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Expression,Purification,Crystallization and Preliminary Crystallographic Analysis of Nucleoside Diphosphate Kinase(NDK)from Aspergillus Flavus
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作者 王森 李博文 +3 位作者 江龙光 汪世华 张彦丰 王宇 《Chinese Journal of Structural Chemistry》 SCIE CAS CSCD 2016年第11期1708-1713,共6页
Aspergillus flavus causes serious disease on important agriculture crops, and its secondary metabolic products-aflatoxins are most potent toxin and carcinogen for animal and human, Structural and functional studies of... Aspergillus flavus causes serious disease on important agriculture crops, and its secondary metabolic products-aflatoxins are most potent toxin and carcinogen for animal and human, Structural and functional studies ofA. flavus proteins may provide insights into the identification of potential therapeutic targets and prevention of damage caused by A. flavus. Here, we report the expression, purification, crystallization and preliminary crystallographic analysis of NDK protein from A. flavus. The NDK protein was expressed in E. coli and purified by using a series of chromatographic methods to 〉98% purity. The recombinant protein was crystallized and the crystals diffracted to 2.4 A^° resolution. The crystal of NDK is in space group of C121 with a = 190.84, b = 169.47, c = 146.94 A^°. Preliminary data analysis indicated that the NDK molecule assembles into a multimer in the asymmetric unit. 展开更多
关键词 AspergUlusflavus nucleoside diphosphate kinase EXPRESSION PURIFICATION CRYSTALLIZATION
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THE REGULATORY EFFECT OF NUCLEOSIDE DIPHOSPHATE KINASE ON G-PROTEIN AND G-PROTEIN MEDIATED PHOSPHOLIPASE C
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作者 张德昌 张宽仁 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 1995年第1期25-29,共5页
The effect of nucleoside diphosphate kinase (NDPK) on the activrty of guanine nucleotide regulatory protein (G-protein) mediated phospholipase C(PLC) and on the [35S]GTPTτS binding of G-protein was investigated in th... The effect of nucleoside diphosphate kinase (NDPK) on the activrty of guanine nucleotide regulatory protein (G-protein) mediated phospholipase C(PLC) and on the [35S]GTPTτS binding of G-protein was investigated in this work in order to demonstrate the mechanism behind the regulation of G-protein and its effector PLC by NDPK. The stimulation of PLC in turkey erythrocyte membrane by both GTP and GTPτS indicated that the PLC stimulation was