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Development of Nucleic Acid Sequence-Based Amplification Assay for Detection of Macrobrachium rosenbergii Nodavirus 被引量:2
1
作者 Feng LIN Li LIU +5 位作者 Dong QIAN Guijie HAO Pengcheng SHENG Zheng CAO Xuemei YUAN Jinyu SHEN 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2014年第3期42-45,共4页
A nucleic acid sequence-based amplification(NASBA)assay was established for the detection of Macrobrachium rosenbergii Nodavirus(MrNV).The specific primers were designed according to the high conserved region of R... A nucleic acid sequence-based amplification(NASBA)assay was established for the detection of Macrobrachium rosenbergii Nodavirus(MrNV).The specific primers were designed according to the high conserved region of RNA2 sequence of MrNV.The 224 bp specific amplification product was obtained in positive sample determined with 3%agarose gel electrophoresis,while no product was generated from shrimp infected with other viruses including DNA viruses(IHHNV,WSSV)and RNA viruses(TSV,IMNV,YHV).The detecting limit of the assay was 8pg nucleic acid,which is more sensitive than that of PCR method. 展开更多
关键词 Macrobrachium rosenbergii Nodavirus nucleic acid sequence-based amplification DETECTION
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Rice bicoid-related cDNA sequence and its expression during early embryogenesis 被引量:3
2
作者 YangZX AnGY 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2001年第1期74-80,共7页
Bicoid is one of the important Drosophila maternal genes involved in the control of embryo polarity and larvae segmentation. To clone and characterize the rice bicoid-related genes, one cDNA clone, Rb24 (EMBL accessio... Bicoid is one of the important Drosophila maternal genes involved in the control of embryo polarity and larvae segmentation. To clone and characterize the rice bicoid-related genes, one cDNA clone, Rb24 (EMBL accession number: AJ2771380), was isolated by screening of rice unmature seed cDNA library. Sequence analysis indicates that Rb24 contains a putative amino acid sequence, which is homologous to unique 8 amino acids sequence within Drosophila bicoid homeodomain (50% identity, 75% similarity) and involves a lys-9 in putative helix 3. Northern blot analysis of rice RNA has shown that this sequence is expressed in a tissue-specific manner. The transcript was detected strongly in young panicles, but less in young leaves and roots. This results are further confirmed with paraffin section in situ hybridization. The signal is intensive in rice globular embryo and located at