miR-10b通过激活KLF4/Notch-1/STAT3信号途径加速腹主动脉瘤的进展

目的:miR-10b促进动脉瘤的进展但其机制未明确,本实验通过检测miR-10b对KLF4/Notch-1/STAT3途径的影响阐明其机理。方法:双荧光素酶实验验证miR-10b的靶基因。取20只apoE-/-小鼠构建腹主动脉瘤模型,其中10只尾静脉注射miR-10b过表达的慢病毒,分别记为模型组和miR-10b组。另取10只apoE-/-小鼠作为假手术组,28 d后解剖小鼠腹主动脉行病理学染色、Western-blot实验。将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用后的THP-1巨噬细胞根据是否转染miR-10b mimic及其Nc对照、是否添加抑制剂分组:(1)Nc组;(2)miR-10b mimic组;(3)Nc+KLF4抑制组;(4)miR-10b mimic+KLF4抑制组;(5)Nc+Notch-1抑制组;(6)miR-10b mimic+Notch-1抑制组;(7)Nc+STAT3抑制组;(8)miR-10b mimic+STAT3抑制组,检测细胞内蛋白水平。结果:检测双荧光素酶活性得知miR-10b可靶向作用于基因KLF4。小鼠血管病理实验发现,与正常小鼠相比,动脉瘤模型小鼠的血管明显增粗、组织结构异常,miR-10b可加重血管病变;CD68+巨噬细胞、蛋白Notch-1、p-STAT3、MMP-2、MMP-9在假手术组、模型组与miR-10b逐渐增多,而α-SMA、蛋白KLF4逐渐减少。(1)、(2)两组细胞间,后者KLF4表达较少、而Notch-1、p-STAT3、MMP-2、MMP-9表达显著偏多;KLF4抑制剂抑制KLF4表达,而Notch-1显著增多;Notch-1被抑制而减少表达,p-STAT3也随之减少;p-STAT3被抑制表达,MMP-2与MMP-9表达量也明显降低。结论:miR-10b通过作用于KLF4/Notch-1/STAT3信号途径,引起动脉瘤组织中MMP-2、MMP-9表达增加,从而加速动脉瘤的进程。

高良姜素调节Notch-1/Hes信号通路对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨高良姜素(Gal)调节Notch-1/Hes信号通路对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:将人胰腺癌PCNA-1细胞分为空白组、Gal低剂量组、Gal中剂量组、Gal高剂量组、Jagged1组、Gal高剂量+Jagged1组,EdU染色和CCK-8、划痕实验、Transwell实验分别检测PCNA-1细胞增殖、迁移、侵袭;qRT-PCR检测PCNA-1细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2 mRNA表达;裸鼠体内移植瘤实验检测裸鼠体内肿瘤质量与体积;Western blot检测PCNA-1细胞及肿瘤组织中Notch-1、Hes1蛋白表达。结果:与空白组相比,Gal低剂量组、Gal中剂量组、Gal高剂量组PCNA-1细胞EdU阳性细胞率、OD 450值、划痕愈合率、细胞侵袭数目、Cyclin D1、MMP-9、MMP-2 mRNA表达、PCNA-1细胞中Notch-1、Hes1蛋白表达降低,且呈剂量依赖性,Jagged1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与Gal高剂量组相比,Gal高剂量+Jagged1组PCNA-1细胞EdU阳性细胞率、OD 450值、划痕愈合率、细胞侵袭数目、Cyclin D1、MMP-9、MMP-2 mRNA表达、PCNA-1细胞中Notch-1、Hes1蛋白表达升高(P<0.05)。与裸鼠-空白组相比,裸鼠-Gal低剂量组、裸鼠-Gal中剂量组、裸鼠-Gal高剂量组裸鼠肿瘤质量与体积、Notch-1、Hes1蛋白表达降低,且呈剂量依赖性(P<0.05),裸鼠-Jagged1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与裸鼠-Gal高剂量组相比,裸鼠-Gal高剂量+Jagged1组裸鼠肿瘤质量与体积、Notch-1、Hes1蛋白表达升高(P<0.05)。结论:Gal抑制PCNA-1细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠体内肿瘤的生长,可能与抑制Notch-1/Hes通路有关。

