炭疽芽胞杆菌nprR突变株的生物学特性分析

目的:分析炭疽芽胞杆菌npr R突变株的生物学特性,研究基因缺失对菌株的影响。方法:利用PCR、免疫印迹等方法在基因水平和蛋白水平对菌株进行鉴定分析;绘制生长曲线比较突变株和A16R株的生长性能;芽胞形成实验分析突变株形成芽胞能力,糖酵解实验分析二者生化特性的差异。结果:突变株npr R基因缺失无回复突变,与出发株A16R相比,突变株蛋白酶活性大大降低,保护性抗原降解现象明显减少,生长速度和生化特性基本一致,但芽胞形成能力明显下降。结论:与A16R株相比,突变株蛋白酶活性降低且芽胞形成能力下降,可作为一种新的抗原表达宿主菌用于相关疫苗的抗原表达与制备。

Bt群体信号应答因子nprR基因的缺失对cry1Ac基因表达的影响

【目的】研究群体信号应答蛋白编码基因nprR在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)HD-73菌株晶体蛋白形成过程中的作用。【方法】通过同源重组,构建了HD-73nprR基因缺失突变菌株HD73(ΔnprR)。利用启动子-lacZ融合、SDS-PAGE方法,测定不同培养基中nprR基因转录活性及nprR基因缺失对cry1Ac转录及表达的影响。【结果】启动子转录活性分析表明,在LB和SSM培养基中nprR基因从对数期结束(T0)开始表达,稳定期持续表达。在LB培养基中,nprR基因的缺失使cry1Ac基因在生长过渡期和稳定期前期转录活性显著提高,同时HD73(ΔnprR)菌株Cry蛋白生成量也明显高于出发菌株HD-73,但是在芽胞形成释放后,Cry蛋白的表达没有明显的区别。【结论】在丰富培养基中苏云金芽胞杆菌nprR基因的缺失在生长过渡期和稳定期前期能够提高cry1Ac基因转录和表达,从而缩短了cry基因表达时间,并且Cry蛋白总产量与出发菌株相当。