The Regulating Effect of the nm23-H1 Gene for PKA Signal Pathway of Lung Cancer Cell and Its Molecular Mechanism

Backgroud and Objective Lung cancer has become the most frenquent malignant tumor in the world which its mortality and morbidity is increasing fastest among all the cancers。

Alterations and Its Mechanisms of Wnt Signal Pathway in Human High-matastatatic Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981 by Transfecting with Nm23-H1 Gene

Backgroud and Objective Tumor metastasis is not only the malignant marker and characteristics of lung cancer, but also the main cause of failure to cure and lose their life of the

Influence of Nm23-H1 Gene Site Mutagenesis on Invasive And Metastatic Phenotype in Human High-Metastatic Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981

Background and Objective Invasion and metastasis is not only the malignant phenotypes of lung cancer but also the main cause of death. To study and elucidate the molecular mechanism

Alteration in Gene Expression Prof ile and Biological Behavior in Human Lung Cancer Cell Line NL9980 by Nm23-H1 Gene Silencing

Background and Objective Lung cancer is the leading cause of cancer death in both men and women. Tumor metastasis is an essential aspect of lung cancer progression. Nm23-H1 is

Alterations in the Cytoskeleton and Biological Behavior in Human Lung Cancer Cell Line L9981 by Nm23-H1 gene Transfection

Objective and Methods The key cause of failure to cure and high mortality in lung cancer. At present, it has been known

The Regulating Mechanism of Nm23-H1 Gene for FAK Signal Pathway in Human Lung Cancer Cell Line L9981

Background and objective Lung Cancer is one of the most malignant cancers threatening people’s health and life and one of the most rapid increasing cancers both in morbidity

Changes of the Proteomic Profiles in Human High-metastatic Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981 by Transfecting with nm23-H1 Gene

Background and Objective Cancer metastasis is not only the malignant characteristics of lung cancer, but also the key cause of failure to cure and high mortality. It has been proved

Comparative Proteomics Study on Human High-metastatic Large Cell Lung Cancer Cell Lines Before and After Transfecting with Nm23-H1 Gene

Background and Objective Lung cancer is not only the most dangerous threating tumor to human’s health and life, but also a malignant tumor with poor prognosis. In the past 10 years,

Transfection of Nm23-H1 Gene Inhibited the Metastatic Potential of Human High-metastatic Large Cell Lung Cancer L9981

Background and objective Invasion and metastasis is not only the malignant phenotypes of lung cancer but also the main cause of death. Elucidating the molecular mechanism of

The Molecular Mechanisms of Nm23-H1 Gene Transfection on Reversing Invasion and Metastasis Phenotype in Human High-metastataic Large Cell Lung Cancer Cell Line L9981

Background and Objective Our previous studies have proved that nm23-H1 gene was a tumor metastatic suppressive gene, tumor metastasis phenotype of human lung cancer could

nm23-H1基因逆转人高转移大细胞肺癌细胞L9981转移表型的分子机制

背景与目的:nm23-H1基因已被证明是转移抑制基因,转染野生型nm23-H1基因可以逆转肿瘤的恶性转移表型,但是nm23-H1基因抑制或逆转肺癌转移的分子机制却知之甚少,我们在建立转nm23-H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1的基础上,进一步探讨nm23-H1基因抑制肺癌转移的分子机制。方法:应用MTT法和改良的Boyden小室法分析转基因前后细胞的体外增殖能力及体外侵袭力的变化,体内实验分析转基因前后细胞在裸鼠体内的成瘤性及肺转移能力的改变,同时应用RT-PCR和Westernblot分别检测各组细胞中转移相关基因β-catenin、E-Cadherin、CD44S、CD44V6、MMP-2、TIMP-1、VEGF、基因mRNA及蛋白表达水平。结果:(1)转基因细胞株L9981-nm23-H1的体外增殖能力[(0%vs.(19.5±2.9)%]、克隆形成能力(10.3±0.7vs.21.7±1.3)及侵袭力显著低于L9981细胞(31.0±3.0vs.151.0±6.3)(P<0.01);(2)nm23-H1基因在裸鼠体内的抑瘤率显著增高(82.6%vs.0%),且转染nm23-H1基因的L9981细胞裸鼠体内移植瘤肺转移显著降低(0%vs.100%)(P<0.01);(3)nm23-H1基因能够上调β-catenin、E-Cadherin、TIMP-1基因mRNA及蛋白表达,下调VEGF、CD44V6和MMP-2基因mRNA及蛋白表达(P<0.01);(4)nm23-H1表达上调CD44S基因mRNA表达(P<0.01),而对其蛋白表达?

