何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响

目的:观察何首乌含药血清对体外培养的人肝细胞活性的影响,考察何首乌入血成分是否具有肝细胞毒作用。方法:采用血清药理学方法制备何首乌含药血清及空白对照组血清,作用于体外培养的人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞,MTT法检测不同浓度血清对两种细胞活力的影响;倒置相差显微镜观察各浓度血清作用后两种细胞的形态变化;测定含药血清作用于两种细48 h后,细胞培养液转氨酶活性变化。结果:何首乌含药血清对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的活力没有明显影响。两种细胞含药血清组与空白血清组相比,细胞形态都没有发生明显改变,细胞培养液转氨酶活性(ALT、AST)也没有显著差异(P>0.05)。结论:何首乌含药血清对体外培养的两种人源肝细胞活性均没有明显影响。

核因子-κB信号通路在自来水有机提取物致L02细胞炎性损伤中的作用

[目的]观察自来水有机提取物致正常人肝细胞株(L02细胞)炎性损伤中核因子-κB(NF-κB)信号通路的激活情况及其调控作用。[方法]采用固相萃取法提取自来水中的有机污染物。将L02细胞分别暴露于培养液(空白对照)、0.1%二甲基亚砜(溶剂对照)和0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0 L/m L自来水有机提取物中24、48、72 h。采用免疫印迹方法观察NF-κB信号通路的激活情况;并使用ELISA法测定细胞培养液上清中白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。[结果](1)L02细胞染毒24、48、72 h,细胞活力在各剂量组均明显降低(P<0.05)。(2)L02细胞染毒24、48、72 h,NF-κB抑制蛋白的表达水平在0.625 0 L/m L以上剂量组均明显降低(P<0.05);p65蛋白表达水平在染毒24、48 h时点,仅在1.250 0 L/m L以上剂量组明显升高(P<0.05),而在72 h时点,0.625 0 L/m L以上剂量组即明显升高(P<0.05)。(3)L02细胞染毒24、48 h后,0.625 0 L/m L以上处理组的IL-8水平均明显升高(P<0.05);而染毒72 h,低剂量组(0.312 5 L/m L)的IL-8水平即可升高明显(P<0.05);染毒24 h,1.250 0 L/m L以上处理组的TNF-α水平明显升高(P<0.05);而染毒48、72 h,TNF-α水平在0.625 0 L/m L以上处理组即升高明显(P<0.05)。与24 h染毒组比较,48、72 h各染毒组的IL-8与TNF-α水平均明显升高(P<0.05)。(4)IL-8、TNF-α水平与NF-κB抑制蛋白表达水平均呈负相关关系(r=-0.851 0、-0.818 0,P<0.05),与p65蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.816 0、0.865 0,P<0.05)。[结论]自来水有机提取物可剂量-依赖性及时间-依赖性地激活NF-κB信号通路,诱导IL-8及TNF-α的分泌,此可能为其诱发L02细胞炎性损伤的重要原因之一。