栽培玉米亚种5 SrDNA NTS序列分析及FISH定位方法比较

选取我国7个栽培玉米亚种材料,进行5 S rDNA的非转录间隔区(nontranscribed intergenic spacer,NTS)的序列分析,比较7个亚种材料NTS序列差异并进行聚类分析,探讨其亲缘关系。研究结果表明:7个材料的NTS区GC平均含量为45.67%,核苷酸位点变异位点个数1～15,转换/颠换率为0.83～2.0,特用玉米材料均存在不同程度的缺失;7个材料主要聚为两大类,第一类群中包括甜质、马齿、硬粒、爆裂和蜡质5个亚种材料,第二类群中包括粉质和甜粉2个亚种材料。同时利用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)对5 S rDNA进行定位,探针标记分别采用荧光素标记和生物素标记。结果表明:生物素标记检测系统灵敏度高、杂交信号强,更适合于5 S rDNA重复序列的定位检测。

中国西藏近缘野生大麦5S rDNA NTS序列分析

选取来自西藏不同地理区域的17份近缘野生大麦材料和1份国外的近缘野生大麦材料,利用直接PCR、T-载体转化克隆、克隆产物测序的方法获得了它们的5S核糖体DNA NTS(Nontranscribed intergenic spacer)序列.对这些序列进行测定、分析和比较,构建了分子系统树.结果表明,西藏近缘野生大麦NTS序列包括两段相对保守的保守区A和保守区B以及一段变异较大的变异区V,变异区由若干个TAG碱基的重复序列构成.两段保守区总长度为168～169 bp,长度变异较小,仅相差1 bp.保守区的GC%含量为43.8%,其中有12个核甘酸位点发生变异(占总核甘酸数目的7.1%),变异位点基本上是颠换多于转换,颠换/转换率为1.0～2.0.变异区中TAG重复序列的重复次数从4到17次,而且有部分TAG重复发生了颠换和转换(TAG→TCG,TAG*→TAC).TAG重复序列的多态性是决定NTS序列多态性的主要因素.对西藏近缘野生大麦和麦属其他作物的比较,认为rDNA NTS适合作为属内分类的分子标记.