两种方法建立肝癌皮下瘤块模型的比较

目的:采用注射Walker-256肿瘤细胞的方法建立Wistar鼠和BALB/c裸鼠皮下瘤块模型。方法:抽取含Walker-256肿瘤细胞的BALB/c裸鼠腹水,进行离心洗涤,将洗涤液分别接种于Wistar鼠及BALB/c裸鼠腹股沟区皮下形成皮下瘤块。观察并比较两种不同实验鼠所建立的皮下瘤块模型成瘤率及瘤体生长速度。实验结束后,采用免疫组织化学法检测皮下瘤的微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:两种方法成瘤率均为100%,但是裸鼠皮下瘤块生长速度快于Wistar鼠皮下瘤;裸鼠组的MVD与VEGF表达均高于Wistar组,差异有统计学意义(t=8.52、5.13,P<0.05)。结论:用Wistar鼠或裸鼠作为肝癌皮下瘤块模型均可以满足临床试验研究的需要,但由于裸鼠为免疫缺陷动物,瘤块生长速度会明显快于Wistar鼠,且肿瘤血管生成指标更高,故选择肝癌瘤块生长模型时,裸鼠为最佳选择。

裸大鼠人乳腺癌皮下移植瘤模型的建立和评价

目的采用细胞悬液种植法和组织块移植法建立裸大鼠人乳腺癌皮下移植瘤模型并观察其生物学特性。方法体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,注射于10只同种雌性裸大鼠皮下,2周后处死2只成瘤裸大鼠,将皮下瘤修剪成2 mm3的组织块移植入10只同种雌性裸大鼠皮下。4周后将所有裸大鼠处死,取出皮下瘤。通过巨检、镜检、免疫组化等观察肿瘤的生物学特性。结果采用细胞悬液种植法的10只雌性裸大鼠皮下均成瘤,采用组织块移植法的10只雌性裸大鼠中8只皮下成瘤。两种方法的成瘤速度基本相似。HE染色和免疫组化染色证实两种方法建立的裸大鼠人乳腺癌模型的特性基本一致。结论采用细胞悬液种植法和组织块移植法均能成功建立裸大鼠人乳腺癌模型,为乳腺癌的体内实验和新型治疗等研究提供了较理想的动物模型。

多种分离纯化大鼠胰岛细胞的实验方法比较

【目的】采用不同的分离或消化方法 ,探讨如何提高大鼠胰岛细胞分离纯化后的收获量和质量。【方法】将 2 5只供体SD雄性大鼠依胰腺分离或消化的方法不同随机地分为 5组 :①A组 :胆总管灌注胶原酶P ;②B组 :胆总管灌注Hanks液 ;③C组 :胆总管不灌注液体 ;A、B、C 3组胰腺直接分次消化 ;④D组 :胆总管不灌注 ,胰腺剪碎后分次消化 ;⑤对照组 :胆总管灌注胶原酶P ,胰腺直接单次消化。将分离的胰岛沉淀物用Ficoll 4 0 0纯化并培养 ,再把胰岛细胞移植于糖尿病裸鼠受体腹腔内。【结果】纯化后的胰岛细胞在收获量上A和B组明显多于对照组或C组 ,而D组最低 ;A、B和D 3组的纯度均高于对照组或C组 ;在胰岛成活率方面 ,A、B、C 3组均高于对照组或D组。移植于糖尿病裸鼠受体内的大鼠胰岛细胞均可逆转高血糖状态。【结论】经胆总管灌注胶原酶后的大鼠胰腺用分次消化的方法可提高胰岛细胞的收获量、纯度和活性。