mediated by G-protein. NDPK alone stimulated PLC activity. as well as the stimulation in the presence of GTP and GDP, in a dose-dependent manner. However. NDPK inhibited GTPτS-stimulated PLC. Furthermore, NDPK inhibited [35S]GTPτS binding of purified Gi-protein in a non-competitive manner. A hypothesis implying an important role of direct interaction of G-protein and NDPK in the regulation of their functions is suggested and discussed. 展开更多
关键词 nucleoside diphosphate kinase G-PROTEIN phospholipase C
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芒果核苷二磷酸激酶(NDPK)基因克隆及表达分析 被引量:7
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作者 罗睿雄 赵志常 +2 位作者 黄建峰 党志国 高爱平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第11期2183-2190,共8页
采用3′RACE和RT-PCR技术克隆芒果核苷二磷酸激酶基因全长c DNA序列,并用实时荧光定量PCR分析该基因的表达模式。结果表明:Mi NDPK1基因c DNA全长1 019 bp,开放阅读框为447 bp,编码148个氨基酸。Mi NDPK1蛋白定位于细胞质,无信号肽和跨... 采用3′RACE和RT-PCR技术克隆芒果核苷二磷酸激酶基因全长c DNA序列,并用实时荧光定量PCR分析该基因的表达模式。结果表明:Mi NDPK1基因c DNA全长1 019 bp,开放阅读框为447 bp,编码148个氨基酸。Mi NDPK1蛋白定位于细胞质,无信号肽和跨膜区域,具有典型的核苷二磷酸激酶活性结构域和其他磷酸化活性位点;与麻疯树、橡胶树同源性最高为89%,与菠菜同源性最低为82%。Mi NDPK1在芒果各组织中均有表达,以叶片中表达最高,其次是花和果皮;在芒果进入生殖时期的花芽分化期表达量最高,此后在芒果果实发育进程中逐渐降低并趋于平稳。结合病害处理转录组样本中的差异性表达结果,推测芒果Mi NDPK1基因在花芽分化进程、抗病性诱导及免疫应答通路上发挥重要作用。 展开更多
关键词 芒果 核苷二磷酸激酶 基因克隆 生物信息学分析 表达分析
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植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)研究进展 被引量:6
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作者 王文斌 王金胜 +1 位作者 邓西平 刘建东 《农学学报》 2011年第4期1-5,共5页
为了给植物核苷二磷酸激酶NDPKs的进一步研究提供参考,总结了植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)的分类、亚细胞定位、功能及其在植物基因工程中的应用。重点分析了NDPKs功能方面研究的最新进展,NDPKs不仅能够作为一种"看家酶",维持细... 为了给植物核苷二磷酸激酶NDPKs的进一步研究提供参考,总结了植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)的分类、亚细胞定位、功能及其在植物基因工程中的应用。重点分析了NDPKs功能方面研究的最新进展,NDPKs不仅能够作为一种"看家酶",维持细胞NDP和NTP代谢平衡,而且还是一组多功能蛋白,参与植物细胞的生长与分化、光敏色素A、紫外线-B、热击响应及氧化胁迫响应中的信号传导等多种生命活动过程,甚至具有核酸酶活性。最后指出植物NDPKs的研究方向,并展望了其在植物抗逆基因工程方面良好的应用前景。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 分类 亚细胞定位 功能 基因工程
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Nm23/NDPK的多种生物活性及其机制研究进展 被引量:4
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作者 熊盛 邢少璟 +1 位作者 钱垂文 王一飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期2066-2070,共5页
