新型鹅细小病毒徐州分离株NGPV XZ-01的分离和致病性研究

为了研究2021年6月江苏徐州某商品半番鸭养殖场所发疾病的病原及其致病性,从该养殖场发病的半番鸭群中无菌采集肝脏、脾脏、肠道等临床样品,采用PCR方法对病原进行鉴定,将所采集样本处理后接种至非免疫鸭胚中,连续多次传代后,对鸭胚组织及尿囊液进行病理学、电镜检查及动物试验。结果显示:PCR检测结果鉴定为新型鹅细小病毒阳性;鸭胚尿囊液在电镜下观察到细小病毒粒子,胚体病理切片观察显示符合细小病毒所致病变;动物试验显示,攻毒试验鸭主要表现为生长发育明显受阻,大部分试验鸭成为“僵鸭”,于20日龄后陆续出现上下喙变短、舌头外露等症状,剖检病变主要为肠内容物稀薄及泄殖腔膨大,肠道组织切片观察显示肠绒毛上皮细胞坏死、脱落及部分肠腺坏死,符合鸭短喙侏儒综合征(short beak and dwarfism syndrome,SBDS)所致雏鸭的症状与病变。结果表明:该肉鸭养殖场所发疾病为SBDS,将该场分离的病毒命名为新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)。

新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)对半番鸭生长发育的影响

为了探究新型鹅细小病毒徐州分离株(NGPV XZ-01株)对半番鸭生长发育的影响,试验将180只健康非免疫半番鸭随机分为3组,分别为对照组、3日龄攻毒组和7日龄攻毒组,每组60只,对照组于3日龄时皮下注射灭菌生理盐水0.2 mL,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组分别于3日龄和7日龄时皮下注射NGPV XZ-01株病毒液(第7代,效价为5.7 lgELD_(50)/mL)0.2 mL,攻毒后观察并记录各组的生长发育情况、临床症状、发病和死亡情况,并对喙长和体重进行测定,于25日龄时全部扑杀,进行剖检、病理切片观察和X光检查。结果表明:攻毒后,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组均生长发育迟缓或成僵鸭;24日龄时,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组的体型明显小于对照组,3日龄攻毒组体型明显小于7日龄攻毒组。试验期间,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组表现为精神萎靡不振、喜卧、打堆、排白色或黄白色粪便,部分患鸭出现运动障碍、瘫痪等症状;随着日龄的增长,上下喙变短及舌头外露的症状逐渐明显。其中3日龄攻毒组发病率为90.0%、死亡率为11.7%;7日龄攻毒组发病率为76.7%、死亡率为6.7%;对照组无发病和死亡情况。10~22日龄时,3日龄攻毒组和7日龄攻毒组的体重和喙长均显著低于对照组(P<0.05),3日龄攻毒组的体重和喙长均显著低于7日龄攻毒组(P<0.05)。3日龄攻毒组和7日龄攻毒组剖检可见泄殖腔膨大,肠道内容物稀薄,肝脏均出现水肿、质脆等病变;病理切片观察可见十二指肠肠绒毛顶端上皮细胞坏死,十二指肠绒毛不同程度脱落,部分肠腺坏死;部分肝细胞出现坏死,肝窦淤血,有炎性细胞浸润;其他脏器未见明显病变。对照组未见明显异常。X光检查可见3日龄攻毒组和7日龄攻毒组下喙、翅、腿等部位明显小于对照组,且胫骨长度远低于对照组。说明NGPV XZ-01株可使半番鸭的生长发育明显受阻,具有很强的致病性,且对半番鸭的影响随感染日龄的增加而减小。