比较两种免疫缺陷动物人肝癌模型的肿瘤生物学特性

为探讨裸小鼠和裸大鼠(rnu/rnu)两种免疫缺陷动物人肝癌皮下移植与原位移植后肿瘤生长和转移等生物学特性的差异,将Huh-7细胞株接种至裸小鼠皮下成瘤后采用组织学完整的组织块移植于裸小鼠和裸大鼠皮下和肝脏,建立皮下和原位移植模型,观察所建立模型的皮下和原位成瘤率、移植瘤生长、侵袭和转移情况,同时进行了病理组织学、超微结构、细胞增殖周期和异倍体的观察。裸大鼠皮下移植瘤模型肿瘤的生长速度远远大于裸小鼠。原位移植瘤模型裸大鼠成瘤率高达95.0%,其肺转移率形成率为50.0%,均高于裸小鼠。此实验证明应用裸大鼠较裸小鼠更适用于建立肝癌的皮下和原位移植模型,为探讨肝癌转移的生物学机制和抗转移治疗提供了理想的动物模型。

肝硬化大鼠肝部分切除后IL-6/STAT3信号通路的变化

目的了解白细胞介素-6(IL-6)/信号转导及转录活化因子3(STAT3)信号通路在肝硬化大鼠肝部分切除后残肝再生障碍中的作用。方法采用皮下注射四氯化碳(CCl4)法建立肝硬化大鼠模型。正常大鼠为对照组。对照组及肝硬化组均行70%肝切除后,于不同的时间点收集残肝组织及血液标本,检测血清IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)及活性STAT3蛋白表达。结果肝切除后24 h,肝硬化组大鼠有丝分裂细胞数及PCNA阳性细胞数均明显小于对照组。肝切除后的前12 h,肝硬化组大鼠IL-6表达水平明显低于对照组。术后2 h,对照组残肝组织的活性STAT3蛋白远远高于肝硬化组。结论肝硬化肝切除术后早期IL-6的低表达导致STAT3蛋白活化不足是肝硬化大鼠肝部分切除术后残肝再生障碍的重要原因之一。

两种方法建立人胃癌裸鼠移植瘤模型的比较

目的采用两种不同方法建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法人胃癌细胞悬液直接注射法:将处于对数生长期的人胃癌细胞悬液接种于裸鼠皮下;胃癌裸鼠瘤转瘤法:将胃癌细胞悬液接种入裸鼠,待肿瘤生长直径在8 mm左右时,处死裸鼠并取其肿瘤组织边缘新鲜的组织,接种于裸鼠皮下,形成皮下移植瘤。观察并比较两种方法所建立的模型肿瘤移植成功率及瘤体生长速度,实验结束后MSP法检测移植瘤组织中Reprimo基因的甲基化水平并采用免疫组织化学法检测移植瘤的Ki-67和CD31分子表达。结果细胞悬液直接注射组的瘤体成瘤速度较瘤转瘤组慢(P<0.05);瘤转瘤组的Reprimo基因甲基化水平及Ki-67和CD31的表达均高于细胞悬液直接注射组(P<0.05)。结论胃癌裸鼠皮下瘤转瘤法的瘤体生长状况优于胃癌细胞悬液直接注射法。

黄芪注射液对裸鼠分化型甲状腺癌微淋巴管密度及组织中HIF-1α表达的影响

目的:研究分析黄芪注射液对分化型甲状腺癌微淋巴管密度及组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法:90只裸鼠分为正常对照组、模型组和黄芪注射液组,分组给予相应处理,7天后应用免疫组织化学方法检测3组分化型甲状腺癌组织中微淋巴管密度(MLVD)和HIF-1α的表达情况并分析3组之间的相关性。结果:模型组与黄芪组裸鼠甲状腺癌组织中MLVD的表达水平与HIF-1α表达阳性率均比正常对照组明显增加(P<0.05),与模型组相比,黄芪组分化型甲状腺癌中MLVD的表达水平与HIF-1α表达阳性率明显减少,两组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:黄芪注射液对分化型甲状腺癌淋巴管的生成以及肿瘤细胞通过淋巴管道的转移可能有一定的抑制作用。