Human Nm23 family consists of eight gene products that have been implicated in cellular differentiation,development and apoptosis,as well as oncogenesis and tumor metastasis.The protein products of Nm23 are nucleoside... Human Nm23 family consists of eight gene products that have been implicated in cellular differentiation,development and apoptosis,as well as oncogenesis and tumor metastasis.The protein products of Nm23 are nucleoside diphosphate kinases(NDPKs),the key metabolic enzymes that catalyze the synthesis of nucleoside triphosphates(NTP) by transfer of the terminal phosphate between NDP and NTP.Recent investigations are focused on the extraordinary pleiotropy and its mechanism of Nm23/NDPK.In this article,we review the recent progress in studies of the mechanism of Nm23/NDPK as metastasis suppressors,and other bioactivities of NDPK out of phosphate transfer enzyme,as well as the character of NDPK’s quaternary structure and the relation between its structure and function.In addition to these,the potential applications of NDPK as an enhancer of antiviral drugs or Nm23 as a drug target were also described.Findings herein summarized provide new and intriguing suggestions for a more extensive understanding of the biological functions of the star molecule,Nm23/NDPK. 展开更多
关键词 基因 Nm23 核苷二磷酸激酶
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核苷二磷酸激酶A亚基(rhNDPK-A)对体内S_(180)、H_(22)、Lewis及H460肿瘤生长的影响 被引量:1
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作者 邢少璟 熊盛 +2 位作者 张美英 李久香 王一飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1740-1743,共4页
目的:观察rhNDPK-A对动物移植性肿瘤生长的抑制作用,为临床应用提供科学依据。方法:昆明种健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传代后8d的S180或H22瘤细胞5×106个,随机分为8组;C57BL/6健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传... 目的:观察rhNDPK-A对动物移植性肿瘤生长的抑制作用,为临床应用提供科学依据。方法:昆明种健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传代后8d的S180或H22瘤细胞5×106个,随机分为8组;C57BL/6健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传代后10d的Lewis瘤细胞2×105个,分组方法同上。给动物接种瘤细胞后24h开始给药。S180和H22模型用尾静脉注射,每日1次,连用8d;Lewis模型用腹腔注射,每日1次,连用10d。Balb/c/neu裸鼠38只,腋窝皮下接种H460瘤组织块1·5mm×1·5mm×1·5mm,当移植瘤体积生长至100mm×100mm×100mm分5组开始腹腔注射给药,每日1次共17次。每周两次测瘤径,计算相对瘤体积,同时称体重。于末次给药后48h处理各组动物,剖瘤称重,计算瘤重抑制率,并进行统计学处理。结果:rhNDPK-A单用,中剂量与高剂量对S180肿瘤生长较明显,抑制率>40%。3个剂量对H22肿瘤生长均具有不同程度的抑制作用,但rhNDPK-A单用,对Lewis肿瘤生长无明显的抑制作用。rhNDPK-A20mg/kg与DDP(0·5mg/kg)合用,对H22肿瘤生长抑制率明显提高。20mg/kgrhNDPK-A对人肺腺癌H460裸鼠移植性肿瘤生长抑制达35·9%。结论:rhNDPK-A对S180、H22、H460肿瘤的生长具有一定的抑制作用,对Lewis肿瘤生长无明显的抑制作用。rhNDPK-A高剂量与DDP合用,对H22肿瘤生长的抑制具有协同作用。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 顺铂 肉瘤180 肝肿瘤 肺肿瘤
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NM23/NDPK在肺癌中的表达及其与预后关系的研究 被引量:1
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作者 纪远中 聂卫 +4 位作者 张志尧 戈以椿 匡朴 李德华 王士贤 《天津医药》 CAS 北大核心 2004年第6期324-326,F003,共4页