从NF-κB和Notch-1通路探索紫杉醇-重组水蛭素介入涂层抗再狭窄的细胞学机制

目的 探索紫杉醇-重组水蛭素介入涂层复合物(LFN)调控Notch-1和NF-κB通路间交互作用关键位点抗再狭窄的微观机制。方法 利用网络药理学技术初筛LFN调控双信号通路交互作用的预测靶点,构建LPS+Jagged-1诱导人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMCs)增殖迁移模型,通过敲减或过表达双通路间枢纽基因,明确其交互作用与HCASMCs增殖迁移的相关性。在此基础上,对LFN初筛靶点进行精筛,进而在HCASMCs模型上予以LFN干预,从LFN双向调控Notch-1和NF-κB通路切入,深入阐释LFN防治介入术后再狭窄的细胞学机制。结果 网络药理学筛选结果表明,LFN对再狭窄的调控包含多种生物学模块和过程。联合LPS和Jagged-1以1μg/ml的浓度24 h持续刺激HCASMCs可诱导建立双通路活化细胞模型。与模型组比较,最佳浓度下的LFN(1μmol/L的紫杉醇配比0.2 mg/ml比伐芦定)对造模活化后的HCASMCs迁移和增殖变化具有显著抑制作用,可下调HCASMCs中NF-κB和Notch-1基因表达、上调IκBα基因表达,降低NICD、VEGF、MMP2、MMP9和Bcl-xL基因表达,同时下调OPN、PCNA、Notch-1和NF-κB(细胞核)蛋白表达、上调NF-κB(细胞质)蛋白表达(P<0.05)。其中,Notch-1与NICD表达的变化可直接影响LFN的作用效果。结论 LFN的抗再狭窄效应是通过调节Notch-1和NF-κB双通路间交互作用、阻断HCASMCs从收缩型向分泌型转变而实现。

MAP3K9通过上调Notch-1促进胰腺癌细胞的增殖与迁移

目的:探讨MAP3K9通过调控Notch-1促进胰腺癌细胞增殖、迁移的机制。方法:在胰腺癌细胞中分别转染MAP3K9过表达质粒和siRNA,RT-qPCR检测MAP3K9 mRNA表达水平,MTT实验检测转染后细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞凋亡能力的变化,划痕试验检测细胞迁移能力的变化,Transwell实验检测细胞的迁移与侵袭能力,Western Blot检测MAP3K9、Notch-1及EMT相关蛋白的表达情况。结果:RT-qPCR和Western Blot显示,PaTu-8988和PANC-1细胞的MAP3K9表达水平低于BXPC-3细胞;RT-qPCR结果表明,转染MAP3K9过表达质粒可以显著提高PaTu-8988和PANC-1细胞MAP3K9 mRNA表达水平,而转染siRNA MAP3K9可明显下调BXPC-3细胞MAP3K9 mRNA表达水平;上调胰腺癌细胞MAP3K9表达,可提高胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力,并抑制细胞凋亡;在胰腺癌细胞中过表达MAP3K9,可上调Notch-1、Vimentin、N-cadherin以及slug蛋白表达水平,并降低E-cadherin表达水平。结论:MAP3K9能够激活Notch-1,进而促进胰腺癌细胞的上皮—间充质转化(EMT)过程,增强胰腺癌细胞增殖及迁移能力。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。