the apical tip of the embryo, then, along with the development of embryo, the signal is getting reduced and transfers into both sides of embryo. The existence of bicoid-related sequence in rice embryo and the similarity of polar distribution of bicoid and Rb24 mRNA in early embryo development may implicates a conserved maternal regulation mechanism of body axis presents in Drosophila and in rice. 展开更多
关键词 base sequence Body Patterning Cloning Molecular DNA Complementary Gene Expression Regulation Plant Genes Plant Homeodomain Proteins Molecular sequence Data Oryza sativa Protein Structure Tertiary Research Support Non-U.S. Gov't Seeds sequence Homology nucleic acid TRANS-ACTIVATORS
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高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒NASBA-ELISA检测方法的建立 被引量:11
3
作者 梁海霞 薛青红 +4 位作者 高金源 邓永 陈晓春 吴华伟 郎洪武 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期401-404,共4页
针对猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF1中编码Nsp2的基因序列设计引物,建立了核酸序列依赖性扩增(NASBA)方法,并结合微孔板中液相杂交和酶标显色反应检测NASBA扩增产物,建立了检测高致病性PRRSV的NASBA-ELISA。琼脂糖凝胶电泳显示,NASB... 针对猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF1中编码Nsp2的基因序列设计引物,建立了核酸序列依赖性扩增(NASBA)方法,并结合微孔板中液相杂交和酶标显色反应检测NASBA扩增产物,建立了检测高致病性PRRSV的NASBA-ELISA。琼脂糖凝胶电泳显示,NASBA方法扩增出了特异性的目的条带。将NASBA产物RNA系列稀释后同时进行了ELISA和Northern杂交。结果显示,ELISA和Nor-thern杂交最高可分别检测到1∶50和1∶30稀释的产物RNA。采用建立的NASBA-ELISA可检测到101.83TCID50/mL的HuN4株PRRSV。该方法只对3株高致病性PRRSV的检测结果为阳性,对经典株PRRSV和其他猪源病毒的检测结果均为阴性。结果表明,NASBA-ELISA能够敏感并特异地检测高致病性PRRSV。 展开更多
关键词 高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒 核酸序列依赖性扩增 酶联免疫吸附试验
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NASBA技术及其在检验检疫中的应用 被引量:6
4
作者 王英超 王宁宁 +4 位作者 吴兴海 陈长法 魏晓棠 封立平 张成标 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第12期3823-3827,共5页
序列特异性核酸体外扩增技术(nucleic acid specific-based amplification,NASBA)是在PCR基础上发展起来的一种扩增RNA的新技术,作为一种新型研究手段,具有便捷、准确性好、灵敏度高、周期短的特点,尤其适用于RNA的分析研究。核酸分析... 序列特异性核酸体外扩增技术(nucleic acid specific-based amplification,NASBA)是在PCR基础上发展起来的一种扩增RNA的新技术,作为一种新型研究手段,具有便捷、准确性好、灵敏度高、周期短的特点,尤其适用于RNA的分析研究。核酸分析技术是出入境检验检疫工作的重要手段,可用于食品病原微生物、动植物产品中的有害生物、病原的分析及鉴定。本文简要介绍了NASBA技术的基本原理,在论证对比NASBA技术与普通PCR方法、荧光PCR方法及其他恒温扩增等核酸分析技术的差异及相似性后,根据其使用特点进一步对NASBA在进出境检验检疫的食品安全检测及动植物检疫的应用予以综述及展望。 展开更多
关键词 序列特异性核酸体外扩增技术 RNA检测 检验检疫 应用
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NASBA快速检测禽流感H5亚型病毒 被引量:18
5
作者 单松华 刘乐庭 +1 位作者 陈家华 吴仲梁 《中国病毒学》 CSCD 2005年第3期288-292,共5页
