板蓝根多糖对NF-κB活性的作用

观察板蓝根多糖对核因子 κB(nuclearfactorKappaB ,NF κB)核结合活性的影响。以内毒素 (LPS)刺激J744 .a .1小鼠的巨噬细胞株 ,可诱生出较高的NF κB与DNA结合活性 ,分别采用LPS预刺激、LPS后刺激和LPS与板蓝根多糖同时刺激等 3种方法对其处理 ,分离核蛋白 ,进行NF κB与DNA结合活性测定 ,结果用光密度扫描定量分析。板蓝根多糖在 3种情况下均可降低LPS刺激所致的NF

TLR4/MyD88信号通路在树突状细胞-肾癌786-0细胞株融合瘤苗中的作用

目的探讨TOLL样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)信号通路在树突状细胞(dentric cell,DC)-肾癌786-0细胞融合瘤苗中的变化及作用。方法用正常人外周血诱导不成熟的树突状细胞(immature dentric cell,imDC),利用聚乙二醇法(PEG)制成imDC-肾癌-786-0细胞融合瘤苗;用透射电镜观察imDC融合前后变化情况;RT-PCR检测单纯imDC组,肾癌786-0细胞组,imDC-肾癌-786-0融合瘤苗组在6、12、24、48 h中TLR4及MyD88 mRNA变化情况;用激光共聚焦检测imDC中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在融合前后转位情况;流式细胞仪检测imDC在融合前后CD86、HLA-DR变化;噻唑盐(MTT)法检测各组体外刺激T淋巴细胞的增殖能力及刺激的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的杀瘤活性。结果透射电镜显示融合细胞中imDC转变为mDC;TLR4及MyD88 mRNA在肾癌中不表达,在单纯imDC中呈低表达(TLR4/β-actin灰度比值0.40±0.03,MyD88/GAPDH灰度比值0.33±0.03),在融合瘤苗组中6 h表达最强(TLR4/β-actin灰度比值0.73±0.18,MyD88/GAPDH灰度比值为0.45±0.18),明显强于各组(P<0.05),此后在融合细胞中逐渐减弱,48 h基本不表达;激光共聚焦显示NF-κB在融合前位于imDC细胞质,融合后转移至细胞核;流式细胞仪提示融合瘤苗HLA-DR、CD86表达分别为81%、80%,明显高于imDC组(63%、59%)及肾癌细胞组(P<0.05);MTT法示融合疫苗在体外刺激T淋巴细胞增殖能力[D(570)值(1.95±0.22)]强于imDC组(1.31±0.35)及肾癌786-0组(1.28±0.33)(P<0.05),并且其诱导产生的CTLs对自体肾癌细胞具有显著的杀伤活性。结论 TLR4/MyD88-NF-κB信号通路在imDC与肾癌786-0细胞融合过程中促使树突状细胞成熟发挥了非常重要的作用,并且此信号通路能促使树突状细胞功能发生转变。

β-淀粉样蛋白下调趋化因子配体5表达激活NF-κB信号对口腔癌调控作用的研究

目的探讨β-淀粉样蛋白（AB）下调趋化因子配体5（CCL-5）表达激活NF-kB信号对口腔癌调控作用的研究。方法采用A13-Tg转基因小鼠及C57小鼠构建小鼠13腔癌肿瘤模型，研究Aβ对口腔癌生长的作用。采用蛋白芯片技术筛选出A13-Tg转基因小鼠和C57小鼠血清中差异表达的蛋白，进一步使用ELISA、免疫组化等实验对此蛋白表达进行确定，并采用免疫蛋白印迹技术，研究AB对CCL-5表达和NF-kB信号通路的影响。结果AB-Tg转基因小鼠与C57小鼠比较，口腔癌模型中的肿瘤体积、质量明显减小，生存期明显延长，差异有统计学意义（P〈0．05）。蛋白芯片技术筛选结果显示，Ap作用于口腔癌的靶点CCL-5；real time PCR技术检测显示，Aβ-Tg转基因小鼠CCL-5 mRNA水平表达显著低于C57小鼠，差异有统计学意义（P〈0．05）。ELISA检测结果显示，CCL-5蛋白水平显著低于C57小鼠，差异有统计学意义（P〈0．05）。口腔癌模型中的肿瘤组织蛋白免疫蛋白印迹结果显示，AB-Tg转基因小鼠的PS0、P65磷酸化和肿瘤坏死因子-α表达显著低于C57小鼠，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Aβ通过降低巨噬细胞分泌CCL-5激活NF-kB信号通路，可抑制小鼠口腔癌的生长。