为了研究注射外源性神经介素B(NMB)对小鼠睾丸中NMB及其受体和睾酮合成关键酶(St AR、CYP11A1和3β-HSD)表达及血清中睾酮浓度的影响,试验将40只雄性ICR小鼠随机分成12 h对照组(12 h Control组)、12 h试验组(12 h NMB组)、24 h对照组(24...为了研究注射外源性神经介素B(NMB)对小鼠睾丸中NMB及其受体和睾酮合成关键酶(St AR、CYP11A1和3β-HSD)表达及血清中睾酮浓度的影响,试验将40只雄性ICR小鼠随机分成12 h对照组(12 h Control组)、12 h试验组(12 h NMB组)、24 h对照组(24 h Control组)和24 h试验组(24 h NMB组),每组10只,2个对照组和2个试验组分别按体重10μL/g腹腔注射生理盐水和10 nmol/L NMB溶液;称量注射前后小鼠体重,计算饲料用量,并观察小鼠行为特征;各组小鼠分别于注射后12小时、24小时摘眼球采血并处死取睾丸,通过ELISA法检测小鼠血清中睾酮的浓度;通过实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白印迹法(Western-blot)检测小鼠睾丸中NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA和蛋白表达量。结果表明:与12 h Control组相比,12 h NMB组小鼠行为无明显异常,体重增量、总摄食量略有减少,料重比略有增高,但差异不显著(P>0.05);NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与24 h Control组相比,24 h NMB组小鼠被毛粗乱、脾气暴躁,体重增量显著减少(P<0.05);总摄食量减少,料重比略有增高,但均差异不显著(P>0.05);NMB m RNA和蛋白表达量极显著降低(P<0.01),NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与12 h NMB组相比,24 h NMB组NMBR m RNA表达量极显著降低(P<0.01),24 h NMB组NMBR蛋白表达量显著增加(P<0.05)。说明小鼠腹腔注射NMB能够抑制小鼠摄食,但对小鼠睾丸中睾酮的合成和分泌影响不大。展开更多
目的:探讨神经调节素B受体(neuromedin B receptor,NMBR)在妊娠小鼠子宫平滑肌细胞中mRNA、蛋白时空表达的变化及其与分娩启动的关系和机制。方法:按妊娠阶段的不同,将小鼠分为未孕组、早孕组、中孕组、晚孕组、产时组和产后组,每组12...目的:探讨神经调节素B受体(neuromedin B receptor,NMBR)在妊娠小鼠子宫平滑肌细胞中mRNA、蛋白时空表达的变化及其与分娩启动的关系和机制。方法:按妊娠阶段的不同,将小鼠分为未孕组、早孕组、中孕组、晚孕组、产时组和产后组,每组12例。应用半定量RT-PCR和Western免疫印迹技术分别检测子宫平滑肌中NMBR,IL-6和HSP70mRNA及蛋白表达;利用NoShift转录因子分析法检测NF-κB-P65的DNA结合活性,并分析各指标与分娩的关系及其相关性。结果:产时组NMBRmRNA的相对表达量显著高于未孕、早孕、晚孕、产后组(P<0.05),但与中孕组相比差异无统计学意义(P>0.05);产时组NMBR蛋白表达量显著高于其它各组(P<0.01)。NF-κB-P65DNA结合活性产时组显著高于未孕、晚孕和产后组(P<0.05)。IL-6mRNA表达产时组显著高于未孕、晚孕和产后组(P<0.05),其蛋白表达产时组亦显著高于未孕和产后组(P<0.05)。HSP70mRNA表达量产时组显著高于未孕和产后组(P<0.05),HSP70蛋白的表达量产时组明显高于晚孕、未孕组(P<0.05)。临产前后子宫平滑肌细胞P65DNA结合活性、IL-6mRNA的表达均与NMBRmRNA的变化呈正相关(r=0.40,P<0.01;r=0.30,P<0.05);P65,HSP70mRNA的变化亦与NMBR的变化呈正相关(r=0.40,P<0.01;r=0.49,P<0.01);但HSP70与P65无相关性。结论:子宫平滑肌细胞中NMBRmRNA和蛋白表达在临产时达最高峰。NMBR可借助NF-κB P65-IL-6通路、通过调节HSP70表达参与分娩发动和维持,但其对HSP70表达的影响不依赖P65途径。展开更多
