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Tb^(3+)-nucleic acid probe-based label-free and rapid detection of mercury pollution in food
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作者 Xuhan Xia Chenxi Zhou +7 位作者 Yulin Zhu Yi Dong Qiang He Mohammad Rizwan Khan Yuanlong Chi Rosa Busquets Ruijie Deng Yao Ren 《Food Science and Human Wellness》 SCIE CSCD 2024年第2期993-998,共6页
Mercury is a threatening pollutant in food,herein,we developed a Tb^(3+)-nucleic acid probe-based label-free assay for mix-and-read,rapid detection of mercury pollution.The assay utilized the feature of light-up fluor... Mercury is a threatening pollutant in food,herein,we developed a Tb^(3+)-nucleic acid probe-based label-free assay for mix-and-read,rapid detection of mercury pollution.The assay utilized the feature of light-up fluorescence of terbium ions(Tb^(3+))via binding with single-strand DNA.Mercury ion,Hg^(2+)induced thymine(T)-rich DNA strand to form a double-strand structure(T-Hg^(2+)-T),thus leading to fluorescence reduction.Based on the principle,Hg^(2+)can be quantified based on the fluorescence of Tb^(3+),the limit of detection was 0.0689μmol/L and the linear range was 0.1-6.0μmol/L.Due to the specificity of T-Hg^(2+)-T artificial base pair,the assay could distinguish Hg^(2+)from other metal ions.The recovery rate was ranged in 98.71%-101.34%for detecting mercury pollution in three food samples.The assay is low-cost,separation-free and mix-to-read,thus was a competitive tool for detection of mercury pollution to ensure food safety. 展开更多
关键词 Mercury pollution Food safety nucleic acid probe LABEL-FREE TERBIUM
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早期香蕉枯萎病Foc4双探针核酸纸基检测传感器研制
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作者 杨洲 区湘颖 +4 位作者 张志宏 罗宇康 何俊宇 欧俊辰 段洁利 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第5期38-46,共9页
为实现对早期香蕉枯萎病4号生理小种(fusarium oxysporum f.sp.cubense 4, Foc4)的准确检测,该研究提出一种基于胶体金的双探针纸基传感器。该传感器将2种不同粒径的胶体金分别与检测探针和信号增强探针结合,利用DNA探针代替抗原和抗体... 为实现对早期香蕉枯萎病4号生理小种(fusarium oxysporum f.sp.cubense 4, Foc4)的准确检测,该研究提出一种基于胶体金的双探针纸基传感器。该传感器将2种不同粒径的胶体金分别与检测探针和信号增强探针结合,利用DNA探针代替抗原和抗体,形成双探针体系,通过增加信号增强探针降低检测限。基于目标序列与双探针体系的碱基互补配对形成“金标探针-目标序列-T线探针”复合物并在传感器的测试区被捕获,10 min内形成肉眼可见的目标产物,通过分析测试条带得到光强度峰面积并代入标准曲线中,实现Foc4定量检测。试验结果表明,双探针纸基传感器的检测限达到0.001 nmol/L,是传统纸基传感器的100倍,提高了检测灵敏度;在0.001~1 000.000 nmol/L范围内,Foc4浓度与测试线光强度峰面积呈线性关系;使用高浓度非互补探针进行试验干扰,发现非互补序列对检测效果基本无影响,表明该传感器具有较好的特异性;香蕉叶片Foc4检测的平均回收率为77.6%~102.3%,相对标准偏差为7.4%~7.7%。与传统形态学观察等检测方法相比,该研究提出的双探针核酸纸基检测传感器可以及时、快速、准确地判断早期Foc4的存在,具有良好的推广性和实际应用价值。 展开更多