采用建立的依赖核酸序列的扩增(Nucleicacidsequencebasedamplification,NASBA)对禽流感病毒3株H5亚型、1株H1、H3、H6亚型、3株禽流感H9亚型、5株不同宿主来源的新城疫病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、SPF鸡胚尿囊液及禽流感(H9)疫苗、新... 采用建立的依赖核酸序列的扩增(Nucleicacidsequencebasedamplification,NASBA)对禽流感病毒3株H5亚型、1株H1、H3、H6亚型、3株禽流感H9亚型、5株不同宿主来源的新城疫病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、SPF鸡胚尿囊液及禽流感(H9)疫苗、新城疫疫苗、传染性法氏囊病疫苗、传染性支气管炎疫苗进行检测,结果NASBA(H5试剂)仅检测到禽流感病毒H5亚型,表明方法的特异性强。采用已知禽流感病毒A/Chicken/HK/1000/97(H5N1)的鸡胚尿囊液(ELD5010-7.5/mL),经10倍连续稀释,将经典的鸡胚病原分离法和NASBA进行比较,二种方法的灵敏度相当。用A/Chicken/HK/1000/97(H5N1)病毒人工感染SPF鸡、商品鸡,采用NASBA和病原分离法同时对人工感染鸡的粪拭子、血液进行了动态检测;采集感染死亡鸡的组织脏器,共检测了101个组织脏器,两种方法的符合率为90%(87/97)。 展开更多
关键词 禽流感H5亚型病毒 nasba 鸡胚病毒分离法 快速检测
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猪传染性胃肠炎病毒NASBA检测方法的建立 被引量:5
6
作者 李小兰 聂福平 +4 位作者 李应国 肖进文 徐自忠 胡世君 王昱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期451-454,共4页
为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NASBA的检测方法,本研究利用BioEdit和BlastN,根据GenBank中猪TGEV的S基因保守序列设计引物,建立了扩增TGEV的NASBA检测技术。利用该方法建立的反应体系在41℃反应2h即可得到有效扩增。实验结果表明:该... 为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NASBA的检测方法,本研究利用BioEdit和BlastN,根据GenBank中猪TGEV的S基因保守序列设计引物,建立了扩增TGEV的NASBA检测技术。利用该方法建立的反应体系在41℃反应2h即可得到有效扩增。实验结果表明:该方法对TGEV进行扩增获得约200bp特异性目的条带,而对CSFV、PRRSV、PCV-2、PPV、PEDV和ST细胞扩增结果均为阴性。NASBA的灵敏度高于普通RT-PCR,与病毒分离方法相当,可检测到5pg的核酸。该方法为TGEV的早期诊断提供了新途径。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 nasba检测方法
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DNA存储系统中的数据写入
7
作者 张宣梁 李青婷 王飞 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第5期1125-1141,共17页
世界的数字化给人们的生活带来了极大的变化,但与此同时,史无前例的数据激增使得信息存储面临的挑战日益严峻。随着全球数据总量的指数级增长,传统存储介质将无法满足数字化带来的存储需求。使用DNA分子作为基本载体的信息存储展现出高... 世界的数字化给人们的生活带来了极大的变化,但与此同时,史无前例的数据激增使得信息存储面临的挑战日益严峻。随着全球数据总量的指数级增长,传统存储介质将无法满足数字化带来的存储需求。使用DNA分子作为基本载体的信息存储展现出高存储密度、低维护成本和易于化学修饰等独特优势。DNA存储主要包括编码、写入、保存、检索、读取和解码六个主要步骤,其中数据的写入是实现DNA存储功能的基础。本文首先介绍DNA存储系统中体外写入数据的策略方法,主要分为将数据写入DNA序列和写入DNA结构两个部分,接着概述体内写入数据技术的发展,最后将讨论DNA存储系统中数据写入面临的写入成本高、写入速度慢等挑战,并对大规模合成高纯度DNA、改进生物酶等具有前景的应用技术进行展望。 展开更多
关键词 DNA存储 DNA合成 核酸序列 DNA纳米技术 框架核酸材料
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等温条件下序列特异性核酸扩增技术:NASBA 被引量:1
8
作者 刘敬忠 于力 孙燕 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1994年第2期27-29,共3页
介绍了一种能在等温条件下进行序列特异性核酸体外扩增的技术──NASBA(NucleicAcidSpecific-BasedAmplification)。该技术同时使用AMV反转录酶、T7RNA聚合酶及RNaseH,在... 介绍了一种能在等温条件下进行序列特异性核酸体外扩增的技术──NASBA(NucleicAcidSpecific-BasedAmplification)。该技术同时使用AMV反转录酶、T7RNA聚合酶及RNaseH,在同一个恒定温度下协同作用,使特异的核酸序列得以扩增至106~108倍。起始的模板可以是RNA,也可以是DNA,尤其适用于微量mRNA的特异性扩增。本文研究了各种因素对NASBA扩增效率的影响,找到了最适反应条件。并成功地从人脐带血总RNA中扩增了人T细胞受体γ链mRNA。 展开更多
关键词 核酸体外扩增 序列 等温条件
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bDNA和NASBA法定量检测HIV-1病毒载量的比较研究 被引量:8
9