新型产甲烷菌系提高极限含水油藏采收率技术

我国东部老油田已整体进入特高含水开发阶段,呈含水上升快、采油速度低、水驱效益低等开发特征,现有提高采收率技术已无法实现原油的经济采出,亟需建立接替技术。为此,以胜利油田某聚驱后油藏为试验区,开展了油藏菌群结构分析、新型产甲烷菌系的激活产气、油藏适应性及驱油性能研究,探索新型产甲烷菌系在这类油藏的应用潜力。研究结果显示,试验区油藏具有丰富的石油烃降解菌,有利于生物气化技术的实施。模拟试验区油藏条件下,新型产甲烷菌系与油藏内源微生物有较好的相容性,90 d每克原油的产气量达到3.12 mmol,是单独激活油藏微生物产气量的4.5倍,且产生的气体中甲烷气占比达到78%。菌群结构分析显示,新型产甲烷菌系占比达到35.9%,是产气速率大幅提升的关键。适应性研究结果显示,在油藏温度低于65℃、原油黏度小于1 356 mPa·s条件下,新型产甲烷菌系均展示了良好的产气性能。利用实验室设计的物理模型,评价了该菌系产气提高驱油性能,结果显示,注入该菌系后产气作用有效动用了模型顶部的剩余油,极限含水条件下驱油效率提高5.4个百分点;在此基础上提出了生物气化技术提高极限含水油藏采收率的机理。

肉鸡源传染性法氏囊病新型重排毒株的分离鉴定及遗传进化分析

[目的]明确云南某肉鸡场疑似传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染病例的病原类型及分子特征,以了解IBDV新型重排毒株在肉鸡中的流行情况、分子进化趋势,为制定有效的传染性法氏囊病(IBD)防控和疫苗选用策略提供参考依据。[方法]对疑似IBDV感染的病鸡法氏囊进行研磨处理后,采用巢式RT-PCR进行检测,后将IBDV阳性的法氏囊组织悬液接种于9日龄SPF鸡胚并进行病毒分离,对病毒的vVP2和VP1-b基因扩增并进行遗传变异分析。[结果]成功分离出一株新型IBDV重排毒株(命名为YN-YX221110),接种9日龄SPF鸡胚后,胚体整体呈现弥漫性出血,头、颈以及背部皮肤有出血点。基于vVP2基因序列,分离株YN-YX221110与新型变异株(nvIBDV)参考株的核苷酸相似性最高,为93.2%~97.9%,分离株YN-YX221110的vVP2基因222A特征性氨基酸位点与UK661、HK46等超强毒株(vvIBDV)参考株相同,249K、256V、279N、284A、294L、299S等位点与新型变异株(nvIBDV)参考株中的SHG19相同;在基于vVP2基因的遗传进化树中,分离株YN-YX221110与GX-QZ191002、SHG19等nvIBDV参考株聚为一支,属于A2d分支。基于VP1-b基因序列,分离株YN-YX221110与参考株中的经典毒株(cIBDV)类似株核苷酸相似性最高,为97.8%~98.4%,分离株YN-YX221110的vVP2基因特征性氨基酸位点240D、242D、287T、390L和393E与致弱毒株(attIBDV)参考株中的B87、Gt相同;在基于VP1-b基因序列的系统发育进化树中,分离株YN-YX221110与参考株Gt、B87和CEF94等cIBDV类似株中的attIBDV聚为一支,属于B1a分支。分离株YN-YX221110基因型为A2dB1a。[结论]成功分离得到肉鸡源IBDV分离株YN-YX221110,其A片段来源于nvIBDV,B片段来源于cIBDV类似株中的attIBDV,为新型IBDV重排毒株。