关键词 传感器 检测 Foc4 双探针 胶体金 核酸侧向层析
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Real-time in situ observation of P53-mediated cascade activation of apoptotic pathways with nucleic acid multicolor fluorescent probes based on symmetrical gold nanostars
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作者 Chenbiao Li Peifang Chen +4 位作者 Xiaoyuan Ma Xichi Lin Shan Xu Sobia Niazi Zhouping Wang 《Nano Research》 SCIE EI CSCD 2023年第4期5391-5400,共10页
T-2 toxin,one of the most dangerous natural pollutants,induces apoptosis through multiple pathways.Amongst,P53 mediated apoptosis pathway,an important collection of molecules,plays a key role in cell vital activity.Re... T-2 toxin,one of the most dangerous natural pollutants,induces apoptosis through multiple pathways.Amongst,P53 mediated apoptosis pathway,an important collection of molecules,plays a key role in cell vital activity.Real-time monitoring of upstream and downstream activation relationships of P53 mRNA,Bax mRNA,and cytochrome c(Cyt c)in signaling pathways is of great significance for understanding the apoptotic machinery in human physiology.In this work,a novel nucleic acid multicolor fluorescent probe,based on silica-coated symmetric gold nanostars(S-AuNSs@SiO_(2)),was developed for highly sensitive in situ real-time imaging of P53 mRNA,Bax mRNA,and Cyt c during T-2 toxin-induced apoptosis.The nucleic acid chains modified with carboxyl groups were modified on the surface of S-AuNSs@SiO_(2)by amide reaction.The complementary chains of targeted mRNA and the aptamer of targeted Cyt c were modified with different fluorophores,respectively,and successfully hybridized on S-AuNSs@SiO_(2)surface.When targets were present,the fluorescent chains bound to the targets and detached from the material,resulting in the quenched fluorescence being revived.The probes based on S-AuNSs showed excellent performance is partly ascribed to the presence of 20 symmetric“hot spots”.Notably,the amide-bonded probe exhibited excellent anti-interference capability against biological agents(nucleases and biothiols).During the real-time fluorescence imaging of T-2 toxin-induced apoptosis,the corresponding fluorescence signals of P53 mRNA,Bax mRNA,and Cyt c were observed sequentially.Therefore,S-AuNSs@SiO_(2)probe not only provides a novel tool for real-time monitoring of apoptosis pathways cascade but also has considerable potential in disease diagnosis and pharmaceutical medical. 展开更多