胸腔镜肺叶切除术与开胸肺叶切除术对肺癌患者miR-498水平及Notch-1蛋白表达的影响

目的探究胸腔镜肺叶切除术与开胸肺叶切除术对肺癌患者miR-498水平及Notch-1蛋白表达的影响。方法回顾性分析2020年6月至2021年5月于我院接受胸腔镜肺叶切除术与开胸肺叶切除术治疗的肺癌患者的临床资料,根据样本量计算公式最终纳入120例肺癌患者,分为胸腔镜组和开胸组,各60例。胸腔镜组给予胸腔镜肺叶切除术,开胸组给予开胸肺叶切除术。比较两组的手术相关指标、miR-498水平、应激反应指标及Notch-1蛋白表达情况。结果胸腔镜组的手术时间、引流管留置时间短于开胸组,术中出血量、引流量少于开胸组,差异具有统计学意义(P<0.05)。术前、术后3 d,两组的miR-498水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后3 d,两组的miR-498水平高于术前,差异具有统计学意义(P<0.05)。术后3 d,两组的皮质醇(Cor)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))水平均升高,但胸腔镜组低于开胸组,差异具有统计学意义(P<0.05)。手术时、术后6个月,两组的Notch-1蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后6个月,两组的Notch-1蛋白表达阳性率均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论胸腔镜肺叶切除术为微创手术,其对肺癌患者造成的影响较小,患者应激反应更轻,但对血清miR-498水平、肺癌组织中的Notch-1蛋白表达情况与开胸肺叶切除术近似。

Notch-1基因在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的 研究Notch-1在人脑胶质瘤中的表达，并对其表达与胶质瘤病理级别的关系进行研究，探讨Notch-1对人脑胶质瘤发生、发展所起的作用，从而为胶质瘤的治疗提供一定的理论依据。方法应用半定量RT—PCR方法检测70例人脑胶质瘤标本和12例正常脑组织中的Noreh-1 mRNA的表达。结果Notch-1mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均可表达，且在人脑胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织（P〈0.01）；人脑胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级组和Ⅲ～Ⅳ级组中Notch-1 mRNA表达均显著高于正常脑组织（P〈0．01），并且Notch-1 mRNA在人脑胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级组中的表达显著高于Ⅰ～Ⅱ级组（P〈0．01）。结论Notch-1 mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均表达，且在人脑胶质瘤中呈显著高表达，可能与人脑胶质瘤的发生、发展有关；Notch-1的表达与人脑胶质瘤的病理分级相关。

肿瘤细胞间相互作用：Notch-1信号转导与调控机制

Notch-1信号通路在细胞分化、发育以及增殖、凋亡方面起重要作用,并参与肿瘤的发生发展,与肿瘤的侵袭、运动和转移过程密切相关。活化的Notch-1信号通路能够直接或间接调控细胞的增殖和迁移,促进肿瘤细胞发生上皮细胞间充质转换,并维持其间充质特性,增强肿瘤细胞的黏附能力。同时,Notch信号通路与PI3K/Akt、NF-κB等途径交互作用,将信号级联放大,从而加强调控肿瘤细胞的恶性行为。多种实体瘤中存在异常活化的Notch-1信号通路。从Notch的结构和功能、Notch-1信号通路与肿瘤发生和转移的关系、Notch-1调控肿瘤转移的分子机制与调控网络和以Notch为靶点的肿瘤治疗5个方面进行综述。阐明Notch-1信号通路在肿瘤转移过程中的作用与调控机制以及目前针对Notch-1信号通路的治疗策略,能够为肿瘤的病理机制和临床治疗研究提供参考信息。

运动可能通过下调肾脏Notch-1信号改善Ⅱ型糖尿病大鼠肾功能

目的:观察有氧游泳运动对Ⅱ型糖尿病大鼠肾脏损伤的改善效果,并探讨其可能的机制。方法:45只4周龄健康雄性SD大鼠,随机抽取10只为正常对照组,基础饲料喂养;其余35只经高糖高脂喂养5周后,配合腹腔注射STZ(35 mg/kg.bw)诱导建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型;7周后,将成模大鼠随机分为糖尿病安静组和糖尿病运动组,每组14只。3组大鼠均采用基础饲料喂养;糖尿病运动组大鼠进行8周有氧游泳运动;正常对照组、糖尿病安静组2组大鼠均自由活动,不施加任何干预。结果:(1)8周有氧游泳运动后,糖尿病运动组肾脏在电镜下的形态表现为肾小球三层结构较清晰,基底膜增厚不明显,足突融合减少,溶酶体增多现象等均有一定程度减少,较糖尿病安静组有明显改善;(2)糖尿病运动组血糖浓度和24 h UA排泄量较糖尿病安静组显著降低(分别为P<0.05或P<0.01);(3)糖尿病运动组肾皮质Jagged-1、Val1744NICD和Hes-1蛋白的表达较糖尿病安静组均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:运动可提高Ⅱ型糖尿病大鼠肾功能,改善大鼠肾脏损伤,可能与其下调Ⅱ型糖尿病状态下激活的Notch-1信号通路有关。