一株麻鸡传染性法氏囊病毒新型变异株的分离鉴定

近几年,鸡传染性法氏囊病毒新型变异株在我国广泛流行,主要发生于肉鸡,其致病力弱、隐蔽性强但能造成法氏囊严重萎缩。本研究从山东济宁地区临床出现法氏囊萎缩的发病麻鸡中采集法氏囊病料,接种SPF鸡胚进行病毒分离,通过RT-PCR方法进行病毒鉴定,将分离毒株回归SPF鸡进行致病性试验,同时对其主要抗原基因VP2进行进化分析。结果发现,该毒株能致死鸡胚;对其VP2基因进行测序比对和进化树分析发现,其与近几年的新型变异株基因序列的进化关系较近,同源性为96.1%~99.2%;人工感染SPF鸡第7 d法氏囊即出现较为明显的萎缩,第14 d萎缩更为明显,囊体比显著小于对照组(P<0.01)。本研究分离到的麻鸡源传染性法氏囊病毒JN22株属于新型变异株,能导致SPF鸡法氏囊显著萎缩。

产氢新种Ethanoligenens harbinese B49的氮素营养与代谢特征

从氮源角度研究了一株产氢新种Ethanoligenens harbinese B49发酵葡萄糖和糖蜜的产氢特性及其营养需求，以及酵母粉对产氢菌E．harbinese B49生长和产氢的特殊效应．试验结果表明，在以葡萄糖为底物条件下，以酵母粉替代蛋白胨作为唯一氮源可以大大提高E．harbinese B49的产氢能力，单位体积产氢量从1700mL L^-1培养基提高到2400mL L^-1培养基，产氢能力提高40．35％．该条件下去除维生素液，E．harbinese B49的产氢能力不受影响．从E．harbinese B49产氢动力学分析可以看出，对数生长期处于12—22h期间．从对数期开始迅速产氢，并且一直持续到稳定前期，产氢速率达到16．8mL／h，生物气中最大氢含量为41％．驯化后的E．harbinese B49利用糖蜜为底物产氢，糖蜜COD为13 g L^-1时，单位体积最大产氢能力为1576mL L^-1．当培养基中额外加入0．5 g L^-1酵母粉时，可以大大促进E．harbinese B49发酵糖蜜产氢的能力，单位体积氢产量达到1960mL L^-1，提高了24．4％，比产氢率达到150．8mL（H2）／g（COD）．以牛肉膏、蛋白胨、尿素为氮源时，E．harbinese B49产氢量提高较小．

微生物发酵生物制氢研究进展

在该研究组多年生物制氢研究的基础上,结合国内外最新研究,从微生物发酵产氢的菌种开发及选育、发酵产氢效率的影响因素、发酵产氢相关酶基因调控等方面进行阐述,指出目前发酵产氢所面临的问题与不足,并对以后微生物发酵制氢研究的趋势进行展望。

产纤维素酶新菌株的筛选及其产酶特性研究

【目的】筛选分离新的纤维素酶产酶菌株，并对其生长特性和产酶特性进行研究。【方法】从堆肥样品中分离得到一株产纤维素酶菌株，定名为CP1，利用16SrRNA序列对比和Biolog微生物鉴定系统进行鉴定。通过测定菌株生长速率确定其最适生长条件。采用CMC发酵培养基进行纤维素酶的研究，确定其产酶曲线。测定粗酶液最适作用温度和pH值，热稳定性和金属离子对其影响。【结果】经鉴定该菌株为梭形芽孢杆菌（LysinibacillusfusiJbrmis），其最适生长温度为30℃，最适生长pH值为6。在含CMC—Na的培养基培养，该菌株的生长与产酶同步进行，培养48h菌株生长量达到最大，培养液的CMC酶活力同时达到最大值，为0．46U／mL。该菌株所产的纤维素酶既有酸性CMC酶活力，又有碱性CMC酶活力，并以碱性CMC酶为主，酸性CMC酶的活力只有碱性CMC酶的71．4％。其酸性CMC酶的最适作用pH值为6．0，碱性CMC酶的最适作用pH值为8．0。另外，该菌株所产碱性CMC酶活的最适作用温度为40～50℃，而且0．5%的Cu^2＋使其酶活降低45％。【结论】菌株CP1为首次报道的梭形芽孢杆菌产纤维素酶新菌株，具有独特的酸碱性环境下的纤维素酶活力。