关键词 nucleic acid multicolor fluorescent probe symmetric gold nanostars T-2 toxin P53 mediated apoptosis pathway living cells imaging
原文传递
核酸荧光探针检测在临床疾病分子诊断中的应用
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作者 沈辰 罗宇睿 +3 位作者 李美 罗耀 孙旭平 应斌武 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第12期1409-1415,共7页
核酸荧光探针检测正逐渐成为临床疾病分子诊断的重要手段。这项技术主要应用具有高度特异性的荧光探针靶向疾病相关核酸序列,从而实现对目标核酸的高灵敏度、高特异性检测。核酸荧光探针检测在临床中的应用十分广泛,包括感染性疾病、遗... 核酸荧光探针检测正逐渐成为临床疾病分子诊断的重要手段。这项技术主要应用具有高度特异性的荧光探针靶向疾病相关核酸序列,从而实现对目标核酸的高灵敏度、高特异性检测。核酸荧光探针检测在临床中的应用十分广泛,包括感染性疾病、遗传性疾病和肿瘤的诊断。而随着纳米技术的不断发展,具有更高检验效能的核酸荧光探针检测体系也不断产生。其中基于荧光淬灭纳米材料构建的均相核酸检测体系由于其较高的检测能力和简单的体系,将有助于进一步推动疾病分子诊断的发展。该文主要述评了核酸荧光探针检测在多种疾病诊断中的临床应用,并讨论了利用荧光淬灭纳米材料构建的均相核酸检测新体系的原理和应用价值。 展开更多
关键词 核酸荧光探针检测 分子诊断 感染性疾病 遗传性疾病 肿瘤 纳米材料
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核酸探针在抗生素残留生物传感检测中的应用
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作者 颜玉婷 王乾 +1 位作者 周芳芳 黄悦 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第4期783-790,共8页
抗生素作为动物治疗剂和生长促进剂广泛应用于农业、畜牧业、水产品养殖业,导致动植物食品中抗生素残留量超标,严重威胁人体健康。因此,检测食品中抗生素残留具有重要意义。而现有的抗生素残留检测方法如微生物法、免疫学分析、液相色谱... 抗生素作为动物治疗剂和生长促进剂广泛应用于农业、畜牧业、水产品养殖业,导致动植物食品中抗生素残留量超标,严重威胁人体健康。因此,检测食品中抗生素残留具有重要意义。而现有的抗生素残留检测方法如微生物法、免疫学分析、液相色谱-质谱法、毛细管电泳等,通常具有耗时长、操作复杂、成本高等缺点。生物传感器作为一种高新技术,具有快速简单、灵敏度高、选择性好、成本低等特点,在抗生素残留检测领域具有较大优势。核酸探针作为一种新型生物分析工具广泛应用于生物传感器的开发中,将其引入抗生素残留的生物传感检测为实现抗生素残留的高效检测开辟了新途径。该文从电化学生物传感器、荧光生物传感器、比色生物传感器以及其他常见生物传感器方面综述了核酸探针在抗生素残留生物传感检测中的应用研究进展,并展望了该领域未来的发展前景。 展开更多
关键词 抗生素 残留 核酸探针 检测 生物传感器
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基于实时荧光定量PCR的番木瓜多重PCR高效检测方法 被引量:1
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作者 张玉山 陈洁彬 +3 位作者 吴亮君 朱璇 欧阳淑芬 沈志华 《湖北农业科学》 2023年第9期170-174,共5页
以pCaMV35S基因核酸检测试剂盒反应体系为基础,添加多重PCR反应所需的目标基因引物和番木瓜(Carica papaya L.)DNA,进行多重PCR反应,同时考察不合成荧光探针的情况下对目标基因进行实时荧光定量检测。结果表明,在实时荧光定量PCR反应体... 以pCaMV35S基因核酸检测试剂盒反应体系为基础,添加多重PCR反应所需的目标基因引物和番木瓜(Carica papaya L.)DNA,进行多重PCR反应,同时考察不合成荧光探针的情况下对目标基因进行实时荧光定量检测。结果表明,在实时荧光定量PCR反应体系中,多重PCR扩增的基因条带比常规PCR扩增的基因条带更亮,在不合成荧光探针的情况下实现目标基因的实时荧光定量PCR反应,以期建立一种基于实时荧光定量PCR的多重PCR检测方法。 展开更多
关键词 转基因番木瓜(Carica papaya L.) 多重PCR反应 实时荧光定量PCR 荧光探针 pCaMV35S基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
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基于介电泳微流控芯片实现amol级分子量检测
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作者 周博华 林琳 +1 位作者 赖丽燕 李以贵 《微纳电子技术》 CAS 北大核心 2023年第5期770-778,共9页