吗啡联合厄洛替尼对肺腺癌裸鼠成瘤的抑制作用及机制

目的构建人HCC827肺腺癌细胞裸鼠成瘤模型,并探讨吗啡联合厄洛替尼对肿瘤的抑制作用及其机制。方法裸鼠前腋皮下注射HCC827细胞悬液,成瘤后随机数字表法分为对照组、吗啡组、厄洛替尼组、吗啡联合厄洛替尼组(联合组),各6只;连续观察3周测量并计算各组大鼠肿瘤体积,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot方法检测各组肿瘤组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。结果与对照组比较,吗啡组肿瘤体积、肿瘤细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达差异均无统计学意义(P> 0. 05),厄洛替尼组及联合组肿瘤体积明显缩小(P=0.000),细胞凋亡率增加(t/P=20.455/<0.001,t/P=24.954/<0.001),凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调、Bax和Caspase-3表达增加,差异均具有统计学意义(t=101.555、161.308、96. 757,P均=0. 000);与厄洛替尼组比较,联合组在肿瘤体积、肿瘤细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达差异比较均无统计学意义(P>0. 05)。结论吗啡与厄洛替尼联合应用时,不影响厄洛替尼诱导的凋亡相关性抗肿瘤效应。

神经生长因子和表皮生长因子在衰老大鼠下颌下腺的表达

目的观察D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺神经生长因子(NGF)、表皮生长因子(EGF)表达的改变。方法选取18只SD雌性大鼠,随机分成正常组、模型组,模型组大鼠每天腹腔注射D-半乳糖,连续60 d,制造亚急性衰老大鼠模型。用SP免疫组化法检测下颌下腺NGF、EGF的阳性表达。结果 NGF、EGF阳性反应颗粒为浅棕色至深褐色,主要分布于颗粒曲管细胞及纹状管细胞顶部胞质中,腺泡细胞为阴性。正常组NGF、EGF表达明显高于模型组(P<0.01)。结论 D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺NGF、EGF表达较正常大鼠明显减少,说明NGF、EGF表达伴随衰老明显降低,为延缓组织退行性改变、预防衰老性涎腺疾病研究提供了一定的实验资料。

肠复康诱导人大肠癌HT29裸小鼠移植瘤细胞分化的研究

目的 探讨肠复康诱导人大肠癌HT2 9裸小鼠移植瘤细胞分化的作用。方法 建立人大肠癌HT2 9裸小鼠皮下移植瘤模型 ,用电子天平测量移植瘤的质量 ,苏木精—伊红染色观察瘤组织细胞的形态结构 ,结合图像分析系统半定量检测瘤细胞核分裂数及其形态计量学改变 ,并使用逐步引入剔出模型进行多元线性回归分析。结果 与模型组比 ,肠复康组和西药组均使移植瘤瘤体质量明显减轻 (P <0 .0 5或 0 .0 0 1) ,瘤组织细胞异型性降低 ,核分裂数、核仁面积 /核面积明显减少 (P <0 .0 0 1) ,且肠复康组的作用比西药组更为明显 (P <0 .0 0 1) ;同时 ,肠复康组瘤细胞核平均灰度明显降低 (P <0 .0 0 1) ,细胞核形状因子增高 (P <0 .0 5 ) ,西药组以上改变不明显 (P >0 .0 5 )。回归分析结果 ,移植瘤质量与瘤细胞核平均灰度和核分裂数呈明显正相关。结论 肠复康能抑制人大肠癌HT2 9裸小鼠移植瘤的增殖 ,其机制之一可能是逆转瘤细胞的异型性 ,诱导瘤细胞的重新分化。

肺癌A549裸大鼠移植瘤模型的建立及应用

目的探讨裸大鼠肺癌A549高效移植瘤模型的建立方法,为进行肿瘤的体内相关介入研究提供实验基础。方法肺癌A549细胞接种于裸小鼠皮下,出瘤后制备单细胞悬液和组织块分别接种和塞入裸大鼠耳后皮下,观察初次培养细胞成瘤组、二次单细胞悬液成瘤组和二次组织块成瘤组的出瘤率和移植瘤的生长情况,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果 3组中二次组织块成瘤组的出瘤率显著高于另外两组,细胞增殖快,移植瘤的变异小;细胞周期分析显示二次组织块成瘤组的细胞S和G2/M期比例增高,细胞增殖指数显著高于另外两组。结论二次组织块成瘤可显著提高A549的成瘤率,是一种高效的裸大鼠移植瘤模型建立方法。