作者 郭秋艳 黄晓婕 +10 位作者 代丽丽 汪习成 魏飞力 计云霞 石英 夏伟 郭彩萍 吴亚松 张彤 陈德喜 吴昊 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第5期326-328,共3页
目的比较分支DNA杂交实验(branched DNA,bDNA)和核酸序列扩增实验(Nucleic acid sequence-based am-plification,NASBA)两种方法检测人类免疫缺陷病毒1型病毒(HIV-1)病毒载量间的一致性。方法对25例HIV感染者/艾滋病(Acquired immune de... 目的比较分支DNA杂交实验(branched DNA,bDNA)和核酸序列扩增实验(Nucleic acid sequence-based am-plification,NASBA)两种方法检测人类免疫缺陷病毒1型病毒(HIV-1)病毒载量间的一致性。方法对25例HIV感染者/艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)患者血浆标本同时用bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量,并用流式细胞术检测患者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果bDNA法及NASBA法测得HIV-1病毒载量平均值分别为(4.398±0.580)log拷贝数/ml和(4.488±0.602)log拷贝数/ml,差异无统计学意义(t=1.210,P>0.05);两种方法检测出的病毒载量呈显著直线相关(r=0.8004,P<0.001),且与患者的CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值均呈显著直线负相关。结论bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量具有高度一致性,在实际工作中均可选用。 展开更多
关键词 HIV病毒载量 nasba bDNA法
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猪瘟病毒NASBA-RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:2
10
作者 杨平东 张明璀 曹立廷 《中国动物检疫》 CAS 2018年第7期78-81,共4页
本研究基于核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)和反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种针对猪瘟病毒的,快速、灵敏、特异的两步法检测技术。该方法的检测灵敏度与反转录巢式PCR(RT-NestPCR)相当,最低能检测出46 pg/μL的病毒RNA。... 本研究基于核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)和反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种针对猪瘟病毒的,快速、灵敏、特异的两步法检测技术。该方法的检测灵敏度与反转录巢式PCR(RT-NestPCR)相当,最低能检测出46 pg/μL的病毒RNA。该方法的建立为猪瘟病毒的快速诊断提供了新思路。 展开更多
关键词 核酸序列依赖性扩增技术 环介导等温扩增技术 反转录巢式PCR 猪瘟病毒 快速检测
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新型冠状病毒变异株分子诊断的研究现状 被引量:1
11
作者 杨静远 李永鑫 张新 《分子诊断与治疗杂志》 2023年第8期1283-1287,共5页
自2019年12月新冠疫情爆发以来,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)变异株在全球范围内大规模的传播,对全球安全和人类健康造成威胁。SARS-CoV-2变异株具有超高的传染性,实时监测SARS-CoV-2变异株流行情况对于疫情防控十分重要。目前针对变异株... 自2019年12月新冠疫情爆发以来,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)变异株在全球范围内大规模的传播,对全球安全和人类健康造成威胁。SARS-CoV-2变异株具有超高的传染性,实时监测SARS-CoV-2变异株流行情况对于疫情防控十分重要。目前针对变异株的检测技术主要包括核酸扩增技术和基因测序技术,本文就这些技术的基本原理和其在SARS-CoV-2变异株检测中的应用现状进行阐述,为实现实时监测SARS-CoV-2变异株提供有价值的参考。 展开更多
关键词 新型冠状病毒变异株 基因测序 核酸扩增技术
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核酸依赖性扩增技术研究现状及展望
12
作者 李锦澎(综述) 吴蓉(审校) 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第2期236-240,共5页
自19世纪90年代以来,等温核酸扩增技术及其衍生技术迅速发展。等温核酸扩增技术的流程简易、成本和应用要求更低,应用前景广泛。其中,核酸依赖性扩增技术(NASBA)已广泛用于病原体检测、单核苷酸突变检测和环境监测等领域。本文主要对近... 自19世纪90年代以来,等温核酸扩增技术及其衍生技术迅速发展。等温核酸扩增技术的流程简易、成本和应用要求更低,应用前景广泛。其中,核酸依赖性扩增技术(NASBA)已广泛用于病原体检测、单核苷酸突变检测和环境监测等领域。本文主要对近5年来NASBA技术的研究进展及其在分子诊断中的应用进行综述,探讨NASBA技术的前景与瓶颈。 展开更多
关键词 等温核酸扩增 核酸依赖性扩增 分子诊断