设计并制作了一种快速检测宫颈癌细胞C4II的微流控芯片。制作的微芯片结构是采用电感耦合等离子体-反应离子刻蚀(ICP-RIE)工艺制备的硅模具为核心的复合结构,微芯片中包含一个10×10的微腔室阵列,单个微腔室底面半径40μm,高度500... 设计并制作了一种快速检测宫颈癌细胞C4II的微流控芯片。制作的微芯片结构是采用电感耦合等离子体-反应离子刻蚀(ICP-RIE)工艺制备的硅模具为核心的复合结构,微芯片中包含一个10×10的微腔室阵列,单个微腔室底面半径40μm,高度500μm,整个微腔室的理论溶液体积达到250 pL。荧光检测系统采用波长(340±15)nm的激发光滤波片和波长(480±30)nm的接收光滤波片的最佳滤光类型,同时利用介电泳(DEP)法浓缩核酸以及采用硅烷偶联法固定核酸探针OMU-opy2来增加荧光强度。实验结果表示,该微流控芯片能检测到有效荧光的样品溶液最低浓度可低至7.8 nmol/L,从而微芯片的RNA分子量检测极限提升至1.9 amol。 展开更多
关键词 微流控芯片 介电泳(DEP) 电感耦合等离子体-反应离子刻蚀(ICP-RIE) 微腔室 核酸探针 滤波片
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基因靶点筛查快速确诊遗传性对称性红斑角化症的研究
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作者 孙宏勇 李睿亚 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第1期125-128,共4页
目的建立一套快速准确确诊遗传性对称性红斑角化症的方法,为备孕家庭提供指导性意见。方法对35例患有遗传性对称性红斑角化症的新生儿的皮肤组织进行基因序列分析,筛查出导致遗传性对称性红斑角化症的突变点位,针对这些靶点基因设计对... 目的建立一套快速准确确诊遗传性对称性红斑角化症的方法,为备孕家庭提供指导性意见。方法对35例患有遗传性对称性红斑角化症的新生儿的皮肤组织进行基因序列分析,筛查出导致遗传性对称性红斑角化症的突变点位,针对这些靶点基因设计对应的引物和基因探针,确立PCR的扩增条件,建立一整套快速准确筛查遗传性对称性红斑角化症的方法。结果35例遗传性对称性红斑角化症DNA对比分析发现KRT-XY区域存在点位异常。建立PCR基因靶点筛查系统,PCR基因靶点筛查遗传性对称性红斑角化症实验的阳性对照及样板参照结果均与预期一致。结论以DNA靶点为基础设计的引物、基因探针作为遗传性对称性红斑角化症基因靶点筛查具有极高的准确率,是快速筛查遗传性对称性红斑角化症的理想检测方法之一。 展开更多
关键词 遗传性对称性红斑角化症 DNA分析 核酸探针 基因靶点筛查
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核酸适配体荧光探针法和液基夹层杯法检测结核分枝杆菌临床应用价值比较
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作者 徐镠粤 廖庆华 +4 位作者 彭柯皓 余美玲 陈燕梅 卓文基 赖晓宇 《检验医学》 CAS 2023年第10期915-918,共4页
目的 比较核酸适配体荧光探针法和液基夹层杯法检测结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值。方法 采集175例肺结核患者和80名健康体检者的痰液样本,分别采用液体培养法、固体培养法、抗酸染色镜检法、液基夹层杯法、核酸适配体荧光探针法检测... 目的 比较核酸适配体荧光探针法和液基夹层杯法检测结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值。方法 采集175例肺结核患者和80名健康体检者的痰液样本,分别采用液体培养法、固体培养法、抗酸染色镜检法、液基夹层杯法、核酸适配体荧光探针法检测MTB。以液体培养法结果为标准,评价核酸适配体荧光探针法、液基夹层杯法与液体培养法结果的一致性。结果 与液体培养法结果比较,液基夹层杯法的敏感性为78.08%、特异性为98.04%;核酸适配体荧光探针法的敏感性为54.79%、特异性为50.98%。结论 液基夹层杯法与液体培养法一致性较好,具有较好的临床诊断价值;核酸适配体荧光探针法性能尚需优化。 展开更多
关键词 核酸适配体荧光探针 结核分枝杆菌 液基夹层杯法 结核病
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PCR-荧光探针法和核酸序列测定法对呼吸道病原体的检测效能比较及呼吸道病原体的流行特征分析
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作者 杨文杰 王晓明 +5 位作者 童文娟 董学妍 戴卫健 林源吉 王贤军 余道军 《浙江医学》 CAS 2023年第16期1704-1708,1717,共6页