神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor,NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何,尚未见报道。为探究NMB...神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor,NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何,尚未见报道。为探究NMB和NMBR调控IAV诱导的NF-κB信号通路相关的泛素蛋白酶表达的影响,本研究基于IAV/H9N2感染sh-NMBR细胞与NMB刺激的A549细胞,采用RT-PCR、qRT-PCR及Western blot(WB)分析NMB和NMBR对H9N2感染引起的NF-κB信号通路相关的E3泛素连接酶Mind bomb-2(MIB2)和Ring Finger Protein 8(RNF8)及去泛素蛋白酶Cylindromatosis(CYLD)的表达变化。结果显示:H9N2感染sh-NMBR细胞中,RNF8和CYLD表达增加,MIB2表达和P65磷酸化水平降低;NMB激活A549细胞中NMBR的表达后,诱导细胞中RNF8和CYLD的表达水平下降,MIB2表达和P65磷酸化水平增加。结果表明:NMB和NMBR通过调控IAV/H9N2感染诱导的泛素蛋白酶的表达和P65活性,从而影响IAV/H9N2感染激活的NF-κB信号通路的功能,该结果为深入研究NMB和NMBR抑制甲型流感病毒感染的作用机制提供了理论基础。展开更多
目的构建小鼠神经介素B(neuromedin B,NMB)及其受体(neuromedin B receptor,NMBR)基因慢病毒过表达质粒,并于RAW264.7细胞中表达,以期为小鼠NMB和NMBR基因过表达对RAW264.7细胞增殖及凋亡影响的深入研究奠定基础。方法经RT-PCR法扩增获...目的构建小鼠神经介素B(neuromedin B,NMB)及其受体(neuromedin B receptor,NMBR)基因慢病毒过表达质粒,并于RAW264.7细胞中表达,以期为小鼠NMB和NMBR基因过表达对RAW264.7细胞增殖及凋亡影响的深入研究奠定基础。方法经RT-PCR法扩增获得小鼠NMB和NMBR基因的编码序列(coding sequence,CDS),插入载体pCD513B-1,构建重组质粒pCD513B-1-NMB和pCD513B-1-NMBR;于HEK-293T细胞包装获得小鼠NMB和NMBR基因过表达慢病毒,通过倍比稀释法检测病毒效价。用慢病毒感染RAW264.7细胞48 h后,qPCR法检测小鼠NMB和NMBR基因mRNA的表达情况,以未感染细胞为对照。结果经双酶切鉴定证明重组质粒构建正确。小鼠NMB和NMBR基因过表达慢病毒滴度分别为6×10~6和8×10~6TU/mL。2种慢病毒转染RAW264.7细胞中小鼠NMB和NMBR基因mRNA表达量显著高于对照组(t分别为24.158和14.958,P均<0.01)。结论成功构建了小鼠NMB和NMBR基因过表达质粒,能够显著提高RAW264.7细胞NMB和NMBR基因的表达量。展开更多
文摘为了研究注射外源性神经介素B(NMB)对小鼠睾丸中NMB及其受体和睾酮合成关键酶(St AR、CYP11A1和3β-HSD)表达及血清中睾酮浓度的影响,试验将40只雄性ICR小鼠随机分成12 h对照组(12 h Control组)、12 h试验组(12 h NMB组)、24 h对照组(24 h Control组)和24 h试验组(24 h NMB组),每组10只,2个对照组和2个试验组分别按体重10μL/g腹腔注射生理盐水和10 nmol/L NMB溶液;称量注射前后小鼠体重,计算饲料用量,并观察小鼠行为特征;各组小鼠分别于注射后12小时、24小时摘眼球采血并处死取睾丸,通过ELISA法检测小鼠血清中睾酮的浓度;通过实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白印迹法(Western-blot)检测小鼠睾丸中NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA和蛋白表达量。