以测序法为准比较HRM法、ADx-ARMS法和TaqMan探针法检测肺腺癌EGFR基因突变的敏感性

目的采用高分辨率熔解曲线法(HRM法)、Adx-ARMS法、Taq Man探针法和直接测序法检测肺腺癌组织中表皮生长因子受体基因(EGFR)的突变情况,并比较各方法的检测效率和敏感性。方法收集20例肺腺癌石蜡包埋肿瘤组织,其中18例为手术切除标本,2例为穿刺小标本,应用HRM法、ARMS法和Taq Man探针法分别检测EGFR基因突变,对检测结果不一致的样本采用测序法加以验证。结果 20例肺腺癌组织样本中,HRM法、ARMS法和Taq Man法分别在13例、10例和8例组织中检测到EGFR基因突变,差异不显著(P>0.05)。差异标本经测序验证后发现,HRM法可检测未知突变,而ARMS法和Taq Man探针法只能检测已知突变。对于2例穿刺小标本,HRM法和ARMS法均检测到突变,而Taq Man探针法未检测出突变,HRM法和ARMs法的检测敏感性高于Taq Man探针法。结论 HRM法、ARMS法、Taq Man探针法和测序法各有优缺点,HRM法敏感性最高,且能检测到少见突变与未知突变,因此HRM法结合测序法能更全面的检测出各种突变类型。

VEGF-C和VEGF-R3在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的 探讨VEGF C及其受体VEGF R3与非小细胞肺癌患者临床病理特征之间的关系。方法 采用免疫组化方法 ,检测 84例非小细胞肺癌组织中VEGF C及VEGF R3表达 ,将表达结果与临床病理特征及预后进行统计学分析。结果 VEGF C和VEGF R3在肺癌细胞膜和细胞浆中高表达 (阳性率分别为5 5 .9%和 5 9.5 % ) ,而在癌旁肺组织中无表达。VEGF C表达与病理类型有密切关系 (P =0 .0 13 ) ;VEGF R3表达与淋巴结转移状况 (P =0 .0 0 2 )及TNM分期 (P =0 .0 2 0 )有密切关系。多因素分析表明 ,VEGF R3 (P <0 .0 0 1)和病理类型 (P =0 .0 2 0 )是影响预后的独立危险因素。结论 检测肺癌组织中VEGF R3表达有助于预测非小细胞肺癌患者预后。

KAI1基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其与患者临床病理指标的关系。方法采用RT-PCR和Western blot法,检测48例肺癌患者手术切除的新鲜肺癌组织标本和20例同期手术切除的肺部良性病变周围正常组织中KAI1mRNA、KAI1/CD82,并结合患者的临床病理资料对其结果进行统计分析。结果肺癌组织和肺部良性病变组织中KAI1mRNA的阳性率分别为52%和90%,KAI1/CD82蛋白的阳性率分别为48%和85%,肺癌组KAI1mRNA及KAI1/CD82蛋白表达均低于肺部良性病变组(P<0.01);KAI1mRNA、KAI1/CD82表达水平与肺癌患者的临床分期、组织分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),其中KAI1/CD82表达与淋巴结转移状况密切相关(P<0.01),肺癌组织中KAI1mRNA与KAI1/CD82表达有相关性(P<0.01)。结论KAI1基因的低表达可能与非小细胞肺癌的发生、发展和转移有关;其下调的机制可能主要发生在转录水平;KAI1基因的表达可作为一项评估肺癌患者转移潜能的指标。