目的比较PCR-荧光探针法和核酸序列测定法对呼吸道病原体的检测效能,进一步分析呼吸道病原体的流行特征。方法选择2019年7至12月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院呼吸道感染患者309例,采集鼻咽拭子标本,分别采用核酸序列测定法和P... 目的比较PCR-荧光探针法和核酸序列测定法对呼吸道病原体的检测效能,进一步分析呼吸道病原体的流行特征。方法选择2019年7至12月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院呼吸道感染患者309例,采集鼻咽拭子标本,分别采用核酸序列测定法和PCR-荧光探针法进行同步盲法检测,以核酸序列测定法的检测结果为金标准,分析PCR-荧光探针法检测不同病原体的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,并分析不同呼吸道病原体的流行特征。结果309例鼻咽拭子标本中,两种方法检测结果不一致或不完全一致的样本共2例,针对不同病原体,PCR-荧光探针法的检测灵敏度均为100.00%,特异度为99.65%~100.00%,阴性预测值均为100.00%,阳性预测值为75.00%~100.00%。309例呼吸道感染患者,人鼻病毒检出率为25.6%(79/309),人腺病毒检出率次之,为11.3%(35/309);学龄前儿童(<6岁)和6~21岁人群检测出18种呼吸道病原体,其中以人鼻病毒检出率最高。结论与核酸序列测定法相比,PCR-荧光探针法检测鼻咽拭子标本中的呼吸道病原体更灵敏、安全、简便、稳定,具有较高的临床应用价值。本院呼吸道感染以人鼻病毒为主。 展开更多
关键词 呼吸道病原体 核酸序列测定法 荧光探针法 鼻咽拭子 人鼻病毒 人博卡病毒
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鼻咽拭子中鼻病毒三种检测方法比较分析
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作者 郝丹凤 陈坚 +3 位作者 张梓祺 董学妍 林源吉 余道军 《浙江临床医学》 2023年第4期568-570,共3页
目的比较三种检测方法(病毒分离培养鉴定法、核酸序列测定法和PCR-荧光探针法)检测鼻咽拭子标本中鼻病毒(HRV)的可靠性。方法采用盲法、对比试验设计。根据纳入标准和排除标准入组220例鼻咽拭子标本,分别用病毒分离培养鉴定法、核酸序... 目的比较三种检测方法(病毒分离培养鉴定法、核酸序列测定法和PCR-荧光探针法)检测鼻咽拭子标本中鼻病毒(HRV)的可靠性。方法采用盲法、对比试验设计。根据纳入标准和排除标准入组220例鼻咽拭子标本,分别用病毒分离培养鉴定法、核酸序列测定法和PCR-荧光探针法进行盲法检测,以评价三种检测方法的临床应用性能。结果本次试验入组的220例鼻咽拭子样本中,病毒分离培养鉴定法检测结果为阳性的样本20例,核酸序列测定法检测结果为阳性的样本32例,PCR-荧光探针法检测结果为阳性的样本35例。与病毒分离培养相比,PCR-荧光探针法检测阳性符合率为100.00%,阴性符合率为92.50%,总符合率为93.18%;PCR-荧光探针法与病毒分离培养鉴定法检测结果一致性一般(kappa=0.692),与核酸序列测定法检测结果一致性较好(kappa=0.947)。结论PCR-荧光探针法检测鼻咽拭子标本中的HRV可靠、准确、安全、简便、稳定,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 鼻病毒 病毒分离 核酸序列测定法 荧光探针法 鼻咽拭子
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犬细小病毒Proofman-LMTIA检测方法
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作者 许丹丹 姚蔚 +4 位作者 周丹 刘金鑫 张晓华 王耀 王德国 《中国测试》 CAS 北大核心 2023年第11期38-44,共7页
为评价Proofman探针的梯型熔解温度等温扩增技术(LMTIA)检测核酸的性能,以Proofman-LMTIA快速检测犬细小病毒为例,采用实时荧光定量PCR方法和微滴式数字PCR方法进行对比分析。针对犬细小病毒基因的特异性序列设计引物和Proofman探针,通... 为评价Proofman探针的梯型熔解温度等温扩增技术(LMTIA)检测核酸的性能,以Proofman-LMTIA快速检测犬细小病毒为例,采用实时荧光定量PCR方法和微滴式数字PCR方法进行对比分析。针对犬细小病毒基因的特异性序列设计引物和Proofman探针,通过优化反应条件,对方法的特异性、灵敏度进行测试,再通过实时荧光定量PCR方法、微滴式数字PCR进行对比验证。结果表明,所建立的Proofman-LMTIA方法在最适反应温度为61℃时,与猫、犬等基因组DNA无交叉反应,灵敏度达到8拷贝/μL,且能够在20 min内完成检测,与实时荧光定量PCR和数字PCR方法结果具有一致性。该方法不仅在恒温条件下即可扩增,且具有快速、灵敏、高效等优点,适用于病毒的现场快速检测。 展开更多
关键词 Proofman探针 梯型熔解温度等温扩增技术 犬细小病毒 微滴式数字PCR 快速检测
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地高辛标记探针检测猪胸膜肺炎放线杆菌的研究与应用 被引量:9
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作者 刁有祥 丁家波 +3 位作者 姜世金 孙淑红 崔治中 陈本龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期585-589,共5页