纯系LEW大鼠及裸小鼠膀胱灌注给药方式的探讨

目的探讨纯系LEW大鼠及裸小鼠膀胱灌注给药方法。方法显微镜下解剖雌性LEW大鼠及裸小鼠尿道并根据解剖特征改造套管针。通过插入尿道的套管针膀胱灌注墨水,同时观察插管及膀胱充盈和染色情况。持续观察小鼠和大鼠生存状况及尿道损伤情况。结果显微镜下可见雌性LEW大鼠及裸小鼠尿道与人存在明显差异。经尿道插管成功率高(100%),动物生活状况没有明显受到插管灌注影响。结论裸鼠膀胱灌注给药治疗是一种成功率高而可行的给药手段,动物膀胱灌注化疗模型可能为研究膀胱肿瘤治疗提供更为有效的工具。

白藜芦醇抑制胰腺癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的:观察白藜芦醇(Res)对人胰腺癌Miapaca-2(PC-2)细胞构建的胰腺癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型并随机分组,分别给予3种不同浓度的白藜芦醇干预后处死胰腺癌裸鼠,取出移植瘤,观察其体积、重量的变化情况;HE染色法观察移植瘤组织病理学变化;采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Western bolt法测定移植瘤组织Bcl-2、Bax、p53蛋白和mRNA表达水平。结果:Res组移植瘤的体积、重量明显低于阴性对照组,随着浓度增加变化越明显(P<0.01);3个浓度组白藜芦醇作用于胰腺癌裸鼠后,移植瘤组织中Bcl-2、Bax、p53蛋白和mRNA表达水平较阴性对照组差异具有统计学意义(P<0.01),且随着浓度增加表达水平的差异越明显。结论:白藜芦醇可能通过调节Bcl-2、Bax、p53的表达来抑制胰腺癌移植瘤的生长。

裸大鼠人高转移肝癌皮下和原位移植模型的建立

目的探讨建立裸大鼠人高转移肝癌的皮下和原位移植模型的可行性，并观察其生物学特性。方法体外培养人高转移肝癌株HCCLM3接种于裸大鼠皮下，建立皮下移植模型，然后用此移植瘤组织再接种于裸大鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型。皮下移植的裸大鼠每周称重、测量瘤径，原位移植的裸大鼠每周称重，两组裸大鼠分别于移植8周后处死，通过巨检、镜检等观察移植肿瘤的生物学特性。结果裸大鼠皮下均成瘤，未见肺转移，裸大鼠原位移植成瘤率90％，肺转移70％，腹水发生率50％，自发消退率0％。结论裸大鼠人高转移肝癌HCCLM3移植瘤模型成功率高，原位移植有高转移，无自发消退现象，可作为研究肝癌转移和药物筛选的理想模型。

丁酸钠抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的研究

目的:观察丁酸钠对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其作用机制。方法:建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,两治疗组分别采用不同方案以不同剂量丁酸钠进行治疗,两对照组同法注射同体积磷酸盐缓冲液(PBS)。治疗结束,取裸鼠心、肝、肾、肠等脏器做组织学观察,取肿瘤组织进行光学显微镜、电子显微镜观察,并用末端脱氧核苷酰转移酶穴TDT雪介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)进行分析,计算凋亡率。结果:各治疗组肿瘤体积明显缩小,细胞凋亡率显著增高,(P<0.01)。结论:丁酸钠可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制裸鼠卵巢癌移植瘤的生长,用药越早效果越显著。

miR-487a增加MCF-7/MX荷瘤鼠对米托蒽醌敏感性机制探讨

目的:研究miR-487a调控米托蒽醌(MX)耐药的乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX荷瘤鼠对MX敏感性的作用与机制。方法:通过裸鼠腋窝皮下接种MCF-7/MX细胞构建荷瘤鼠模型;real-time RT-PCR、Western blot方法检测荷瘤鼠瘤体内注射miR-487aagmir后对移植瘤内miR-487a及BCRP表达的影响;并通过对荷瘤鼠尾静脉注射MX后移植瘤体积和瘤重的检测,研究miR-487a对MCF-7/MX荷瘤鼠药物敏感性的影响。结果:在MCF-7/MX细胞荷瘤鼠瘤体内注射miR-487aagmir诱导miR-487a表达增高约7倍;降低了移植瘤内的BCRP的mRNA和蛋白表达约30%;且显著降低了MX处理的MCF-7/MX细胞荷瘤鼠移植瘤的重量,即增加了对MX的敏感性。结论:miR-487a抑制了MCF-7/MX细胞荷瘤鼠的BCRP表达,增加其对米托蒽醌的敏感性。