产氢发酵新菌Ethanoligenens sp.B49对铁的依赖性及产氢途径初探

采用典型产氢途径的丁酸梭菌和阴沟肠杆菌作为对比菌株,铁元素作为限制性因子,研究Ethanoligenens sp.B49的产氢代谢过程对铁的依赖性以及产氢机制.铁限制性培养结果表明,与完全培养条件相比,在铁浓度限制在2mg.L-1条件下B49仍保持很好的生长状态和产氢性能,其产氢不受铁元素不足的影响,即其产氢行为不具有铁依赖性;这一性质与梭菌型产氢途径的丁酸梭菌表现出相似的规律,完全区别于阴沟肠杆菌铁依赖型的产氢机制.初步判断高效产氢菌B49的产氢代谢途径类似于梭菌型产氢途径.

鸭黄病毒的分离鉴定

从临床表现为产蛋下降、头颈歪斜、软脚为主要特征的发病蛋鸭卵巢、脑浆、肝、脾等组织中分离到1株病毒。分离毒能致死番鸭胚和鸡胚,人工感染产蛋期的蛋鸭能导致体温升高、产蛋急速下降,卵泡出血和萎缩;分离毒不能凝集鸡和鸽红细胞,能被鸡黄病毒高免血清特异中和;用禽黄病毒特异引物扩增为阳性。上述结果证实分离毒是黄病毒科黄病毒属的鸭黄病毒,是导致蛋鸭产蛋下降的病原。

PRRSV广东变异株分离及NSP2部分序列分析

2006年以来,高致病性猪繁殖与呼吸综合征在我国造成了巨大的经济损失。位于NSP2基因上的30个氨基酸的缺失已成为区分我国2006年以来的PRRSV高致病性毒株和2005年以前的经典流行毒株的特异性标记。本试验在广东省分离到一个新型的PRRSV毒株BL2,其NSP2基因540位-563位（相对于VR2332 ORF1a）发生24个氨基酸序列的缺失,该缺失位于高致病性株的缺失区域内,但缺失长度小于高致病性株。国内外文献未曾报道过类似的突变。以NSP2部分序列构建系统进化树表明,与该毒株同源性最高的是我国2005年分离的经典毒株SHB（91.5%）,同时该毒株与我国2006年后流行的高致病性毒株也有较高的同源性（89.9%-91.3%）。动物回归试验表明,该毒株显示高致病性。

产氢新菌Ethanoligenens sp.B49发酵糖蜜制氢条件

研究1株产氢细菌Ethanoligenens sp.B49利用废糖蜜为基本原料进行生物制氢的条件,及外加氮素营养物对废糖蜜生物制氢的影响。结果表明,在10.3～20.6g·L-1的化学需氧量(COD)范围内,经过驯化的Ethanoligenens sp.B49细胞具有较好的生物利用能力,细胞生长量和产氢能力随着废糖蜜COD的提高而增加。当废糖蜜COD超过20.6g·L-1时Ethanoligenens sp.B49的细胞生长受到抑制,同时产氢能力下降,COD超过41.2g·L-1时细胞基本不具有生长和产氢能力。Ethanoligenens sp.B49利用废糖蜜产氢的最佳COD为20.6g·L-1。在20.6g·L-1COD条件下外加有机氮源可以促进Ethanoligenens sp.B49利用废糖蜜制氢的能力,促进作用顺序为酵母粉>牛肉膏>蛋白胨>脲素。添加4g·L-1的酵母粉时,Ethanoligenens sp.B49细胞具有最好的生长活性和产氢能力。优化营养条件后,单位体积产氢量从44.82mmol·L-1提高到78.97mmol·L-1,提高了76.2%。