利用PCR反应扩增出胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因650 bp的DNA,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌均能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌... 利用PCR反应扩增出胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因650 bp的DNA,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌均能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、猪肺炎支原体、支气管败血波氏杆菌等细菌的核酸杂交均为阴性。对胸膜肺炎放线杆菌的最低检出限量为10×102 个放线杆菌。对疑似胸膜肺炎放线杆菌感染病变组织检测结果表明,在扁桃体、鼻腔、气管、肺脏均可检测出胸膜肺炎放线杆菌,以扁桃体的检出率最高。为猪胸膜肺炎放线杆菌的诊断和流行病学调查提供了良好的方法。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 地高辛标记探针 支气管败血波氏杆菌 多杀性巴氏杆菌 应用 猪肺炎支原体 流行病学调查 PCR反应 PCR产物 核酸探针 大肠杆菌 沙门氏菌 葡萄球菌 核酸杂交 检测结果 病变组织 扁桃体 DNA APX 特异性 血清型
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PCR和核酸探针检测猪源沙门氏菌四环素耐药基因tetC的研究 被引量:15
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作者 代敏 王红宁 吴琦 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期482-485,共4页
对沙门氏菌的四环素耐药性进行了检测,结果表明,沙门氏菌对四环素类抗生素产生了广泛的耐药性,耐药率达100%,对其四环素耐药基因tetC进行了扩增,结果获得以质粒为模板的特异性产物,与药敏试验结果阳性符合率75%,具有较高的检出率。用光... 对沙门氏菌的四环素耐药性进行了检测,结果表明,沙门氏菌对四环素类抗生素产生了广泛的耐药性,耐药率达100%,对其四环素耐药基因tetC进行了扩增,结果获得以质粒为模板的特异性产物,与药敏试验结果阳性符合率75%,具有较高的检出率。用光生物素对PCR产物进行标记,制备核酸探针,采用菌落原位杂交的方法对沙门氏菌进行检测,结果表明13株阳性、3株阴性,杂交结果与PCR结果阳性符合率为93.75%,具有较高的特异性。通过条件的优化,建立的四环素耐药基因tetC的PCR和核酸探针检测技术,为四环素耐药性的分子流行病学监测提供了有效的途径。 展开更多
关键词 沙门氏菌 TETC 耐药基因 核酸探针 PCR 四环素类抗生素 流行病学监测 PCR产物 耐药性 试验结果 原位杂交 检测技术 特异性 符合率 耐药率 阳性 检出率 生物素 药敏
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假肥大型进行性肌营养不良患者的基因型、表型分析及随访研究 被引量:14
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作者 张艳芝 熊晖 +10 位作者 王小竹 王硕 罗静 王静敏 姜玉武 常杏芝 潘虹 齐建光 李万镇 袁云 吴希如 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期661-666,共6页
目的:总结假肥大型进行性肌营养不良(Duchenne/Becker muscular dystrophy,DMD/BMD)患者的临床特征并进行基因诊断,分析基因型与表型的关系,以提高其诊疗水平。方法:收集整理90例患者的临床资料,提取外周血基因组DNA,采用多重连接探针扩... 目的:总结假肥大型进行性肌营养不良(Duchenne/Becker muscular dystrophy,DMD/BMD)患者的临床特征并进行基因诊断,分析基因型与表型的关系,以提高其诊疗水平。方法:收集整理90例患者的临床资料,提取外周血基因组DNA,采用多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)的方法进行抗肌萎缩蛋白基因DMD突变的检测,对未检测到缺失或重复的患儿扩增其肢带型肌营养不良2I型(limb girdle muscular dystrophy,LGMD2I)致病基因FKRP的外显子,然后进行DNA直接测序,并随访患者病情变化。结果:从临床确诊的90例DMD/BMD患者中检测出58例DMD基因外显子缺失(64.44%,58/90),9例外显子重复(10.00%,9/90),检出突变的34例患儿的母亲中17例(50%,17/34)为缺失/重复的杂合性改变。对23例未检测到DMD基因重复或缺失的患儿进一步直接测序FKRP基因编码序列,未发现致病突变。对14例患儿按照国外文献方案进行小剂量泼尼松短期间歇治疗,随访发现短期内激素治疗未见明显疗效,因例数及疗程不够尚不能得出结论;其中1例患儿母亲再次怀孕后在北京大学第一医院行产前诊断,经MLPA检测羊水细胞,诊断胎儿为女性携带者。结论:本组病例显示,DMD基因缺失突变主要发生在热点区45~54外显子之间,重复突变主要发生在基因的5′端。识别DMD?BMD的临床特征及基因突变的类型有助于提高对该病的认识,判断预后。MLPA作为一种简便快速的诊断方法可对DMD?BMD进行基因诊断,检出携带者,更好的进行遗传咨询。 展开更多
关键词 肌营养不良 核酸探针 基因扩增 基因缺失
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猪圆环病毒2型原位杂交检测技术的建立与应用 被引量:14