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组分动态网络触发的杂交链式反应——超灵敏检测肿瘤标志物
13
作者 朱亚莉 杨宁 +1 位作者 欧阳煜 张璞 《化学传感器》 CAS 2023年第2期1-7,共7页
目前肿瘤在发病前期,某些生物分子的表达水平可能出现上调或下调,但是含量仍处于微量或痕量状态,干扰物的存在很难实现对于微小变化肿瘤标志物(mirRNA)的准确检测,需要构建高灵敏、高准确度、高特异性的检测方法实现对微小变化目标物的... 目前肿瘤在发病前期,某些生物分子的表达水平可能出现上调或下调,但是含量仍处于微量或痕量状态,干扰物的存在很难实现对于微小变化肿瘤标志物(mirRNA)的准确检测,需要构建高灵敏、高准确度、高特异性的检测方法实现对微小变化目标物的有效溯源。常规的荧光生物传感器可以选择性地识别不同浓度目标物但无法实现对于微量、痕量分子的准确分析,因此需要将微量的目标物进行扩增。核酸放大策略通过对低浓度的目标物进行有效转化,启动核酸反应,使检测体系的灵敏度得到显著的提高。杂交链式反应(HCR)是一种新型的体外核酸等温扩增技术,主要是基于启动子DNA和发卡探针之间的杂交反应,来达到放大检测信号的效果。该综述主要总结了基于组分动态网络触发的杂交链式反应在肿瘤标志物的传感分析中的研究与应用进展,阐明了未来肿瘤标志物传感分析应用的前景和挑战,旨在为构建新型组分动态网络触发的杂交链式反应肿瘤标志物生物传感器提供参考。 展开更多
关键词 核酸放大策略 荧光生物传感器 肿瘤标志物 杂交链式反应
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纳米孔测序技术在核酸修饰检测中的应用
14
作者 陈佳璐 黄硕 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第3期119-129,共11页
DNA和RNA上广泛存在着多种化学修饰.这些核酸修饰参与基因表达的调控,影响生长发育等生理过程,并可能会引发癌症等疾病.对核酸修饰的精准识别与定位有助于理解其功能机制,帮助相关疾病的诊断与治疗.纳米孔测序是一种新兴的单分子测序技... DNA和RNA上广泛存在着多种化学修饰.这些核酸修饰参与基因表达的调控,影响生长发育等生理过程,并可能会引发癌症等疾病.对核酸修饰的精准识别与定位有助于理解其功能机制,帮助相关疾病的诊断与治疗.纳米孔测序是一种新兴的单分子测序技术,可以根据修饰碱基与天然碱基之间阻孔信号的差异实现核酸序列中多种修饰的同时检测,是目前检测核酸修饰最直接的方法.本文简要介绍了纳米孔测序技术的发展和原理以及识别核酸修饰的算法工具,总结了纳米孔测序技术在核酸修饰检测中的应用,并对其发展前景进行了展望. 展开更多
关键词 纳米孔测序 MinION测序仪 核酸修饰 碱基识别
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基于试纸条核酸提取和重组聚合酶扩增技术的HPV 16型DNA纸基电化学发光快速检测方法
15
作者 陈钰 任伟绮 +1 位作者 刘仲明 王捷 《中国实验诊断学》 2023年第9期1009-1015,共7页
目的建立一种人乳头瘤病毒(HPV)高危16亚型快速、灵敏、特异的检测方法。方法采用前期构建的试纸条法提取样本HPV DNA,并以其为模板,使用电化学发光试剂(酯化钌)标记上游引物,生物素标记下游引物,进行重组聚合酶恒温扩增,通过亲和素化... 目的建立一种人乳头瘤病毒(HPV)高危16亚型快速、灵敏、特异的检测方法。方法采用前期构建的试纸条法提取样本HPV DNA,并以其为模板,使用电化学发光试剂(酯化钌)标记上游引物,生物素标记下游引物,进行重组聚合酶恒温扩增,通过亲和素化的磁微球将生物素标记的扩增产物,在磁场的作用下富集,通过纸基电极-电化学发光检测技术,获得有酯化钌标记的待测物的浓度信息。结果酯化钌与上游引物以20∶1的摩尔比可以获得更高的标记效率和发光强度,该法最低检出限为50copies/mL,比实时荧光PCR的灵敏度高16倍;批内检测相对标准偏差低于5%,单个样本从核酸提取到获得扩增结果所需时间小于1h,具有较好的特异性、灵敏度和重复性。结论该法检测快速、灵敏、特异、操作简单,具有一定的临床应用价值。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 纸基 核酸提取 重组聚合酶扩增 电化学发光
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分子生物学技术在药品微生物鉴定溯源中的应用
16
作者 王淑娟 朱冉 +5 位作者 蒋波 杨燕 宋明辉 张宁 范一灵 杨美成 《中国药品标准》 2023年第6期579-584,共6页
目的:为满足基于风险评估的微生物控制体系及药品质量全过程控制的要求,建立更加完善的药品微生物鉴定溯源标准化分子生物学技术体系。方法:总结各国药典中分子生物学标准体系的构成,并分析《中国药典》中收载的分子生物学技术及该技术... 目的:为满足基于风险评估的微生物控制体系及药品质量全过程控制的要求,建立更加完善的药品微生物鉴定溯源标准化分子生物学技术体系。方法:总结各国药典中分子生物学标准体系的构成,并分析《中国药典》中收载的分子生物学技术及该技术在药品微生物鉴定溯源中的应用。结果与结论:分子生物学技术是进行药品微生物鉴定溯源的重要标准,不同的分子生物学鉴定方法都有其优势和局限性,需要根据需求选择最合适的方法,以期达到最佳效果。 展开更多
关键词 分子生物学技术 核酸扩增技术 16S rRNA 全基因组测序 MALDI-TOF MS 药品微生物 鉴定溯源
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基于改进的卷积神经网络与支持向量机集成实现DNA结合蛋白预测CNN-SVM
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作者 黄安琦 魏志森 《科学与信息化》 2023年第14期143-147,共5页