nm23-H1基因在大肠癌中的表达与肝转移及预后的关系

目的：探讨ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达与大肠癌肝转移及预后的关系。方法：对１０１例大肠癌存档石蜡块进行重新切片，采用ｎｍ２３－Ｈ１单克隆抗体进行免疫组化染色（ＬＳＡＢ法）。结果：ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达与年龄、性别、肿瘤大小、部位、组织类型、浆膜侵犯无关；与Ｄｕｋｅｓ分期、淋巴结转移有关；手术时有肝转移组较无肝转移组低，手术后有肝转移复发组较无肝转移复发组低（Ｐ＜００１）。Ｃｏｘ模型分析显示ｎｍ２３－Ｈ１是大肠癌预后的一个保护性指标。结论：ｎｍ２３－Ｈ１基因对大肠癌肝转移和预后具有重要作用。

nm23-H1、p53、PCNA表达与大肠癌浸润转移的关系

目的：研究大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１、ｐ５３、ＰＣＮＡ的表达与浸润转移的关系。方法：应用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法检测７４例大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１、ｐ５３、ＰＣＮＡ和Ⅳ型原的表达。结果：大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１、ｐ５３和ＰＣＮＡ的阳性率分别为７１．６％、５２．７％和８１．１％。大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１低表达与淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０２５），ｎｍ２３－Ｈ１的表达在Ⅳ型胶原表达不同的肠癌中无明显差异（Ｐ＞０．０５）；ｐ５３和ＰＣＮＡ过表达与浸润程度和淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０５），ｐ５３和ＰＣＮＡ的表达在Ⅳ型胶原表达不同的肠癌中有非常显著的差异（Ｐ＜０．００５）；大肠癌中ｐ５３过表达与ｎｍ２３－Ｈ１低表达有关（Ｐ＜０．０１）。结论：实验结果揭示ｐ５３基因突变对于ｎｍ２３－Ｈ１基因的失活有一定影响，其作用机制有待深入研究。ｎｍ２３－Ｈ１低表达可能仅在大肠癌转移过程中发挥作用，ｐ５３过表达可在大肠癌浸润转移过程及细胞增殖中起重要作用。

人肺癌细胞株L9981-nm23-H_1的建立

目的 建立转染野生型nm2 3 H1 基因的人大细胞肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1 。方法 应用基因克隆技术构建逆转录病毒载体pLXSN nm 2 3 H1 EGFP。脂质体法转染PA3 17细胞 ,得到逆转录病毒 ,并将病毒感染L9981细胞 ,获得L9981 nm 2 3 H1 。应用PCR和Westernblot检测L9981 nm2 3 H1 细胞中nm2 3 H1基因及其蛋白表达。结果 成功构建了逆转录病毒载体pLXSN nm2 3 H1 EGFP。nm2 3 H1 cDNA导入到L9981细胞株中 ,并检测到L9981 nm 2 3 H1 细胞中有nm 2 3 H1 蛋白表达。结论 nm 2 3 H1 基因在细胞株L9981 nm2 3 H1 中能持续。

nm23-H1基因对肺癌细胞株恶性表型的逆转作用

目的:通过稳定、高效的基因转染方法将nm23-H1基因导入nm23-H1基因缺失的人肺大细胞癌细胞株L9981,探讨nm23-H1基因是否具有逆转肺癌恶性表型的功能。方法:利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将nm23-H1基因导入L9981细胞株;利用细胞生长曲线、克隆形成率、Boyden小室法等方法研究转染前后细胞体外增殖、黏附、侵袭、转移能力的改变。结果:转染后的L9981细胞株中有nm23-H1基因mRNA和蛋白的阳性表达;转染后细胞株体外增殖速度减慢,克隆形成率降低,黏附性以及侵袭性均降低。结论:nm23-H1基因对肺癌细胞株L9981的体外生长、侵袭、转移具有负调控作用,表明nm23-H1基因具有逆转肺大细胞癌恶性转移表型的能力,为应用nm23-H1基因治疗肺癌提供了客观依据。

nm23-H1基因转染对人胆管癌细胞系QBC_(939)体外浸润能力的影响

目的 探讨nm2 3 H1基因转染对人胆管癌细胞系QBC939体外浸润能力的影响。方法 将含有全长nm2 3 H1cDNA的真核表达载体通过脂质体法转染人胆管癌细胞系。结果 转染成功的QBC939细胞 ,其nm2 3 H1基因的mRNA、蛋白表达明显增加 ,转染nm2 3 H1基因的胆管癌细胞体外浸润能力下降 ,穿越matrigel的细胞数明显低于亲本QBC939细胞 ,代表浸润能力的Ⅳ型胶原酶(MMP 9)分泌量下降。结论 nm2 3 H1基因可以抑制胆管癌细胞的体外浸润能力。