目的 :探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中NM23/NDPK的表达及其在NSCLC发生、转移及预后中的意义。方法:采用S P免疫组化染色技术,检测69例NSCLCNM23/NDPK的表达情况。结果:肺癌原发灶NM23/NDPK阳性表达率与NSCLC淋巴结转移及临床分期有关,NM23/... 目的 :探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中NM23/NDPK的表达及其在NSCLC发生、转移及预后中的意义。方法:采用S P免疫组化染色技术,检测69例NSCLCNM23/NDPK的表达情况。结果:肺癌原发灶NM23/NDPK阳性表达率与NSCLC淋巴结转移及临床分期有关,NM23/NDPK的表达与患者的生存率有关,但与组织学分级及分化程度无关。NM23/NDPK阳性率在NSCLC伴淋巴结阳性组低于淋巴结阴性组(P<0.01)。随着临床分期的增高,阳性率逐渐降低(P<0.05)。NM23/NDPK阳性患者术后1,3年生存率明显高于阴性者(P<0.05)。结论:对NSCLC进行NM23/NDPK的检测,有助于预测NSCLC进展程度和淋巴结转移的诊断,以及评估NSCLC患者的预后。 展开更多
关键词 NM23/ndpk 肺癌 表达 预后 免疫组织化学
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转移力不同的肺癌克隆细胞中nm23-H1基因产物NDPK的表达 被引量:1
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作者 张彬 熊敏 +1 位作者 韩安家 梁英杰 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第6期448-450,共3页
【目的】比较转移抑制基因nm2 3 H1表达产物核苷酸二磷酸激酶 (nucleosidediphosphatekinase ,NDPK)在转移力不同的肺癌克隆株中的表达。【方法】通过单细胞克隆技术及裸鼠接种筛选出高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞株及高转移的... 【目的】比较转移抑制基因nm2 3 H1表达产物核苷酸二磷酸激酶 (nucleosidediphosphatekinase ,NDPK)在转移力不同的肺癌克隆株中的表达。【方法】通过单细胞克隆技术及裸鼠接种筛选出高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞株及高转移的人肺腺癌克隆细胞株 ,用LSAB免疫组化法检测nm2 3 H1基因产物NDPK的表达。【结果】NDPK在高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞移植瘤及转移瘤中均有表达 ,高转移株的阳性细胞数目及强度均高于低转移株和裸鼠正常肺组织 ;NDPK在高转移的肺腺癌克隆细胞移植瘤中有表达 ,表达强度低于裸鼠正常肺组织。【结论】nm2 3 H1基因对肺巨细胞癌并不具转移抑制基因的功能 ,而可能促进肿瘤的发生、发展和转移。 展开更多
关键词 肺癌 肿瘤转移 核苷酸二磷酸激酶 NM23-H1
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NDPK/nm23 基因在原发性胆囊癌中的表达及临床意义
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作者 钟碧波 钟芳 寇继光 《临床和实验医学杂志》 2022年第10期1038-1042,共5页
目的探究核苷二磷酸激酶(NDPK)/nm23基因在原发性胆囊癌(PGBC)中的表达情况及临床意义。方法回顾性选取2016年2月至2021年5月在武汉科技大学附属孝感市中心医院接受治疗的PGBC患者124例,计为PGBC组;同时选取60例胆囊腺瘤性息肉患者进行... 目的探究核苷二磷酸激酶(NDPK)/nm23基因在原发性胆囊癌(PGBC)中的表达情况及临床意义。方法回顾性选取2016年2月至2021年5月在武汉科技大学附属孝感市中心医院接受治疗的PGBC患者124例,计为PGBC组;同时选取60例胆囊腺瘤性息肉患者进行对比,计为胆囊腺瘤性息肉组。检测各组NDPK/nm23基因表达情况以及基因表达意义。结果PGBC组织中的NDPK/nm23基因表达阳性率为31.45%,低于胆囊腺瘤性组织(50.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、年龄、临床症状(黄疸、胆绞痛)以及血清胆红素增高情况患者的NDPK/nm23基因表达情况差异无统计学意义(P>0.05),存在PGBC家族病史、由于胆囊息肉样变导致PGBC、存在右上腹痛患者的NDPK/nm23基因表达阳性率较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。病情发展相关指标分析显示,Nevin分期越高或分化程度越低,患者NDPK/nm23基因表达阳性率越低,同时存在淋巴转移的PGBC患者基因表达阳性率较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,PGBC家族病史、Nevin分期≥Ⅲ期、高分化以及淋巴转移与NDPK/nm23基因表达存在显著联系(OR=0.702,95%CI:0.515-0.957;OR=0.448,95%CI:0.375-0.536;OR=0.327,95%CI:0.267-0.400;OR=0.393,95%CI:0.235-0.657)。结论原发性患者的NDPK/nm23基因表达情况影响其病情发展的影响,临床中可根据机体NDPK/nm23基因检测以协助评估PGBC患者的疾病发展阶段,制定更完善的救治计划,改善患者预后。 展开更多