糖蜜的可发酵性与制氢条件

为了提高糖蜜的可发酵性和氢转化率,采用批式发酵法研究了糖蜜前处理过程和发酵条件对Ethanoligenens sp B49生长和产氢的影响。结果表明去除煮沸驱氧过程可以大大提高Ethanoligenens sp B49发酵糖蜜产氢的性能和糖蜜的氢转化率。Ethanoligenens sp B49细胞生长和产氢的最佳COD为20.6g/L,可发酵糖蜜的最大耐受COD为41.2 g/L,酵母粉可以大大提高糖蜜的生物可利用性和比产氢率。COD为20.6g/L,外加酵母粉浓度为4g/L是Ethanoligenens sp B49发酵糖蜜产氢的最佳条件,单位体积产氢量达到78.97mmolH2/L培养基,比对照提高了76.2%。本研究改进糖蜜发酵前处理方法和发酵条件,可以大大提高了糖蜜制氢的生物可发酵性和比产氢率。

新型降钙素基因工程菌高表达发酵条件的研究

对新型降钙素基因工程菌 n CT/p GEX-2 T/E.coli BL2 1高表达发酵条件进行了优化研究。研究表明重组工程菌遗传性状稳定 ,采用 LB培养基、1 %接种量 ,当菌体浓度到达 A6 0 0 nm 0 .6时 ,添加诱导剂 IPTG至终浓度为 0 .l mmol/L,37℃培养 4 h,可使含新型降钙素的融合蛋白高效表达 ,融合蛋白占菌体总蛋白的 35%。2 0 L发酵罐中采用上述条件发酵培养 ,融合蛋白亦可高效表达 ( 32 % ) ,其菌体密度是摇瓶培养发酵的两倍。Western-blotting试验表明融合蛋白中含有新型降钙素 。

新成人腹泻轮状病毒J19株的全基因组克隆和VP4、VP6和VP7基因序列分析

为了进一步了解新成人腹泻轮状病毒J19株的基因和蛋白特征,利用一种改良的非依赖核酸序列的单引物扩增方法扩增J19株的11个基因,克隆到pMD18-T载体中并进行测序。在此基础上,将主要抗原蛋白VP4、VP6和VP7的蛋白序列与其它轮状病毒的相关蛋白序列进行比较分析并对VP6蛋白序列做遗传进化分析。结果获得J19株11个基因的全长基因序列。基因序列分析表明J19株的第3、6和第9基因分别长2 512bp、1 287bp和820bp,它们分别预测编码抗原蛋白VP4(823aa)、VP6(396aa)和VP7(258aa)。组成J19株的VP4、VP6和VP7蛋白序列对B组轮状病毒的CAL株、IDIR株以及ADRV株的相关蛋白序列的一致性分别是27.6%、38.5%和22.3%。对分组抗原蛋白VP6的遗传进化分析表明,J19株在进化树上的位置靠近外群蛋白分支以及A、B和C组轮状病毒分支的根部,而且它比较偏向于B组轮状病毒的分支。J19株的VP4、VP6和VP7蛋白序列与其它轮状病毒的相应蛋白序列存在显著差异。VP6蛋白序列的遗传进化分析表明J19株可能是一个新组轮状病毒的代表性毒株;同时,它也可能是一个与B组轮状病毒的起源和进化密切相关的毒株之一。关于新成人腹泻轮状病毒J19株11个基因的克隆及VP4、VP6和VP7基因的序列分析,这是第一次报道。

脉冲载荷作用下钢梁动力响应及反常行为的应变率效应

为了讨论率敏感材料软钢钢梁受矩形脉冲载荷作用下的动力响应问题,通过直接离散有限变形弹塑性连续体最小加速度原理中的Lee泛函得到基本控制方程,并将包含应变率的Cowper-Symonds方程嵌入应力-应变关系方程,使该计算模型计及材料的应变率效应,因而能够准确描述钢梁受爆炸和冲击载荷作用下的动力响应问题。该计算模型的有效性通过与通用有限元程序ABAQUS比较而得到了验证,并进一步与已有的刚塑性解做了对比。利用该计算模型进行数值计算,分析了均布和集中脉冲载荷作用下钢梁动力响应的应变率效应,结果发现对于钢梁存在新的异常行为响应模式,应变率导致异常区域偏移和扩大,已有的刚塑性解在一定载荷强度范围内不能准确预报钢梁的实际位移。