DNA结合蛋白与很多疾病和症状的产生有着密切的联系,准确识别有助于促进医疗科技的发展。本文提出了一种基于序列特征的DNA结合蛋白预测模型。该模型采用蛋白质的位置特异性打分矩阵特征和预测溶剂可极性概率矩阵特征的变体,训练了一个... DNA结合蛋白与很多疾病和症状的产生有着密切的联系,准确识别有助于促进医疗科技的发展。本文提出了一种基于序列特征的DNA结合蛋白预测模型。该模型采用蛋白质的位置特异性打分矩阵特征和预测溶剂可极性概率矩阵特征的变体,训练了一个卷积神经网络和支持向量机集成的分类器。实验结果证明,该方法在相同基准数据集上,其性能也远远高于其他方法,F1分数为87.8%。 展开更多
关键词 核酸结合蛋白 基于序列的预测 卷积神经网络 支持向量机
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依赖于核酸序列恒温扩增技术快速检测副溶血性弧菌方法的建立 被引量:9
18
作者 倪鑫 王志聪 +5 位作者 雷质文 梁成珠 汪东风 姜英辉 王建广 祝素贞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期882-886,共5页
为建立副溶血性弧菌的快速检测方法,本研究采用依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)技术,以副溶血性弧菌的tlh基因为扩增的靶基因设计特异性引物和探针,建立可快速扩增副溶血性弧菌的NASBA方法。特异性和灵敏度试验结果表明:该NASBA方法对副... 为建立副溶血性弧菌的快速检测方法,本研究采用依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)技术,以副溶血性弧菌的tlh基因为扩增的靶基因设计特异性引物和探针,建立可快速扩增副溶血性弧菌的NASBA方法。特异性和灵敏度试验结果表明:该NASBA方法对副溶血性弧菌的最小检出量为5.1×102 cfu/mL,高于普通PCR方法,而且与其他种属的菌无任何交叉反应。此外,本研究将副溶血弧菌扩增产物采用通用型核酸扩增物快速检测板进行检测,实现了特异性强的快速副溶血弧菌的检测。该方法对仪器要求低,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 检测 依赖于核酸序列恒温扩增
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红花SRAP扩增体系的建立和优化 被引量:24
19
作者 彭飒 郭美丽 +1 位作者 陈跃华 郭庆华 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期544-547,共4页
目的:探讨影响红花SRAP扩增的各种因素,建立能够稳定扩增红花基因组的体系,为研究红花重要性状的遗传基础及建立分子辅助标记育种的技术平台奠定基础。方法:用CTAB法提取红花DNA,设计Taq酶浓度(0.02、0.040、.06 U/μl)、dNTP浓度(0.15... 目的:探讨影响红花SRAP扩增的各种因素,建立能够稳定扩增红花基因组的体系,为研究红花重要性状的遗传基础及建立分子辅助标记育种的技术平台奠定基础。方法:用CTAB法提取红花DNA,设计Taq酶浓度(0.02、0.040、.06 U/μl)、dNTP浓度(0.15、0.25、0.30 mmol/L)、Primer浓度(0.15、0.30、0.45μmol/L)3因素3水平27次实验和Mg2+浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mmol/L)8水平单因素实验。在25μl体系中加入模板DNA 20 ng。对体系进行优化,用琼脂糖进行检测。结果:本研究建立了适合红花的SRAP体系,Taq酶浓度为0.02 U/μl,dNTP浓度为0.25 mmol/L,Primer浓度为0.30μmol/L,Mg2+的浓度为3.0 mmol/L,优化后的体系目标条带增多,重现性好,得到了较好的扩增效果。结论:本研究建立的反应体系适合红花SRAP的研究。 展开更多
关键词 红花 相关序列扩增多态性 核酸扩增技术
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沙门氏菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法的建立 被引量:7
20
作者 雷质文 姜英辉 +5 位作者 王妍婷 赵丽青 张健 倪鑫 王建广 梁成珠 《食品安全质量检测学报》 CAS 2011年第5期248-252,共5页
采用自行建立和优化的依赖于核酸序列恒温扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)检测体系,对沙门氏菌进行检测。采用沙门氏菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测沙门氏菌的NAS-BA检测法,并进行了特异... 采用自行建立和优化的依赖于核酸序列恒温扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)检测体系,对沙门氏菌进行检测。采用沙门氏菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测沙门氏菌的NAS-BA检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明:所建立起的NASBA检测方法,灵敏度为7.1×102cfu/ml,高于普通PCR方法。 展开更多
关键词 沙门氏菌 检测 依赖于核酸序列恒温扩增
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