COX-2、c-erbB-2、nm23-H1、PCNA表达与宫颈鳞癌预后的关系

目的 探讨环氧合酶 2 (cyclooxygenase 2 ,COX 2 )、c erbB 2、nm2 3 H 1、增殖细胞核抗原 (prolifer atingcellnuclearantigen ,PCNA)的表达与宫颈鳞癌预后的关系。 方法 应用免疫组化S P方法检测了3 0例正常宫颈和 52例宫颈鳞癌组织中COX 2、c erbB 2、nm 2 3 H1、PCNA的表达。结果 (1)COX 2、c erbB 2表达与淋巴结转移无关 (P >0 .0 5) ,而PCNA表达与淋巴结转移呈正相关 (P <0 .0 5) ,nm 2 3 H1表达与淋巴结转移呈负相关 (P <0 .0 5) ;(2 )复发患者COX 2与PCNA表达阳性率明显高于未复发的患者 (P <0 .0 5) ,而nm2 3 H 1及c erbB 2表达与复发无关 (P >0 .0 5) ;(3 )COX 2、PCNA表达与预后呈负相关 ,而nm2 3 H1表达则与预后呈正相关 ,c erbB 2表达与生存无关。多因素分析表明淋巴结转移、COX 2、nm 2 3 H1是影响宫颈鳞癌预后的独立因素。结论 COX 2、nm2 3 H 1、PCNA是影响宫颈鳞癌预后的独立因素 ;COX 2 (+ ) /nm2 3 H 1(-)高度提示预后不良 ;c erbB

nm23-H1和E-Cadherin基因蛋白在胆囊癌组织中的表达

目的 :探讨nm2 3 H1和E Cadherin(E Cad)基因蛋白在胆囊癌组织中的表达与组织类型、病理分级和转移的关系 ,及nm2 3 H1和E Cad基因蛋白表达的相关性。方法 :应用催化信号放大系统免疫组化方法 ,检测 5 2例胆囊腺癌、2 0例胆囊腺瘤和 10例慢性胆囊炎组织中nm2 3 H1和E Cad表达水平。结果 :在胆囊癌中nm2 3 H1和E Cad阳性表达率分别为 5 1.9%和 4 2 .3% ,均明显低于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎 (P <0 .0 5 )。nm2 3 H1和E Cad表达与胆囊癌的组织类型、病理分级和转移密切相关 (P <0 .0 5 )。两基因蛋白表达在胆囊癌组织中呈正相关 (P <0 .0 5 )。结论 :nm2 3 H1和E Cad基因与胆囊癌的转移密切相关 。

肿瘤转移抑制基因Nm23-H1融合蛋白的表达纯化及其功能的初步研究

目的利用人Nm23-H1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,并对蛋白其活性进行初步分析。方法将重组质粒pET28a-Nm23-H1转化入E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定。用金属螯合层析技术进行蛋白纯化,得到Nm23-H1融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot鉴定纯化蛋白,并用RP-HPLC法、电泳迁移率变动分析实验检测Nm23-H1融合蛋白的核苷二磷酸激酶(NDPK)活性及核酸内切酶(AP)修复活性。结果转化溶原菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,为可溶性蛋白。Ni2+柱纯化后得到Nm23-H1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确。RP-HPLC法就及电泳迁移率变动分析实验证明所纯化的Nm23-H1融合蛋白具有NDPK活性,不具有AP修复活性,但可以增加APE1蛋白的AP修复活性。结论利用原核表达载体pET28a-Nm23-H1在E.coliBL21(DE3)中高效表达和纯化得到具有NDPK活性,但无AP修复活性的Nm23-H1融合蛋白,此蛋白可以增强APE1蛋白的AP修复活性,共同参与细胞的DNA损伤修复。

Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1在结直肠癌中的表达及临床意义

背景与目的:近年来的研究表明,多种生物学指标与结直肠癌发生、发展以及手术后的复发转移、预后有关。本研究旨在探讨人结直肠癌组织中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1的表达与各临床病理参数及预后的关系及临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法,检测72例结直肠癌组织及其对照癌旁正常黏膜组织中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1表达的状况,分析其与临床病理参数及复发转移的关系。结果:在结直肠癌中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1的表达率分别为62.5%(45/72)、66.7%(48/72)、55.5%(40/72)、61.1%(44/72)、79.2%(57/72),均显著高于对照癌旁正常黏膜组织(P<0.01)。Survivin表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及术后复发转移有关;MMP-2表达与淋巴结转移、TNM分期、术后复发转移有关;nm23-H1表达与淋巴结转移、TNM分期相关;VEGF表达与浸润深度、TNM分期及术后复发转移有关;而受体Flt-1表达与临床病理及预后因素均无关。结论:Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF与结直肠癌的发生、发展密切相关,联合检测多个相关基因的表达能更准确地判断结直肠癌的生物学特征及预后判断。