项目管理视角下综合医院应对全员核酸检测采样的护理人力资源应急管理

目的总结新型冠状病毒肺炎疫情下综合医院应对全员核酸检测保障任务时,项目管理理论在护理人力资源应急管理中的应用经验。方法运用项目管理理论的科学方法,包括启动核酸采样护理应急项目组,制订护理人力资源调配库入选计划、人员素质能力提升培训计划,实施双轨制工作模式,重视过程管控。评价项目管理实施后护理人力资源调配、核酸采样及人力资源管理质量状况。结果2021年8月3~12日,调配护理人力资源23批、计680人;完成108个采样点超30万人次的核酸采样,受检者未发生交叉感染,护理人员无职业暴露发生;双轨制工作模式下护理人力资源管理质量未出现明显下滑,管理质量达标。结论项目管理有利于护理人力资源的高效调配与双轨制工作模式的稳步运行,可为今后应对突发应急事件提供参考。

新成人腹泻轮状病毒J19株VP2、VP3的编码基因序列分析

利用一种改良的非依赖核酸序列的单引物扩增方法,从新成人腹泻轮状病毒J19株的核酸中扩增基因,克隆至pMD18-T中并进行测序和基因序列分析。J19株的VP2、VP3的编码基因为基因2、4,分别长2 969bp、2 204bp,它们分别编码973个氨基酸和719个氨基酸。J19株的VP2蛋白序列对B组人轮状病毒IDIR株的一致性为47.2%;J19株的VP3蛋白序列对C组人轮状病毒Cowden株一致性为25.1%。对J19株VP2的遗传进化分析表明,J19株在进化树上的位置靠近外群蛋白以及A、B和C组轮状病毒分枝的根部,并且它比较偏向于B组轮状病毒的分枝。这与VP6的遗传进化分析结果相一致。根据上述结果推测J19株可能是一个与B组轮状病毒的起源和进化密切相关的毒株之一;同时,这表明VP2在研究轮状病毒的遗传进化上具有重要价值。关于新成人腹泻轮状病毒J19株VP2、VP3的编码基因的序列分析,这是首次报道。

Optimization of fermentation medium for the new hydrogen bacterium E.Harbinense YUAN-3

This study is aiming at investigating the metabolic characteristics of Ethanoligenens Harbinense YUAN-3.The effects of yeast extract powder and supplemental vitamins on the growth medium were assessed.With yeast powder as the sole nitrogen source,the biomass yield and hydrogen-producing capacity of YUAN-3 from glucose fermentation significantly increased.Adding vitamin in yeast powder can enhance hydrogen yield compared with no adding.Therefore vitamin supplement can be considered as an effective growth factor in this study.Batch culture also produced larger yields of hydrogen.

芝田硫化叶菌新型α-淀粉酶基因工程菌表达条件的优化

对本室构建的生产海藻糖的基因工程菌株 ,即来自古细菌芝田硫化叶菌B1 2的新型α 淀粉酶基因的工程菌的表达外源蛋白条件进行宿主菌 ,培养基 ,诱导时间 ,诱导温度和诱导菌浓的起始OD60 0 等条件的优化 ,发现在宿主菌为大肠杆菌DH5α ,培养基为改进的LB ,诱导时间 4小时 ,诱导温度 41℃ ,OD60 0 为 0 6～ 0 8时 ,基因工程菌ESBAM中新型α 淀粉酶的表达量最高 ,新型α 淀粉酶活力也最高 ,与重组酶MTSase一起作用底物直链淀粉 ,经HLPC检测在反应产物中有海藻糖的生成。