关键词 原发性胆囊癌 核苷二磷酸激酶/nm23基因 病情进展 临床表现
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NDPK-A C4/109/145S突变体降低磷酸转移酶活性但增加DNase活性
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作者 高雪 张志红 +3 位作者 吕芬 钱垂文 王一飞 熊盛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期260-266,共7页
核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)有广泛的生物学活性,在肿瘤转移和调控中起重要作用.单独抑制NDPK-A中任何1个Cys所形成的二硫键,不会降低NDPK-A的磷酸转移酶活性和DNase活性.本实验通过构建C4/109/145S突变... 核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)有广泛的生物学活性,在肿瘤转移和调控中起重要作用.单独抑制NDPK-A中任何1个Cys所形成的二硫键,不会降低NDPK-A的磷酸转移酶活性和DNase活性.本实验通过构建C4/109/145S突变体并研究其生物学效应,为NDPK-A结构与功能的研究提供参考.用定点突变法将NDPK-A的4位、109位和145位Cys突变为Ser,构建pBV220-NDPK-A C4/109/145S和pEGFP-NDPK-A C4/109/145S两种重组质粒.在大肠杆菌中高效表达NDPK-A C4/109/145S突变体,纯化后可获得均一的重组NDPK-A C4/109/145S突变体蛋白.HPLC法和DNA消化法测定发现,C4/109/145S突变体磷酸转移酶活性低于野生型NDPK-A,而DNase活性高于野生型NDPK-A.以A549细胞作为模式细胞的流式细胞仪周期检测表明,C4/109/145S突变体与野生型NDPK-A一致,均可将细胞周期延滞在S期和G2/M期.这些结果证实,NDPK-A结构异构与其磷酸转移酶活性密切相关,其酶活性至少需要1个Cys残基存在,NDPK-A结构中的二硫键也可能是其DNase活性的负调控机制之一,胞内NDPK-A的氧化还原异构可能对细胞周期无显著影响. 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶A 定点突变 磷酸转移酶活性 DNA酶活性 细胞周期
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犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的原核表达及其免疫荧光定位
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作者 张浩杰 刘梅 +6 位作者 李春燕 何冉 兰景超 罗娌 古小彬 谢跃 杨光友 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第9期1453-1460,共8页
对犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的基本特征进行探究,并评估其诊断价值,旨在为犬恶丝虫病的诊断提供依据。本研究原核表达了Di-NDPK,通过生物信息学、免疫印迹和免疫荧光组化分析了该蛋白的基本特征,通过检测犬恶丝虫阳性血清评估了... 对犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的基本特征进行探究,并评估其诊断价值,旨在为犬恶丝虫病的诊断提供依据。本研究原核表达了Di-NDPK,通过生物信息学、免疫印迹和免疫荧光组化分析了该蛋白的基本特征,通过检测犬恶丝虫阳性血清评估了rDi-NDPK的诊断价值。免疫印迹显示,Di-NDPK具有良好的反应原性,免疫荧光组化显示,Di-NDPK在犬恶丝虫的侧索及肠上皮细胞和肠腔中分布。间接ELISA显示,该方法的敏感性为66.7%(16/24),特异性为38.9%(14/36),其中与犬细粒棘球蚴病阳性血清、犬钩虫病阳性血清以及犬弓首蛔虫病阳性血清发生交叉反应。Di-NDPK是一个分泌蛋白,但不适合作为犬恶丝虫病的诊断候选抗原。 展开更多
关键词 犬恶丝虫 ndpk基因 克隆 原核表达 免疫荧光定位
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核苷二磷酸激酶A亚基的纯化、鉴定及其对顺铂抗癌作用的增强 被引量:5
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作者 王一飞 邢少璟 +4 位作者 张美英 钱垂文 林锋 罗勇 李久香 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期40-43,共4页
目的 了解核苷二磷酸激酶A亚基 (NDPK A)能否提高顺铂的抗癌效果。方法 利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western印迹杂交来监测和鉴定目标蛋白NDPK A ,利用离子交换、亲和层析结合高效液相色谱纯化分离目标蛋白 ... 目的 了解核苷二磷酸激酶A亚基 (NDPK A)能否提高顺铂的抗癌效果。方法 利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western印迹杂交来监测和鉴定目标蛋白NDPK A ,利用离子交换、亲和层析结合高效液相色谱纯化分离目标蛋白 ;MTT比色法测定药物对细胞生长抑制率的影响。结果 获得NDPK A单体蛋白 ,酶比活为 8mmol·min- 1·g- 1蛋白质 ;细胞生长抑制率显示 ,NDPK A单独处理细胞时未见明显的细胞毒性 ,但与顺铂联合处理却能大大加强后者对鼠肺腺癌细胞LA795和人喉癌细胞Hep 2的细胞毒性。结论 NDPK A与顺铂联用能增强顺铂对体外培养的鼠肺腺癌细胞LA795和人喉癌细胞Hep 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶类 顺铂 LA795 HEP-2 化学治疗
