鼠伤寒沙门氏菌ompc基因PCR的检测方法

建立一种鼠伤寒沙门氏菌的聚合酶链式反应检测方法。根据Gen Bank中已发表的鼠伤寒沙门氏菌的ompc的基因序列,设计和合成了一对特异性引物,并优化了反应条件,检测了该方法的敏感性和特异性。结果成功扩增出了鼠伤寒沙门氏菌470 bp的ompc特异性基因片段,而对致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和志贺氏菌4种食品中常见的病原菌均未扩增出相应片段。敏感性实验结果表明本方法可检测到最低1 pg/μL的鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA。

禽大肠杆菌外膜蛋白基因C(ompC)的序列分析

根据 Gen Bank中人源大肠杆菌 K- 12外膜蛋白基因 C(omp C)的核苷酸序列设计引物 ,应用 PCR方法从禽大肠杆菌 O2 、O78株及它们的融合双价弱毒菌株 O2 ,78(Norr Chlr)中分别扩增得到 omp C基因 ,序列测定及分析比较发现 ,3个菌株的 om p C基因均由 170 2 nt组成 ,核苷酸序列完全相同 ,只有 1个大的开放性阅读框 (ORF) ,长 10 92 bp,编码由 36 3个氨基酸组成的前 Om p C蛋白 ,前 2 1个氨基酸残基组成信号肽 ,成熟的 Omp C蛋白由 342个氨基酸残基组成 ,Mr为 4 0 0 0 0。其氨基酸序列也完全相同。从基因水平上证明了禽大肠杆菌 O2 、O78株及融合双价弱毒菌株 O2 ,78(NorrChlr)存在相同的外膜蛋白 C抗原 ,从而为进一步研究 Omp

鸡白痢沙门氏菌外膜蛋白C基因(OmpC)的克隆与表达

以鸡白痢沙门氏菌基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增得到1026bp的OmpC基因片段。将扩增的OmpC基因克隆至大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pW425et中,构建原核表达重组质粒pW425et-OmpC。将pW425et-OmpC转化至thyA基因缺陷型大肠杆菌感受态E.coliX13中。SDS-PAGE分析可见1条约36ku的融合蛋白。Western blot分析表明,该重组蛋白具有反应原性,本研究结果为pW425et-OmpC在乳酸菌中的表达提供了实验依据。

外膜蛋白OmpC在枯草芽孢杆菌中的分泌表达及重组活菌制剂在肉鸡上的应用

为了研究携带鸡白痢沙门菌主要外膜蛋白OmpC基因的重组枯草芽孢杆菌活菌制剂在肉鸡上的免疫原性,以具有益生菌属性的枯草芽孢杆菌作为基因疫苗表达宿主,构建表达鸡白痢沙门菌主要外膜蛋白的枯草芽孢杆菌重组菌(pHT43/WB800n-OmpC)。将重组菌饮水饲喂12日龄艾维茵肉鸡,同时设空白、空转菌及非诱导菌对照组,分别于免疫后27和42日龄测定特异性抗体效价,同时45日龄后采用沙门菌C79-13株腹腔注射攻毒。结果:SDS-PAGE分析显示该重组蛋白大小为37 ku;Western blot分析显示表达蛋白具有很好的反应原性;肉鸡饲喂结果显示,42日龄时血清中检测到特异性抗体,且抗体效价为1∶32;攻毒试验显示重组菌诱导组免疫保护率为76.92%,而对照组、空转菌组、非诱导组保护率分别为23.08%、38.46%和30.77%。结果表明:此重组菌对鸡沙门菌具有免疫保护作用,为沙门菌的免疫机制研究奠定了基础,同时实现了饲用疫苗的双重作用。

大肠埃希菌对β-内酰胺类药物耐药特征及分子流行病学研究

目的调查大肠埃希菌尿液分离株中β内酰胺酶基因、AmpC酶基因和膜孔蛋白ompC基因的存在和变异情况。方法对宁波市第一医院2008年10月至2009年3月患者尿液样本中分离的大肠埃希菌（28株）采用PCR及序列分析的方法，分析15种阻内酰胺酶基因、6种AmpC酶基因和膜孔蛋白orapC基因。结果28株大肠埃希菌仅对美罗培南和亚胺培南100％敏感。所有分离菌中检出广谱p内酰胺酶基因以TEM-1．1ike为主，共17株（60．7％）、超广谱β内酰胺酶基因以CTX-M-55－like为主，共6株（21．4％）；ampC酶基因CMY-2－like3株（10．7％）；均检出膜孔蛋白ompC基因，且均存在变异。本组菌中TEM-1－like、CTX-M－55．1ike、CMY-2－like和orapC均阳性2株，3种基因同时阳性5株，2种基因同时阳性16株，只检出1种基因5株。菌株亲缘性分析显示，28株大肠埃希菌多耐药中多数菌株已发生演化，只有1号和22号株、14号和15号株这两组携带相同基因。结论本组大肠埃希菌中，β内酰胺酶基因、AmpC酶基因、ompC基因均有检出，这些基因是菌株对β酰胺类抗菌药物产生耐药的重要原因。菌株基因多态性明显。

耐药大肠埃希菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因研究

目的调查大肠埃希菌中β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白ompC基因的存在及变异情况。方法收集医院2009年6月-2010年6月临床分离的耐药大肠埃希菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR),分析A、B、C、D等4类β-内酰胺酶24种基因和膜孔蛋白ompC基因。结果 20株耐药大肠埃希菌共检出TEM、CTX-M-1群和OXA-1群等3种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为45.0%、40.0%和10.0%,其余21种基因均未检出;20株耐药大肠埃希菌共检测到19株占95.0%,膜孔蛋白编码基因ompC,经测序比对除11号株外,其余18株占90.0%均存在突变。结论 20株耐药大肠埃希菌对β-内酰胺类药物耐药为产β-内酰胺酶和膜孔蛋白变异的共同结果。

基于TaqMan探针的荧光定量PCR检测水产品中的沙门菌

目的:建立基于TaqMan探针的荧光定量PCR检测水产品中沙门菌的检测体系。方法:根据沙门菌外膜蛋白Ompc基因的保守序列,设计1对引物和TaqMan探针,并对荧光定量PCR反应体系和反应条件进行优化。利用建立的检测方法对舟山水产品加工厂和舟山菜市场采集的120份样本进行检测。结果:该检测方法可以达到1μl 1.0×101拷贝数量级的灵敏度。样品检出率为10.0%,与国标法检测结果一致。结论:本研究建立的TaqMan探针荧光定量PCR检测方法可以特异、灵敏、简便快速的实现对水产品中沙门菌的检测。