基于nanoUPLC-MS/MS的螺旋藻游离肽组成分析

为了研究螺旋藻中的多肽成分,以钝顶螺旋藻为原料,采用超滤法提取螺旋藻中的游离肽,利用nanoUPLC-MS/MS和PEAKS Studio分析谱图信息,结合NCBI数据库进行比对和从头测序分析,获得游离肽的结构组成和百分含量信息。结果表明,利用数据库比对法和从头测序法,分别得到可信的游离肽4485个和20597个,匹配到的蛋白质有1036种。数据库比对结果中的游离肽主要为七肽到二十一肽,少量为二十一肽以上;从头测序结果中游离肽主要为二肽到十六肽,少量为十六肽以上。数据库比对结果中百分含量最高的游离肽是十肽,为15.95%;从头测序结果中百分含量最高的是五肽,达到24.09%。本研究结果为螺旋藻蛋白资源的进一步开发和利用提供了依据。

nanoUPLC Q-TOF MS/MS在大鼠肝移植蛋白质组学研究中潜在生物标记物的应用

建立应用纳升级超高效液相色谱-质谱(nanoUPLC Q-TOF MS/MS)联用技术研究大鼠同位肝移植术后不同时间差异表达蛋白质的蛋白质组学方法。建立10组大鼠肝移植动物模型后,随机分成术后3天组(n=5)和术后7天组(n=5)。分别于术后3天和7天处死5只受体,取肝组织,提取总蛋白,Trypsin酶解后,使用Waters公司独家专利MSeTM无标记定量技术,利用nanoUPLC-MS/MS技术对酶解后的肽段进行分析,数据库检索鉴定蛋白质,采用生物信息学工具对所鉴定的蛋白质进行功能分类。7天组与3天组相比,两样品中同时存在的大部分蛋白上调,其中10个蛋白点表达水平明显上调,比值变化在8.5倍以上。结合数据库搜索得到鉴定,这些明显上调的蛋白的分子功能主要与细胞骨架、离子结合、氧化应激反应、能量代谢等相关。

NanoUPLC-nano-ESI-MS/MS鉴定二维凝胶银染后蛋白质点的方法

目的提高银染色后二维凝胶电泳图谱中蛋白质斑点的鉴定率。方法采用欧洲分子生物学实验室(EMBL)银染色方法结合改进后的质谱兼容胶内酶切方法并应用超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱(NanoUPLC-nano-ESI-MS/MS)对二维凝胶电泳上的蛋白质斑点进行分析。结果二维凝胶上50个蛋白质斑点中46个点得到鉴定,共鉴定出74个有意义的蛋白质,其中一个蛋白斑点鉴定出6个有意义的蛋白质。结论该方法获得的样品经质谱检测和网上数据库比对,蛋白鉴定率高达90%以上,与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)方法相比,蛋白质的鉴定率明显提高,表明该方法适合鉴定复合蛋白质斑点,是鉴定银染后二维凝胶蛋白质的一种强有力的分析手段。

明胶来源检测方法

明胶是一种有着独特分子结构的生物大分子,因其独特的功能特性而被应用在生活的方方面面。明胶在世界上用量非常大,但是因为牛脑海绵状病,牛明胶的使用受到限制,而猪明胶也因一些宗教信仰使用受到限制;因此研究分析明胶物种来源的方法是十分必要的。本文介绍了两种明胶的鉴别方法,并希望能建立一种分析明胶来源的检测标准。

肝移植并免疫抑制剂联合用药后人血清差异蛋白质的鉴定

建立了基于质谱技术的应用免疫抑制剂肝移植后人血清中差异表达蛋白质的分析方法。肝移植前后的人血清用双向凝胶电泳分离,硝酸银染色,选取的差异蛋白质斑点用表面活性剂Rapigest SF变性和胰蛋白酶进行胶内酶解后,采用纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱(nanoUPLC-ESI-MS/MS)进行鉴定。本实验明确鉴定了9个显著差异表达的蛋白质斑点,对应8个不同的蛋白质,所发现的差异蛋白质多与免疫调节和肝病有关,可为深入研究肝移植术后免疫抑制剂抗排斥作用的分子机理提供线索。

NanoLC-ESI MS/MS对重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白的准确鉴定

NanoUPLC-ESI MS/MS was used to characterize the primary structure of recombinant human necrosis factor-αreceptorⅡ:IgG Fc fusion protein.The result indicated that the IgG Fc was IgG1 Fc but not others.This study is important for this recombinant protein medicine to enter into international market.

肝移植后人血清中差异表达蛋白质的纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱鉴定

建立了基于质谱的人肝移植后血清中差异表达蛋白质的分析方法，肝移植前后的人血清蛋白质用双向凝胶电泳分离，AgNO，染色，差异蛋白质斑点用胰蛋白酶进行胶内酶解后，采用纳升超高效液相色谱-电喷雾串联质谱进行鉴定。鉴定了8个显著差异表达的蛋白质，Mascot检索分值101～1543分，肽段匹配数5～34个，序列覆盖率10％～43％。所发现的差异蛋白质多与免疫调节有关，可为深入研究肝移植术后免疫排斥的分子机理提供线索。