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皮肤恶性黑色素瘤患者瘤组织中MMP-9、Nm23-H1和MTA1蛋白表达水平及临床意义 被引量:13
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作者 彭科 叶俊儒 +1 位作者 陆茂 宋海星 《解放军医药杂志》 CAS 2017年第7期29-32,共4页
目的探讨皮肤恶性黑色素瘤(CMM)组织中基质金属蛋白酶(MMP)-9、Nm23-H1和肿瘤转移相关基因蛋白1(MTA-1)表达水平及其临床意义。方法收集2013年10月—2015年12月收治的CMM 64例存档的蜡块标本作为CMM组,选取同期外科切取的28例皮肤交界... 目的探讨皮肤恶性黑色素瘤(CMM)组织中基质金属蛋白酶(MMP)-9、Nm23-H1和肿瘤转移相关基因蛋白1(MTA-1)表达水平及其临床意义。方法收集2013年10月—2015年12月收治的CMM 64例存档的蜡块标本作为CMM组,选取同期外科切取的28例皮肤交界痣标本及18例正常皮肤分别作为皮肤交界痣组与正常对照组。检测3组MMP-9、Nm23-H1和MTA-1蛋白的表达水平。结果 MMP-9、MTA-1蛋白在CMM组中阳性表达率最高,在皮肤交界痣组及正常对照组中阳性表达率逐渐降低(P<0.05);CMM组Nm23-H1蛋白阳性率低于正常对照组及皮肤交界痣组(P<0.05);MMP-9、MTA-1蛋白在CMM组中阳性表达率随Clark分级的增高逐渐升高,有淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者(P<0.01);Nm23-H1在CMM组中阳性表达率随Clark分级的增高逐渐降低,有淋巴结转移者阳性表达率低于无淋巴结转移者(P<0.01)。结论 MMP-9、Nm23-H1和MTA1的表达水平在一定程度反映了CMM的病情,联合检测MMP-9、Nm23-H1和MTA1表达水平可为临床评估患者病情提供准确资料。 展开更多
关键词 皮肤附件 黑色素瘤 基质金属蛋白酶9 NM23核苷二磷酸激酶类 肿瘤转移相关基因蛋白1
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大肠癌中Survivin和nm23-H1的表达及其联合检测的临床意义 被引量:7
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作者 刘伟 黄超 邢伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第19期2074-2076,共3页
目的观察Survivin与nm23-H1蛋白在大肠癌及其癌旁组织中的表达情况,探讨其联合检测与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化S-P法研究66例大肠癌和15例癌旁组织的Survivin和nm23-H1的表达情况,分析其与临床病理特征的关系。结果在大肠癌... 目的观察Survivin与nm23-H1蛋白在大肠癌及其癌旁组织中的表达情况,探讨其联合检测与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化S-P法研究66例大肠癌和15例癌旁组织的Survivin和nm23-H1的表达情况,分析其与临床病理特征的关系。结果在大肠癌及其癌旁组织中,Survivin阳性率分别为75.7%、62.1%,有显著性差异(χ2=13.254,P=0.000);nm23-H1的阳性率分别为26.7%、93.3%,差异有统计学意义(χ2=4.125,P=0.042)。Survivin的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、肝转移、Dukes分期有关(P<0.05)。nm23-H1的表达与淋巴结转移、肝转移、Dukes分期有关(P<0.01)。Survivin阳性率与淋巴结转移呈正相关(r=0.247,P=0.046),nm23-H1阳性率与淋巴结转移呈负相关(r=-0.359,P=0.003)。Survivin与nm23-H1蛋白表达呈负相关(r=-0.296,P=0.016)。结论 Survivin蛋白的抑制凋亡作用和nm23-H1蛋白的抑制转移作用可能在大肠癌的发生、发展过程中起重要作用,联合检测是判断大肠癌患者淋巴结转移倾向及预后的重要指标。 展开更多
关键词 SURVIVIN NM23核苷二磷酸激酶类 结直肠肿瘤 淋巴转移
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核苷二磷酸激酶A的异构及其分子机制 被引量:3
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作者 熊盛 钱垂文 +6 位作者 王一飞 黄立 李久香 严玖凤 王小宁 张晓伟 毕志刚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期815-821,共7页