Notch-1在骨髓间质干细胞分化为神经细胞中的作用

目的:采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,抑制Notch-1基因的表达,从而观察Notch-1基因在骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经细胞后的存活及分化中的作用。方法:构建mNotch-1短发夹状RNA(short hairpin RNA,mNotch -1 shRNA);然后对mNotch-lshRNA转染的MSCs进行形态学观察;MTT检测转染前、转染24h、转染3天的MSCs的存活率; 体外条件下采用BDNF、全反式维甲酸等诱导mNotch-lshRNA转染的MSCs分化,采用免疫细胞化学染色,检测Nestin、NSE 及NF200(神经元标记物)、GFAP(神经胶质细胞标记物)的表达。结果:mNotch-lshRNA转染成功的细胞立体感增强,Notch -1基因表达消失,转染后24h和3天的MSCs细胞存活率下降,与未转染和转染对照组比较有显著性差异(P<0．01);转染 mNotch-lshRNA的MSCs向神经细胞的分化效率显著提高,NSE、NF200的表达均高于未转染的和转染对照组的,且未见 GFAP表达。结论:mNotch-lshRNA抑制Notch-1基因的表达,促进MSCs向神经细胞的分化效率,提示MSCs的横向分化过程可能与神经干细胞类似,阻断Notch信号通路,会加MSCs向神经细胞分化的效果。

Notch-1信号通路在甲状腺癌中作用的研究进展

Notch信号通路参与调控机体细胞的增殖、分化、凋亡等,人类Notch信号通路包括了四种受体及五种配体,其中Notch-1受体在甲状腺癌中发挥重要作用。然而,Notch-1在甲状腺乳头状癌中的作用仍存在争议,大多数学者认为Notch-1信号通路能够促进乳头状癌细胞增殖、侵袭转移,且其表达水平与甲状腺乳头状癌侵袭性相关。而对于甲状腺滤泡状癌、髓样癌及未分化癌细胞,活化Notch-1信号通路可抑制他们的增殖。众多研究表明Notch-1信号通路有望成为甲状腺癌重要治疗靶点。本文就Notch-1在甲状腺癌发生、发展中的作用进行综述。

结直肠癌组织中NF-κB、Notch-1和SOCS-1的表达及临床意义

目的:探讨结直肠癌组织中NF-κB、Notch-1和SOCS-1的表达及临床意义,为临床治疗结直肠癌提供依据。方法:选取55例手术切除的结直肠癌组织标本作为研究组,同时收集癌旁正常大肠黏膜组织标本30例作为对照组,采用免疫组织化学SP法和Western blot检测研究组和对照组中NF-κB、Notch-1和SOCS-1蛋白的表达,分析其与患者病理因素之间的关系。结果:免疫组织化学SP法检测结果:NF-κB蛋白和Notch-1蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率均明显高于正常大肠黏膜组织中阳性表达率(P<0. 05),SOCS-1蛋白在正常大肠黏膜组织中的阳性表达率高于结直肠癌组织中的阳性表达率(P<0. 05); Western blot检测结果:NF-κB蛋白和Notch-1蛋白在正常大肠黏膜组织中的表达均低于结直肠癌组织中的表达(P<0. 05),SOCS-1蛋白在正常大肠黏膜组织中的表达高于结直肠癌组织中的蛋白表达(P<0. 05); NF-κB、Notch-1在无淋巴结转移、未浸润浆膜及高中分化的结直肠癌组织中表达明显低于有淋巴结转移、浸润浆膜及低分化的结直肠癌组织的表达,SOCS-1在高中分化结直癌组织的表达明显高于低未分化的结直肠癌中的表达。患者结直肠癌组织中NF-κB与Notch-1表达水平呈正相关性,SOCS-1表达水平与NF-κB、Notch-1呈负相关性。结论:NF-κB、Notch-1和SOCS-1的异常表达与结直肠癌的发生发展有密切联系,其表达参与肿瘤形成、发展、侵袭和转移,可以作为肿瘤预后判断的参考指标。