裸大鼠人肝癌原位模型的建立及其生物学特性的初步观察

目的 探讨人肝癌原位移植后肿瘤在裸大鼠（rnu/rnu）生长和转移等生物学特性.方法 Huh-7细胞株接种于裸小鼠皮下成瘤组织块移植于裸大鼠皮下成瘤,之后将裸大鼠皮下肿瘤移植至其肝脏以建立原位移植模型,观察所建立模型原位成瘤率、移植瘤生长、侵袭和转移情况,同时进行病理组织学、超微结构、细胞增殖周期和异倍体的观察.结果 原位移植瘤模型裸大鼠成瘤率高达90.0%,其肺转移率形成率为50.0%.结论 应用裸大鼠建立肝癌原位移植模型,为探讨肝癌转移的生物学机制和抗转移治疗提供了理想的实验动物模型.

高乌甲素凝胶透皮吸收实验皮肤的选择研究

目的:选择适当的动物皮肤,建立适合于高乌甲素凝胶的透皮吸收研究方法。方法:高数液相色谱HPLC法测定高乌甲素的含量;采用改良Franz扩散池进行透皮吸收实验,以累积渗透量对取样时间进行回归,计算透皮速率常数;从裸鼠、小鼠、大鼠、家兔、乳猪皮肤及人皮中筛选实验皮肤。结果:裸鼠皮肤的透皮吸收速率常数与人皮较为接近,且重复性较好。结论:通过对高乌甲素透皮吸收实验皮肤的选择,为研究其TDD制剂提供了方法学依据。

塞来昔布抑制裸鼠乳腺癌骨转移实验研究

目的探讨塞来昔布(西乐葆)作为血管抑制剂对乳腺癌骨转移的形成及生长的影响。方法建立裸鼠乳腺癌骨转移模型。将12只乳腺癌骨转移裸鼠随机分成两组,对照组隔日腹腔注射生理盐水;西乐葆组隔日腹腔注射西乐葆30mg/kg;30天后处死。检测血清碱性磷酸酶,采用免疫组化和图像分析系统测定血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤微血管密度(MVD),光镜下观察各组肿瘤组织,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡。结果西乐葆组肿瘤生长明显受到抑制,肿瘤组织中的VEGF和MVD与对照组比较显著降低,抑瘤率为50.5%,凋亡指数上升,血清碱性磷酸酶下降。结论西乐葆能明显抑制裸鼠乳腺癌骨转移瘤的形成及新生血管形成。

裸大鼠人子宫内膜癌模型的建立和评价

目的:建立裸大鼠人子宫内膜癌皮下瘤和宫腔原位移植瘤模型,初步观察其生物学特性。方法:体外培养子宫内膜癌细胞株Ishikawa,注射于8只雌性裸大鼠皮下,2周后处死2只成瘤裸大鼠,将皮下瘤修剪成2mm3的组织块移植入10只同种雌性裸大鼠左侧子宫内。4周后牺牲10只裸大鼠,取出左侧子宫。通过巨检、镜检、免疫组化、流式细胞仪等初步观察肿瘤的生物学特性。结果:8只雌性裸大鼠皮下均成瘤,10只雌性裸大鼠中7只左侧子宫内成瘤,免疫组化证实雌激素受体和孕激素受体在皮下瘤均有表达。流式细胞分析早期裸大鼠人子宫内膜癌的S期细胞含量为37.83%。结论:人子宫内膜癌裸大鼠皮下瘤和宫腔原位移植瘤模型成功建立,为子宫内膜癌的体内实验和新型治疗提供了较理想的动物模型。