Ⅲ、Ⅳ期空洞型肺鳞癌临床特点回顾性研究

目的探讨Ⅲ、Ⅳ期空洞型肺鳞癌(c SLC)与非空洞型肺鳞癌(nc SLC)患者的临床特点。方法临床分别纳入手术切除的Ⅲ、Ⅳ期c SLC患者21例与nc SLC患者68例,分别对两组患者一般临床情况、病理检查、影像学特征以及生存资料等进行比较分析。结果临床确诊c SLC需要的时间明显长于nc SLC(P<0.05);c SLC患者感染及体质量下降等发生率明显高于nc SLC(P<0.05);c SLC组织细胞的分化程度较nc SLC低,c SLC患者肿瘤体积较大同时伴原发肿瘤范围较广,阻塞性肺炎的临床发生率较高(P<0.05);两组患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤家族史、个人结核史、肺内分布、临床病理分期(p TNM)、淋巴结侵犯程度(N)以及远处转移(M)等方面差异均无显著性(P>0.05);c SLC患者中位生存期为29个月,1年、3年生存率分别为85.71%、42.86%%;nc SLC患者中位生存期为35个月,1年、3年生存率分别为91.18%、47.06%(32/68);两者在生存时间上均没有显著差异(P>0.05)。结论与nc SL比较,Cc SLC原发肿瘤体积较大、分化程度更低、原发肿瘤的范围更广且容易发生阻塞性肺炎。另外,c SLC还可能因此造成确诊时间延长以及体质量降低等。但是,两者在年龄、性别、吸烟史、肿瘤家族史、个人结核史、肺内分布、p TNM、淋巴结侵犯程度(N)以及远处转移(M)等方面无显著的差异,因此目前尚无足够的证据表明c SLC属于特殊类型的鳞癌。

肺癌miR-146a表达及其对细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)在肺癌组织和细胞中的表达和甲基化状态,及其对A549细胞增殖、侵袭、迁移的影响及可能机制。方法收集2018年1月至2019年4月在我院行根治性手术的非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织,实时荧光定量PCR(QPCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测miR-146a的表达水平和甲基化状态,并分析甲基化状态与肺癌临床病理特征的关系。采用5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-AZA-2’-dC)处理A549细胞(处理组),MTT、Transwell实验和划痕实验检测处理组细胞增殖、侵袭和迁移活性。采用Western blotting检测Notch1和发状分裂相关增强子1(Hes-1)蛋白表达。结果肺癌组织和A549细胞中miR-146a表达量分别为0.63±0.28、0.85±0.11,均低于癌旁正常组织和BEAS-2B细胞(P<0.05)。MSP检测显示肺癌组织miR-146a甲基化率为62.5%(50/80),高于癌旁组织(P<0.05);miR-146a甲基化状态与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。处理组细胞miR-146a表达水平为2.15±0.48,高于空白对照组(P<0.05);处理组细胞增殖、侵袭和迁移活性均低于空白对照组(P<0.05)。处理组Notch1蛋白和Hes-1蛋白表达水平分别为0.24±0.05和0.22±0.06,均低于空白对照组(P<0.05)。结论启动子异常甲基化导致在肺癌组织和细胞中miR-146a表达量降低,可能通过减弱对Notch1/Hes-1信号通路的抑制作用,促进肺癌细胞增殖、侵袭和转移,miR-146a有望成为肺癌新的生物治疗靶点。

hsa-miR-221调控非小细胞肺癌分子网络的生物信息学分析

目的应用生物信息学的方法研究hsa-miR-221在非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)中的分子调控网络。方法运用UCSC基因组浏览器、人类miRNA疾病数据库、TF-miRNA结合数据库、miRNA靶基因预测数据库、GeneCards数据库、肺癌相关因子整合数据库和转录因子结合谱数据库等,研究hsa-miR-221上游转录因子、下游靶基因及与其有相互作用的lncRNA的多个调控途径,绘制hsa-miR-221在NSCLC中分子调控网络。利用GEO数据库验证关键基因。结果UCSC数据库显示hsa-miR-221位于X染色体,在多个物种中保守。hsa-miR-221与多种癌症包括NSCLC相关。分析表明hsa-miR-221受6个与NSCLC相关的转录因子如MYC、MYCN等的调控,同时又调控下游基因PTEN、RB1和BCL2等26个基因。另外,lncRNA基因GAS5、HOTAIR和TUG1及其转录因子Snail、n-MYC、ARNT和SOX5等也可能参与调控hsa-miR-221,从而构成一个以hsa-miR-221为核心的调控网络,在NSCLC的发生和发展中起重要作用。通过对GEO数据库hsa-miR-221高表达NSCLC细胞系差异基因分析,最终验证了5个基因。结论用生物信息学的方法预测hsa-miR-221的分子调控网络,为阐明其调控NSCLC的发病机制提供指导。