人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中NOTCH-1信号通路的调控

背景：研究发现NOTCH-1信号通路在神经干细胞或神经前体细胞的自我更新、增殖及分化中起重要作用。目的：探讨NOTCH-1信号通路在人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中的调控作用。设计、时间及地点：开放性实验,于2005-01/2007-03在解放军第三军医大学新桥医院完成。材料：人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织由解放军第三军医大学新桥医院神经外科提供。U251胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学新桥医院神经外科吕胜青副教授惠赠;CHG-5胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学西南医院病理研究所卞修武教授、姚晓红博士惠赠。方法：取人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织、U251及CHG-5胶质瘤细胞株,采用免疫磁珠法分选获得CD133^＋脑胶质瘤干细胞,加入DMEM/F12无血清培养基进行增殖培养,形成细胞克隆后,加入含体积分数为10%胎牛血清的培养液,2h后行抗CD133和抗巢蛋白免疫荧光双标染色。主要观察指标：人脑胶质瘤干细胞的生长和鉴定,采用WST-8法、免疫组化实验、流式细胞仪、免疫荧光双标实验检测NOTCH-1信号通路蛋白的表达。结果：在无血清培养基中,细胞呈悬浮生长,培养24-48h可见单个细胞开始分裂生长,形成肿瘤球,将肿瘤球转入含胎牛血清的培养基后,4h周边细胞伸出突起并逐渐分化,24h后肿瘤球迁移出的细胞增多,形成单细胞层。肿瘤球能同时表达干细胞标志物CD133和巢蛋白,CD133^＋脑胶质瘤干细胞核浆比例达2/3-3/4,突起少,胞浆中线粒体等细胞器较少,核糖体丰富,未见胶质丝等分化结构,符合干细胞超微结构特点。NOTCH-1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达明显强于正常成人脑组织（P〈0.01）,在CD133＋U251及CHG-5胶质瘤细胞中有很强的表达,在GFAP＋和MAP2＋U251及CHG-5胶质瘤细胞中的表达强弱不等,在MBP＋U251及CHG-5胶质瘤细胞中呈弱表达或不表达。在脑胶质瘤干细胞增殖过程中能检测到较强的NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1mRNA及NOTCH-1,HES-1蛋白表达;而在细胞分化时NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1mRNA和HES-1蛋白表达逐渐减弱。结论：NOTCH-1信号通路的关键蛋白分子NOTCH-1在人脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中均有表达,而在正常成人脑组织中仅微弱表达。NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1和HES-1的表达强弱可能参与了胶质瘤干细胞增殖和分化的调控。

