRγ亚基基因5'连接区,-509/-302,-324/+36片段可独立激活异源启动子SV40的转录活性;γ基因近端两个E盒子(CANNTG)与生肌调节因子(myogenin)的相互作用及转录激活分析表明,近端两个E盒于是γ启动子活性必不可少的,但却是不充分的。利用胶阻滞和DNaseⅠ足纹试验观察了鸡nAcbRγ基因远端E盒子与GST-myogenin融合蛋白的相互作用。胶阻滞试验证明,-538/-288片段可与myogenin相互结合,引起(32) ̄p标记的DNA片段在PAGE中迁移率减慢,这种胶阻滞现象可被含E盒子的未标记片段消除,并被抗鸡myogenin单克隆抗体或抗血清所改变。DNaseⅠ足纹试验证明,myogenin系通过γ基因转录起始点上游-429/-424及-463/-458两个E盒子与γ基因5'连接区-538/-288相互作用。 展开更多
关键词 AchRγ亚基基因 E盒子 MYOGENIN
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烟碱型乙酰胆碱受体β4亚基点突变体的构建
12
作者 张璐 朱晓鹏 +1 位作者 长孙东亭 罗素兰 《热带生物学报》 2019年第4期307-313,共7页
利用PCR介导的定点突变技术构建包含β4亚基的烟碱型乙酰胆碱受体点突变体模型,同时采用双电极电压钳技术,对激动剂ACh和拮抗剂α-CTx RegIIA对突变受体的活性进行检测。结果表明:β4亚基胞外N端序列第168位的异亮氨酸(Ile)成功突变成... 利用PCR介导的定点突变技术构建包含β4亚基的烟碱型乙酰胆碱受体点突变体模型,同时采用双电极电压钳技术,对激动剂ACh和拮抗剂α-CTx RegIIA对突变受体的活性进行检测。结果表明:β4亚基胞外N端序列第168位的异亮氨酸(Ile)成功突变成了丝氨酸(Ser),突变后的受体对激动剂ACh的活性降低,对拮抗剂α-CTx RegIIA的活性降低了1.4倍,半阻断剂量(IC50)为170 nmol·L^-1。 展开更多
关键词 烟碱型乙酰胆碱受体 β4亚基 PCR介导的定点突变 双电极电压钳技术
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Putative nicotinic acetylcholine receptor subunits express differentially through the life cycle of codling moth, Cydia pomonella (Lepidoptera: Tortricidae) 被引量:3
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作者 Jessica A. Martin Stephen F. Garczynski 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期277-287,共11页
Nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) are the targets of neonicotinoids and spinosads, two insecticides used in orchards to effectively control codling moth, Cydia pomonella (L.) (Lepidoptera: Tortricidae)... Nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) are the targets of neonicotinoids and spinosads, two insecticides used in orchards to effectively control codling moth, Cydia pomonella (L.) (Lepidoptera: Tortricidae). Orchardists in Washington State are concerned about the possibility of codling moth field populations developing resistance to these two insecticides. In an effort to help mitigate this issue, we initiated a project to identify and characterize codling moth nAChR subunits expressed in heads. This study had two main goals; (i) identify transcripts from a codling moth head transcriptome that encode for nAChR subunits, and (ii) determine nAChR subunit expression profiles in various life stages of codling moth. From a codling moth head transcriptome, 24 transcripts encoding for 12 putative nAChR subunit classes were identified and verified by PCR amplification, cloning, and sequence determination. Characterization of the deduced protein sequences encoded by putative nAChR transcripts revealed that they share the distinguishing features of the cys-loop ligand-gated ion channel superfamily with 9 α-type subunits and 3 β- type subunits identified. Phylogenetic analysis comparing these protein sequences to those of other insect nAChR subunits supports the identification of these proteins as nAChR subunits. Stage expression studies determined that there is clear differential expression of many of these subunits throughout the codling moth life cycle. The information from this study will be used in the future to monitor for potential target-site resistance mechanisms to neonicotinoids and spinosads in tolerant codling moth populations. 展开更多
关键词 codling moth nachr expression nicotinic acetylcholine receptor subunits
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α-芋螺毒素TxID对亚基不同配比α3β4乙酰胆碱受体的敏感性研究 被引量:3
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作者 长孙东亭 吴勇 +1 位作者 朱晓鹏 罗素兰 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期802-808,共7页
目的研究α-芋螺毒素TxID对具有不同亚基配比组成的大鼠α3β4乙酰胆碱受体(nAChRs)的阻断活性敏感性。方法利用非洲爪蟾卵母细胞表达大鼠α3β4乙酰胆碱受体亚型,将其亚基α3和β4的cRNA分别以3种不同比例,即1∶1、1∶10或10∶1注射到... 目的研究α-芋螺毒素TxID对具有不同亚基配比组成的大鼠α3β4乙酰胆碱受体(nAChRs)的阻断活性敏感性。方法利用非洲爪蟾卵母细胞表达大鼠α3β4乙酰胆碱受体亚型,将其亚基α3和β4的cRNA分别以3种不同比例,即1∶1、1∶10或10∶1注射到非洲爪蟾卵母细胞中进行表达,形成不同亚基配比的α3β4受体,分别检测和比较α-芋螺毒素TxID对这些不同亚基配比受体的阻断活性。结果成功表达了α3和β4亚基的3个不同配比的受体,且α-芋螺毒素TxID对它们的敏感性有较大差异,与常规的1∶1α3β4乙酰胆碱受体相比,1∶10α3β4乙酰胆碱受体对TxID的敏感度与之接近,其活性差异在2倍以内,而10∶1α3β4乙酰胆碱受体对TxID的敏感度显著下降,其活性差异超过了5倍。结论α-芋螺毒素TxID对不同亚基配比的α3β4乙酰胆碱受体有不同的敏感性,并能反应该受体的α和β亚基不同的组成方式,这对于研究α3β4乙酰胆碱受体的结构和生理功能具有很重要的指导意义。 展开更多
关键词 α-芋螺毒素TxID α3β4乙酰胆碱受体 非洲爪蟾卵母细胞 α和β亚基配比 活性敏感性
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