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作者 姚鑫 杨汉春 +2 位作者 郭鑫 陈艳红 查振林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期169-174,共6页
参照GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计引物,利用PCR扩增得到PCV2 BF株341 bp的核酸片段,用随机引物法制备出地高辛标记的核酸探针。制备的探针与PCV1、PRRSV、PPV、PRV等不发生反应,可检测的最低PCV2 DNA含量为1.78 p... 参照GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计引物,利用PCR扩增得到PCV2 BF株341 bp的核酸片段,用随机引物法制备出地高辛标记的核酸探针。制备的探针与PCV1、PRRSV、PPV、PRV等不发生反应,可检测的最低PCV2 DNA含量为1.78 pg。对30份临床组织样本进行了检测,并与PCR比较,结果表明,阴性符合率为100%,阳性符合率为88.9%。应用原位杂交技术分析了PCV2在人工感染仔猪主要组织中的分布,结果表明,感染后3 d,从仔猪的淋巴结、胸腺、肺脏、脾脏、鼻黏膜可检测到阳性信号,感染后21 d,肝脏、肾脏、胰腺和回肠可检出阳性信号,至感染后42 d,可从心脏、胃、脑检出阳性信号。在整个试验过程中会厌软骨、膀胱、皮肤、肌肉等组织均为阴性。本研究结果表明,建立的PCV2原位杂交技术具有良好的敏感性和特异性,可用于PCV2的实验室诊断和感染靶细胞的定位分析。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 核酸探针 原位杂交 分布
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应用基因芯片直接检测结核病患者各类标本中利福平和异烟肼耐药的价值 被引量:18
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作者 白雪娟 刘银萍 +2 位作者 张俊仙 王杰 吴雪琼 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2019年第2期138-144,共7页
目的研究结核分枝杆菌(MTB)耐药基因芯片直接检测结核病患者临床标本中利福平和异烟肼耐药相关基因的临床价值。方法回顾性分析125例通过硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)鉴别培养为MTB的临床标本,其中痰标本90例、支气管灌洗液12... 目的研究结核分枝杆菌(MTB)耐药基因芯片直接检测结核病患者临床标本中利福平和异烟肼耐药相关基因的临床价值。方法回顾性分析125例通过硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)鉴别培养为MTB的临床标本,其中痰标本90例、支气管灌洗液12例、脓液12例、胸腔积液6例、组织标本3例、腹腔积液和尿液标本各1例,应用绝对浓度法同时进行利福平(RFP)和异烟肼(INH)药物敏感性试验(简称“绝对浓度法药敏试验”),并用基因芯片直接检测临床标本中MTBrpoB、katG和inhA基因型。以绝对浓度法药敏试验为标准,评价基因芯片检测RFP、INH耐药和耐多药(MDR)的敏感度和特异度,并且比较两种检测结果的一致性。结果在125例结核病患者临床标本中,绝对浓度法药敏试验显示对RFP、INH的耐药率和MDR发生率分别为20.0%(25/125)[其中高耐占88.0%(22/25)、低耐占12.0%(3/25)]、17.6%(22/125)[其中高耐占18.2%(4/22)、低耐占81.8%(18/22)]、16.8%(21/125)。初治和复治结核病患者临床标本中MDR-MTB的检出率分别为7.6%(7/92)和39.4%(13/33)。以绝对浓度法药敏试验为标准,应用基因芯片直接检测临床标本中MTBrpoB、katG和inhA基因型,预示对RFP、INH耐药和MDR的敏感度分别为72.0%(18/25)、63.6%(14/22)和61.9%(13/21),特异度分别为91.0%(91/100)、86.4%(89/103)和89.4%(93/104),两种方法的一致率分别为87.2%(109/125)、82.4%(103/125)和84.8%(106/125)。结论应用耐药基因芯片直接检测结核病患者临床标本中MTB对RFP和INH耐药的相关基因突变具有中等的敏感度和较高的特异度,可快速检出对RFP、INH耐药和MDR-TB患者,为临床早期开展有效化疗提供实验依据。 展开更多
关键词 标本制备 结核 抗多种药物性 核酸探针 点突变 微生物敏感性试验 利福平 异烟肼 对比研究
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探针浓度值对LSAW-bisPNA传感器检测系统的影响 被引量:5
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作者 陈鸣 张烨 +3 位作者 王云霞 丁毅 曹亮 府伟灵 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期342-344,共3页