对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液... 对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液中的表观分子量;飞行质谱分析异构体的质量肽谱.结果发现,rhNDPKA在非还原SDSPAGE上表现为4条带,对应于NDPKA的氧化型、还原型、氧化型二聚体和还原型二聚体,其分子量分别为18.1kD、21.3kD、35.2kD和38.3kD.RPHPLC发现,还原型rhNDPKA和氧化型rhNDPKA疏水性有差异.新鲜制备的rhNDPKA在纯水溶液中,经空气氧化后,逐渐由还原型向氧化型过渡,而还原剂或生理盐水可使rhNDPKA稳定于还原型或氧化型.酶活测定结果表明,还原型rhNDPKA比活性为1965±166Umg,氧化型rhNDPKA比活性为974±53Umg.多角度激光散射检测发现,还原型rhNDPKA在溶液中仍可形成六聚体.质量肽谱结果证明,在氧化型rhNDPKA中,C4和C145位巯基形成二硫键,而C109位巯基游离存在.根据本文所确定的NDPKA单体中的二硫键位置,推导出rhNDPKA单体异构体和二聚体异构体的变构原理,这为进一步研究NDPKA的多能性调节机制打下了良好基础. 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶A 异构 多角度激光散射 飞行质谱 二硫键 分子机制
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尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸激酶的克隆、表达及纯化 被引量:2
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作者 杨小猛 王俊轶 +2 位作者 陈涛 刘志刚 杨平常 《江西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第5期485-488,共4页
根据GenBank中NDP kinase的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成NDP kinase基因,构建原核表达载体pET28a-NDP kinase并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用异丙基-β... 根据GenBank中NDP kinase的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成NDP kinase基因,构建原核表达载体pET28a-NDP kinase并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,重组产物采用镍离子金属螯合亲和层析柱纯化.经密码子改造和二级结构优化后NDP kinase基因长度为490 bp,其编码蛋白理论分子量为21.5 kDa,重组表达载体经酶切鉴定与理论推测结果相符,在大肠埃希菌BL21(DE3)中该基因经IPTG诱导可高效表达,纯化后的重组蛋白分子量约为21.5 kDa,其单一蛋白纯度达95%以上.本研究成功构建了尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸酶(NDP kinase)基因的pET28a原核重组质粒,为进一步研究NDP kinase在尘螨疫苗免疫治疗中的作用机理提供了基础. 展开更多
关键词 尘螨 肠道微生物 蛋白核苷二磷酸激酶
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重组人抑癌相关蛋白核苷二磷酸激酶A的原核表达 被引量:2
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作者 冉延超 王一飞 +4 位作者 熊盛 张美英 黄文韬 罗林波 刘秋英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期954-959,共6页
目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标... 目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE4 0中 ;梯度变化表达条件获得产物高表达 ;镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白 ;Westernblot鉴定产物的免疫原性 ;HPLC测定产物的激酶活性 ;鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性。结果 :pQE - 4 0中亚克隆的nm2 3-H1序列无误 ;目的蛋白最高表达量可达 4 9 6 % ;纯化的表达产物能与天然NDPK -A的多克隆抗体特异结合 ;酶比活为 4 72U/mg ;具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性。结论 :表达质粒pQE -nm2 3H1能高效表达重组人NDPK -A ,纯化工艺简便 ,产物活性与天然NDPK -A无异。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 肿瘤抑制蛋白质类
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50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌 被引量:1
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作者 熊盛 钱垂文 +3 位作者 黄立 刘秋英 张美英 王一飞 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1-6,共6页