NF-κB、Notch-1和Ki-67在结肠癌中的表达及其意义

目的探索核因子κB(NF-κB)、Notch-1和Ki-67在结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法收集泸州医学院附属医院病理科2008年12月至2010年1月存档结肠蜡块120例,其中结肠腺瘤20例;结肠癌90例,包括高分化腺癌45例,中分化腺癌33例,低分化腺癌12例;结肠正常黏膜组织10例。采用免疫组织化学的方法检测NF-κB、Notch-1和Ki-67的表达。结果 (1)在结肠正常黏膜-腺瘤-癌序列中,NF-κB的阳性率呈递增趋势,其在结肠癌组中的表达率高于正常黏膜组(P<0.05);Notch-1的阳性率呈递增趋势,其在结肠癌组中的表达率高于正常黏膜组(P<0.05);Ki-67的阳性率呈递增趋势,其在结肠癌组中的阳性表达率高于结肠腺瘤组及正常黏膜组(P<0.05)。(2)NF-κB的表达与结肠癌大小、不同侵袭深度,有、无淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05);Notch-1的阳性表达率与结肠癌大小、分化程度显著相关(P<0.05);Ki-67的阳性表达率与结肠癌的组织分化程度及有、无淋巴结转移有关(P<0.05)。秩和检验显示NF-κB、Notch-1、Ki-67在结肠癌不同分化程度中的表达率不同,分化越低,阳性率越高(P<0.05)。(3)NF-κB、Notch-1、Ki-67在结肠癌组织中的表达呈正相关(P<0.01)。结论 NF-κB、Notch-1、Ki-67与结肠癌的发生、发展有关;Notch信号通路和NF-κB信号通路可能相互影响共同参与结肠癌的发生、发展。

鼠李素下调Notch-1的表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的调节作用

目的探索鼠李素对乳腺癌MCF-7细胞增殖,侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法MCF-7细胞分为4组:MCF-7(对照组)、鼠李素(1、2.5、5μM)组。CCK-8检测细胞增殖。Transwell检测细胞侵袭。划痕实验分析细胞迁移。蛋白印记检测Notch-1、CSL、Hes1、Ki67和VEGF表达。结果低浓度的(<5μM)的鼠李素不会影响MCF-7细胞活力;高浓度的(>5μM)的鼠李素对MCF-7有显著毒性。2.5和5μM鼠李素组细胞增殖倍数明显低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,鼠李素(1、2.5、5μM)组细胞侵袭和迁移明显降低(P<0.05)。另外,鼠李素(1、2.5、5μM)组Notch-1、CSL和Hes1相对蛋白表达量都明显少于对照组(P<0.05)。而且,Notch-1通路激活剂Jagged1(10μM)还可明显抑制鼠李素(5μM)诱导的Notch-1、CSL、Hes1、Ki67和VEGF表达的下降(P<0.05)。结论鼠李素通过下调Notch-1的表达抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,侵袭和迁移。

五味子乙素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和Notch-1信号通路的影响

目的观察五味子乙素对人乳腺癌细胞增殖及Notch-1信号通路的影响,探讨其抑制乳腺癌发展的可能分子机制。方法不同浓度五味子乙素(0、20、40、80μmol/L)处理乳腺癌细胞MCF-7,作用24、48、72h后,CCK-8法检测MCF-7细胞增殖。裸鼠皮下接种MCF-7细胞建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,随机分为对照组和五味子乙素组,每4d测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线,32d后取肿瘤称重。Westernblot检测MCF-7细胞和肿瘤组织Notch-1及其下游分子Hes-1、Hey-1蛋白水平;免疫组化检测小鼠肿瘤组织Notch-1的表达。结果与空白组比较,五味子乙素显著抑制MCF-7细胞生长,且抑制作用具有时间和浓度依赖性,同时显著降低MCF-7细胞Notch-1及其下游分子Hes-1、Hey-1蛋白的表达。与对照组比较,五味子乙素组裸鼠肿瘤体积及质量明显受抑制,且肿瘤组织Notch-1及其下游分子Hes-1、Hey-1蛋白表达显著降低。结论五味子乙素可抑制乳腺癌发展,其机制可能与抑制乳腺癌细胞MCF-7及其裸鼠模型移植瘤的生长、降低Notch-1信号通路相关因子表达有关。

姜黄素对HaCaT增殖的抑制作用及对Notch-1,Bax和Bak表达的影响

目的研究姜黄素对HaCaT细胞抑制增殖的作用及其作用机制。方法倒置显微镜下观察不同浓度姜黄素作用后HaCaT细胞的形态学改变;MTT法检测不同浓度姜黄素对HaCaT细胞抑制增殖的作用;Western blot法检测Notch-1,Bax和Bak蛋白的表达情况。结果 0.01μmol/L姜黄素处理HaCaT细胞后的细胞活性与正常组的差异无统计学意义(P>0.05),>0.1μmol/L的姜黄素处理HaCaT细胞后,其增殖受到抑制,且均与姜黄素有浓度依赖关系(P均<0.05)。Western bolt法检测结果显示,Notch-1的表达逐渐降低,Bak和Bax的表达逐渐升高。结论姜黄素对HaCaT细胞的增殖具有抑制作用,并可诱导细胞凋亡。推测姜黄素可能通过下调Notch-1受体的表达而改变细胞凋亡蛋白的表达,从而发挥抑制角质形成细胞增殖的作用.