目的探讨双体肽核酸(bisPNA)探针浓度值对漏声表面波(LSAW)-bisPNA基因传感器检测系统的影响。方法LSAW基因传感器表面分别固定终浓度为0.001、0.005、0.01、0.05、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0μmol/L的bisPNA探针后,分别观察其与相应... 目的探讨双体肽核酸(bisPNA)探针浓度值对漏声表面波(LSAW)-bisPNA基因传感器检测系统的影响。方法LSAW基因传感器表面分别固定终浓度为0.001、0.005、0.01、0.05、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0μmol/L的bisPNA探针后,分别观察其与相应的HPV靶序列杂交时相位变化及反应所需时间。结果与HPV靶序列杂交所引起的相位变化值是先升后降,以1.0μmol/L探针浓度为分界线;杂交平衡时间上各组间未见明显的变化趋势。结论1.0μmol/L bisPNA探针固定浓度最为适宜。 展开更多
关键词 肽核酸 探针 漏声表面波 基因传感器 杂交
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功能性硫化镉纳米荧光探针荧光猝灭法测定核酸 被引量:22
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作者 汪乐余 郭畅 +3 位作者 李茂国 许发功 朱昌青 王伦 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第1期83-86,共4页
报道了无机纳米溶胶CdS的合成 ,并对其进行了功能化修饰。研究了功能性CdS纳米溶胶的荧光性质。对小牛胸腺DNA进行了定量测定 ,考察了各种影响因素 ,在最佳实验条件下 ,该方法的线性区间 0 .1~1 5mg L ,检测限为 0 .0 18mg L。与传统... 报道了无机纳米溶胶CdS的合成 ,并对其进行了功能化修饰。研究了功能性CdS纳米溶胶的荧光性质。对小牛胸腺DNA进行了定量测定 ,考察了各种影响因素 ,在最佳实验条件下 ,该方法的线性区间 0 .1~1 5mg L ,检测限为 0 .0 18mg L。与传统的有机染料相比 ,该方法简单、快速。 展开更多
关键词 功能性硫化镉 荧光猝灭法 测定 纳米粒子 荧光探针 核酸 DNA
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2019-2020年山西省临汾市结核病分子生物学核酸检测技术应用情况分析 被引量:7
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作者 范月玲 王春蒲 +8 位作者 高建伟 邓俊平 宋宏 冯苗 商亚丽 李清桃 张重辉 张彦萍 李仁忠 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2021年第12期1280-1286,共7页
目的分析山西省临汾市2019—2020年“探索提高贫困地区肺结核发现”项目实施期间结核病分子生物学核酸检测技术应用情况,为优化临汾市结核病防控策略提供依据。方法利用《中国疾病预防控制信息系统》及其子系统《结核病管理信息系统》... 目的分析山西省临汾市2019—2020年“探索提高贫困地区肺结核发现”项目实施期间结核病分子生物学核酸检测技术应用情况,为优化临汾市结核病防控策略提供依据。方法利用《中国疾病预防控制信息系统》及其子系统《结核病管理信息系统》和“探索提高贫困地区肺结核发现”项目月报表相关数据,以2018年数据为基线,对2019—2020年临汾市及所属项目县(大宁县及永和县)肺结核患者和病原学阳性肺结核患者发现、药物敏感性筛查等情况进行分析。结果临汾市2018—2020年病原学阳性率分别为29.6%(442/1495)、36.4%(476/1307)和50.5%(652/1292),呈逐年上升趋势,差异有统计学意义(χ^(2)_(趋势)=152.410,P=0.000)。到2020年,17个县区中,除大宁县及永和县外[69.4%(25/36)、81.8%(18/22)和59.3%(16/27)、66.7%(8/12)],浮山、洪洞、安泽、翼城县的肺结核患者[分别为76.2%(32/42)、64.7%(174/269)、60.0%(9/15)、55.9%(38/68)]和病原学阳性肺结核患者[76.5%(13/17)、70.4%(81/115)、7/7、66.7%(24/36)]超过50%为市级(临汾市第三人民医院)诊断。2018—2020年临汾市药物敏感性筛查率分别为75.1%[229/(442-137)]、88.5%[339/(476-93)]和90.7%[489/(652-113)],呈逐年上升趋势,差异有统计学意义(χ^(2)_(趋势)=25.505,P=0.000)。2018—2020年大宁县及永和县病原学阳性率分别为31.2%(15/48)、25.0%(14/56)和54.0%(34/63),差异有统计学意义(χ^(2)=170.407,P=0.000)。2018—2020年,大宁县及永和县初诊患者在市级诊断的比例分别为38.4%(106/276)、43.4%(75/173)和56.3%(98/174),呈逐年上升趋势(χ^(2)_(趋势)=36.564,P=0.000)。结论临汾市第三人民医院为临汾市提供了全方位的结核病分子生物学检测服务。应继续优化或完善诊疗流程,达到普通肺结核患者诊疗不出县的分级诊疗要求,同时发挥市级诊断作为区域性结核病分子生物学诊断实验室的作用。 展开更多
关键词 结核 分子生物学 核酸探针 小地区分析
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