氢溴酸槟榔碱对幽门螺杆菌生长和空泡毒素A表达和活性的影响

目的评价氢溴酸槟榔碱对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)的抑制作用及其对H.pylori空泡毒素A表达水平和活性的影响。方法使用平皿稀释固体法和脑心浸液液体法测定中药活性成分氢溴酸槟榔碱对H.pylori的最低抑菌浓度(MIC),以反映药物对H.pylori的抑制作用。通过中性红摄入法评价药物干预后H.pylori培养上清中空泡毒素A对胃癌细胞BGC-823的毒性作用,并通过RT-PCR方法和Western blot方法检测经药物处理后H.pylori菌体及分泌上清中空泡毒素A mRNA和蛋白的表达水平,以反映药物对H.pylori空泡毒素A活性和表达的影响。结果高浓度氢溴酸槟榔碱对H.pylori具有抑制作用,MIC为:固体法和液体法均为1.25 g·L-1。低浓度氢溴酸槟榔碱可不同程度抑制H.pylori空泡毒素A的活性(P<0.01);抑制H.pylori菌体和分泌上清中空泡毒素A mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达。结论氢溴酸槟榔碱在较高浓度(1.25 g·L-1)时具有抑制H.pylori生长作用,而在较低浓度(0.15 g·L-1)时,即可抑制H.pylori空泡毒素A的表达和活性。

雷公藤红素体内与体外急性毒性试验结果的比较

[目的]研究雷公藤红素对3T3细胞的毒性作用,获得的细胞毒性结果预测急性毒性半数致死量（LD50）,并与采用小鼠上下法（UDP）和Bliss法测定的急性毒性数值进行比较。[方法]以已验证的3T3细胞中性红摄取为细胞毒性模型,以0.01-2.05 mg/L的8个浓度（剂间比为2.15）的雷公藤红素进行处理,分别于处理后48 h进行中性红摄取试验,计算半数抑制浓度（IC50）。以RC数学模型预测其全身急性毒性LD50。参考此LD50值设定起始剂量进行小鼠上下法实验。取70只ICR小鼠,雌雄各半,以3、4、5、6、7、8 mg/kg的雷公藤红素溶液和0 mg/kg[4%二甲亚砜（DMSO）氯化钠注射液]静脉给药,观察14 d,根据动物死亡率采用Bliss法计算LD50。[结果]雷公藤红素3T3细胞中性红摄取试验的IC50值为（0.119 7±0.018 7）mg/L（n=2）,决定系数R2〉0.96,预测其全身急性毒性LD50为5.375 mg/kg。上下法起始剂量设为3.3 mg/kg,测得雷公藤红素在ICR小鼠的LD50值为3.157 mg/kg,95%可信区间为3.1-5.5 mg/kg。小鼠Bliss法测定急性毒性LD50为4.899 mg/kg,95%可信区间为4.483-5.354 mg/kg。[结论]雷公藤红素的体外3T3细胞毒性预测急性毒性与体内方法所得数值一致。

中性红摄取实验预测化学品急性毒性研究

目的评估BALB/c小鼠胚胎成纤维细胞中性红摄取(3T3 NRU)实验预测化学品急性毒性的能力及其替代经典急性经口毒性实验的可行性。方法第1阶段从细胞毒性登记库(RC)中选取11种化学品进行暴露24.0、48.0、72.0 h的3T3 NRU实验,将所得半抑制浓度(IC50)与RC中大鼠急性毒性半数致死剂量(LD50)建立回归模型。第2阶段选取15种化学品进行暴露24.0、48.0、72.0 h的3T3 NRU实验,将所得IC50值根据RC回归模型计算LD50预测值,对受试化学品进行急性毒性分级,与经口急性毒性实验LD50值的急性毒性分级结果比较。结果第1阶段实验结果显示:暴露24.0、48.0、72.0 h的3T3 NRU实验IC50值均可与RC提供的LD50建立在RC回归模型可信区间内的回归模型[暴露24.0 h组:lg(LD50)=0.470×lg(IC50)+0.582,决定系数(R2)=0.937,F=132.805,P<0.05;暴露48.0 h组:lg(LD50)=0.475×lg(IC50)+0.638,R2=0.925,F=111.107,P<0.05;暴露72.0 h组:lg(LD50)=0.480×lg(IC50)+0.639,R2=0.933,F=125.514,P<0.05],3T3 NRU实验可应用RC回归模型预测急性毒性的LD50值。第2阶段实验结果显示:暴露24.0、48.0和72.0 h的3T3 NRU实验LD50预测值与经口急性毒性实验LD50值的急性毒性分级一致率分别为60.0%(9/15)、66.7%(10/15)和60.0%(9/15);3T3 NRU实验判断急性毒性为5级的化学品,其急性经口毒性实验的分级均为5级。结论 3T3 NRU实验适合于对低毒的化学品进行检测,可用RC回归模型预测3T3 NRU实验的急性毒性LD50值;对于预测毒性分级为4级及以下者,3T3 NRU实验的LD50预测值可作为经口急性毒性实验始剂量。

基于U251细胞的急性毒性体外检测方法

目的建立基于人神经胶质瘤细胞系U251细胞的急性毒性体外检测方法,初步评估其预测化学品急性毒性的能力。方法体外培养U251细胞,对11种已知急性毒性的化学物质进行中性红摄取试验,获得不同浓度受试物与细胞共孵育24、48和72 h的细胞毒性(IC50)与急性毒性(LD50)的关系,并与Registry Cytotoxicity(RC)模型曲线进行比较;对21种化学品进行中性红摄取试验,根据RC模型预测急性毒性LD50值,并对其进行急性毒性分级,将分级结果与体内急性经口毒性试验分级结果进行比较。结果与U251细胞共孵育24、48和72 h的细胞毒性IC50与相应的急性毒性LD50存在相关性(R224 h=0.857,R248 h=0.895,R272 h=0.929;P<0.05),且结果回归模型在RC模型可接受区间内,本试验体系可应用RC模型预测急性毒性;21种化学品的急性毒性LD50预测值与体内急性毒性LD50值进行比较,分级一致率分别为76.2%(24 h,16/21)、66.7%(48 h,14/21)和71.4%(72 h,15/21)。结论在本试验体系下,U251细胞中性红摄取试验能够较好的预测化学品急性毒性。