c-Met及Notch-1对非小细胞肺癌患者预后的影响

目的:通过检测c-Met及Notch-1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)手术切除患者中的表达,探究其对患者预后的影响。方法:应用免疫组化方法检测收集到的106例NSCLC石蜡标本中c-Met和Notch-1的表达情况,分析c-Met和Notch-1表达与患者预后之间的关系。结果:c-Met表达与N分期、p TNM分期相关,Notch-1表达与N分期相关。c-Met和Notch-1阳性表达的患者均较阴性表达患者预后差(P<0.001)。相关分析显示,c-Met与Notch-1正相关(P<0.001)。c-Met与Notch-1联合分析发现,双阳性组患者预后最差,单阳性组其次,双阴性组最佳(P<0.001)。COX单因素分析发现,c-Met、Notch-1、T分期、N分期、p TNM分期是预后的风险因素。进一步COX多因素分析,结果显示c-Met表达为预后的独立风险因素(P<0.001),而Notch-1表达与预后无关(P=0.732)。结论:c-Met及Notch-1联合检测可更精确的预测NSCLC患者预后风险。

靶向沉默Notch-1基因抑制滋养细胞上皮间质转化的机制研究

目的探讨靶向沉默Notch-1基因对滋养细胞JEG-3上皮-间质转化(EMT)过程和侵袭能力的影响及相关机制。方法设计合成Notch-1-si RNA干扰片段,稳定转染JEG-3细胞。采用Transwell小室侵袭实验检测滋养细胞侵袭能力的变化。采用Western blot检测转染后各组细胞Notch-1蛋白、E-cadherin、vimentin蛋白的表达和EMT转录调节子slug,snail,twist的表达水平变化。结果转染Notch-1-si RNA后,滋养细胞JEG-3中Notch-1蛋白的相对表达量明显下降;滋养细胞JEG-3的侵袭能力明显降低;JEG-3细胞中上皮细胞标志物E-cadherin表达显著升高,而间质细胞标志物vimentin表达显著下降;EMT转录调节因子slug、snail和twist的表达显著下降。结论靶向沉默Notch-1基因能够影响滋养细胞的浸润;Notch-1通过调节滋养细胞EMT过程降低其侵袭能力。

紫草素对HaCaT细胞Notch-1信号通路的调节作用

目的研究紫草素对Ha Ca T细胞抑制增殖的作用及其作用机制。方法倒置显微镜下观察不同浓度紫草素(0、2、5、10、15μmol/L)作用后Ha Ca T细胞的形态学改变;MTT法检测紫草素对Ha Ca T细胞抑制增殖的作用;流式细胞术检测细胞凋亡率变化;Western blot法检测Notch-1、Jagged1和Hes5蛋白的表达情况。RT-PCR检测下游信号分子Hes1和Hes5的m RNA表达。结果 10μmol/L紫草素即可显著抑制Ha Ca T细胞的增殖,且随着浓度的增加,紫草素呈剂量依赖性地抑制Ha Ca T细胞的增殖(均P<0.01)。流式细胞术检测结果显示10μmol/L紫草素能够显著诱导Ha Ca T细胞凋亡(P<0.01)。Western bolt法检测结果显示,Notch-1、Jagged1和Hes5蛋白表达逐渐降低。RT-PCR法检测结果显示,Notch信号通路下游信号分子Hes1和Hes5的m RNA表达水平亦呈剂量依赖性降低。结论紫草素呈剂量依赖性地抑制Ha Ca T细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,Notch-1信号通路在其中起了重要作用。