中试规模发酵重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)工程菌,并对表达产物进行纯化。摇瓶培养一级种子至合适密度,以10%比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9.6~10.5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养,所得菌体... 中试规模发酵重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)工程菌,并对表达产物进行纯化。摇瓶培养一级种子至合适密度,以10%比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9.6~10.5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养,所得菌体裂解后,经离子交换层析和亲和层析两步纯化得重组蛋白制品。结果表明,50L培养液经过10h培养后,湿菌收量为156%/批,NDPK—A表达量为23.8%。另外,补料方式对发酵密度有明显影响。与单纯补加碳源相比,同时补加碳源和氮源可以显著提高菌体产量,但对目的蛋白表达量的提高不明显。在较优条件下,菌体产量为(2220.00±169.71)g/批,蛋白表达量为(22.00±0.42)%,纯化后重组蛋白得率为510mg/L。产物可溶、密度适中、工艺简便的中试发酵条件的建立为高得率、大规模制备重组rhNDPK—A奠定了基础。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 中试 发酵 纯化
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NM23基因多态性与胃癌遗传易感关系的研究 被引量:3
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作者 郑雄伟 林贤东 +3 位作者 力超 师怡 陈刚 陈德东 《福建医科大学学报》 2011年第3期159-163,共5页
目的探讨中国福建地区汉族人群NM23基因NM23-1465T〉C和NM23-873C〉T单核苷酸多态与胃癌遗传易感性的关系。方法选取福建地区经组织学确诊的胃癌患者274例及年龄和性别频数匹配的对照健康体检人群283例,采用基质辅助激光解吸电离飞行时... 目的探讨中国福建地区汉族人群NM23基因NM23-1465T〉C和NM23-873C〉T单核苷酸多态与胃癌遗传易感性的关系。方法选取福建地区经组织学确诊的胃癌患者274例及年龄和性别频数匹配的对照健康体检人群283例,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法进行NM23-1465T〉C和NM23-873C〉T多态性检测。应用非条件Logistic分析方法计算比值比(OR)及其95%可信区间(CI),以评估不同基因型与胃癌发病风险、病理特征的关系;运用SHEsis软件进行连锁不平衡分析及单体型构建。结果 NM23-1465T〉C位点携带纯合子CC基因型的患者发生淋巴结转移的风险是携带TT+CT基因型患者的2.5倍(OR=2.5,95%CI:0.08-2.1,P=0.029)。NM23-873C〉T的基因型分布与肿物大小、组织分化、组织浸润及淋巴结转移均未见相关性。NM23单体型与胃癌的发生无显著的相关性。结论 NM23基因多态性与胃癌的预后密切相关,NM23-1465T〉C的CC基因型有可能成为胃癌不良预后的分子指标。 展开更多
关键词 胃肿瘤 核苷二磷酸激酶 多态性 单核苷酸 单元型 疾病遗传易感性 福建
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nm23蛋白在非小细胞肺癌患者肺癌组织和淋巴结表达的临床意义 被引量:4
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作者 王志新 高广正 +1 位作者 赵晓晏 张楚毅 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 1997年第1期15-17,共3页
目的探讨nm23基因与肺癌转移的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)快速免疫组织化学法检测49例非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和49份配对淋巴结标本nm23基因产物-核苷二磷酸激酶(NDPK/... 目的探讨nm23基因与肺癌转移的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)快速免疫组织化学法检测49例非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和49份配对淋巴结标本nm23基因产物-核苷二磷酸激酶(NDPK/nm23)。结果NDPK/nm23在NSCLC的肺癌组织表达为57.14%(28/49),其中鳞癌为60.87%(14/23),腺癌为53.85%(14/26)。26例伴淋巴结转移的肺癌标本中阳性16例(61.54%)。NDPK/nm23表达与淋巴结转移没有负相关,在淋巴结转移灶有较高表达(53.85%,14/26)。结论nm23基因在肺癌的发生、转移中可能起着不同的作用。 展开更多
关键词 肺肿瘤 核苷二磷酸激酶 免疫组织化学法
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