结果表明:与12 h Control组相比,12 h NMB组小鼠行为无明显异常,体重增量、总摄食量略有减少,料重比略有增高,但差异不显著(P>0.05);NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与24 h Control组相比,24 h NMB组小鼠被毛粗乱、脾气暴躁,体重增量显著减少(P<0.05);总摄食量减少,料重比略有增高,但均差异不显著(P>0.05);NMB m RNA和蛋白表达量极显著降低(P<0.01),NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与12 h NMB组相比,24 h NMB组NMBR m RNA表达量极显著降低(P<0.01),24 h NMB组NMBR蛋白表达量显著增加(P<0.05)。说明小鼠腹腔注射NMB能够抑制小鼠摄食,但对小鼠睾丸中睾酮的合成和分泌影响不大。
文摘目的:探讨神经调节素B受体(neuromedin B receptor,NMBR)在妊娠小鼠子宫平滑肌细胞中mRNA、蛋白时空表达的变化及其与分娩启动的关系和机制。方法:按妊娠阶段的不同,将小鼠分为未孕组、早孕组、中孕组、晚孕组、产时组和产后组,每组12例。应用半定量RT-PCR和Western免疫印迹技术分别检测子宫平滑肌中NMBR,IL-6和HSP70mRNA及蛋白表达;利用NoShift转录因子分析法检测NF-κB-P65的DNA结合活性,并分析各指标与分娩的关系及其相关性。结果:产时组NMBRmRNA的相对表达量显著高于未孕、早孕、晚孕、产后组(P<0.05),但与中孕组相比差异无统计学意义(P>0.05);产时组NMBR蛋白表达量显著高于其它各组(P<0.01)。NF-κB-P65DNA结合活性产时组显著高于未孕、晚孕和产后组(P<0.05)。IL-6mRNA表达产时组显著高于未孕、晚孕和产后组(P<0.05),其蛋白表达产时组亦显著高于未孕和产后组(P<0.05)。HSP70mRNA表达量产时组显著高于未孕和产后组(P<0.05),HSP70蛋白的表达量产时组明显高于晚孕、未孕组(P<0.05)。临产前后子宫平滑肌细胞P65DNA结合活性、IL-6mRNA的表达均与NMBRmRNA的变化呈正相关(r=0.40,P<0.01;r=0.30,P<0.05);P65,HSP70mRNA的变化亦与NMBR的变化呈正相关(r=0.40,P<0.01;r=0.49,P<0.01);但HSP70与P65无相关性。结论:子宫平滑肌细胞中NMBRmRNA和蛋白表达在临产时达最高峰。NMBR可借助NF-κB P65-IL-6通路、通过调节HSP70表达参与分娩发动和维持,但其对HSP70表达的影响不依赖P65途径。
文摘神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor,NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何,尚未见报道。为探究NMB和NMBR调控IAV诱导的NF-κB信号通路相关的泛素蛋白酶表达的影响,本研究基于IAV/H9N2感染sh-NMBR细胞与NMB刺激的A549细胞,采用RT-PCR、qRT-PCR及Western blot(WB)分析NMB和NMBR对H9N2感染引起的NF-κB信号通路相关的E3泛素连接酶Mind bomb-2(MIB2)和Ring Finger Protein 8(RNF8)及去泛素蛋白酶Cylindromatosis(CYLD)的表达变化。结果显示:H9N2感染sh-NMBR细胞中,RNF8和CYLD表达增加,MIB2表达和P65磷酸化水平降低;NMB激活A549细胞中NMBR的表达后,诱导细胞中RNF8和CYLD的表达水平下降,MIB2表达和P65磷酸化水平增加。结果表明:NMB和NMBR通过调控IAV/H9N2感染诱导的泛素蛋白酶的表达和P65活性,从而影响IAV/H9N2感染激活的NF-κB信号通路的功能,该结果为深入研究NMB和NMBR抑制甲型流感病毒感染的作用机制提供了理论基础。
