分蘖洋葱-番茄套作系统中番茄叶片差异蛋白表达分析

【目的】明确套作对番茄叶片差异蛋白表达的影响,从蛋白质水平进一步揭示套作分蘖洋葱减轻番茄连作障碍的机理,探明套作控病增产的原因,推动番茄高效优质栽培模式的建立和推广。【方法】以番茄为主栽作物,分蘖洋葱为套作作物,番茄叶片为试材,将4个不同化感潜力的分蘖洋葱品种(化感潜力强的‘绥化’和‘五常红七社’,化感潜力弱的‘宁安市红城村’和‘七台河’)与番茄套作,运用蛋白质双向电泳和MALDI-TOF-MS质谱鉴定技术,鉴定套作不同化感潜力分蘖洋葱对番茄叶片蛋白质表达谱的变化,分析差异蛋白的种类和功能。【结果】套作后不同处理番茄叶片共鉴定出39个差异表达蛋白,分为7类,包括光合作用相关蛋白、代谢相关蛋白、能量代谢相关蛋白、植物抗性相关蛋白、蛋白质合成相关蛋白、核酸合成相关蛋白和未知功能蛋白,差异较大的是与光合(11个)、代谢(11个)、植物抗性(8个)相关的蛋白。套作处理后,热激蛋白、硫氧还蛋白、多酚氧化酶、景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶、S-腺苷硫氨酸脱氢酶、ATP结合蛋白在番茄叶片中的表达量均有不同程度上调,化感潜力强的品种表达量显著高于弱的品种。【结论】套作分蘖洋葱对番茄叶片的蛋白表达存在差异,且化感潜力强的品种差异蛋白表达量高于化感潜力弱的品种,表明套作化感潜力强的品种有利于促进番茄的生长,增强其抗逆性,从而减轻连作障碍。

洋葱鳞茎形成过程中不同器官可溶性蛋白质含量及POD活性的变化

依据不同熟性黄皮洋葱鳞茎生长曲线将鳞茎形成过程划分为膨大开始期、迅速膨大期、膨大停止期,并对其鳞茎形成过程中生理生化特性进行了研究.结果表明,不同熟性的品种鳞茎迅速膨大期与叶片迅速增加期存在着不同步现象.相同熟性的品种,不同器官中可溶性蛋白质含量和POD活性变化趋势基本相同,其中根部POD活性最高,其变化可能与洋葱熟性有关;叶片中可溶性蛋白质含量较高,且不同熟性的品种其变化趋势相同.

大葱生长发育过程中可溶性糖、可溶性蛋白质及游离氨基酸含量变化规律的研究

研究了大葱生长发育过程中可溶性糖、可溶性蛋白、游离氨基酸含量变化动态。结果显示,随着大葱的生长,可溶性糖呈现低-高-低-高的变化规律,但不同材料的变化有差异。日本品种假茎可溶性糖含量变化幅度不大。而地方品种胭脂红、托县孤葱在采收时假茎中可溶性糖含量较高。假茎蛋白质含量表现为高-低-低-高的趋势。定植30 d后假茎蛋白质含量最高,以后随着生长、发育,蛋白质含量逐步下降;到采收期假茎内蛋白质含量又在积累,葱叶中蛋白质含量变化与假茎相似。大部分材料定植后随着大葱的生长发育,假茎中游离氨基酸含量呈上升趋势,近采收期达到最大值。不同材料葱叶中游离氨基酸含量不同,随着生长发育呈现低-高-低-高的变化趋势,葱叶中游离氨基酸含量远远低于假茎。

分蘖洋葱叶片总蛋白提取与双向电泳条件优化

以分蘖洋葱叶片为试验材料,比较3种不同蛋白质提取方法对2-DE蛋白质双向电泳结果的影响,并对其中的蛋白上样量、SDS-PAGE凝胶浓度及双向电泳重复性进行筛选与优化。结果表明,与酚提取法和改良的酚提取法相比,TCA-丙酮提取法提取分蘖洋葱叶片总蛋白的操作简便,所得双向电泳图谱背景清晰,蛋白质点圆滑,数量及质量均较好,是一种切实可行的提取分蘖洋葱叶片总蛋白方法。应用Image Master 2D Platinum 7.0软件对图谱进行分析,凝胶上检测到超过650多个蛋白质点,不同凝胶之间蛋白质的匹配率达92.5%,具有较高的分辨率和重复性,建立一套适用于分蘖洋葱叶片总蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)方法。

洋葱春化处理及可溶性糖和可溶性蛋白质变化规律的研究

[目的]通过不同时期洋葱叶片中可溶性糖和可溶性蛋白质变化规律的研究,掌握洋葱在花芽分化和抽薹时期生理生化特性,进行初步的研究探索,为探讨洋葱未熟抽薹与其主要生理生化物质的内在联系做准备。[方法]以新疆主栽品种白雪和金红一号为实验材料,测定其花芽分化时期和抽薹开花过程中可溶性糖和可溶性蛋白质含量的变化。[结果]可溶性糖在花芽分化过程中逐渐升高,在花芽分化完成时抽薹期又下降,而在对照组鳞茎形成初期可溶性糖含量一直降低,后期又上升,当鳞茎停止生长时趋于稳定。在花芽分化和抽薹过程中可溶性蛋白质含量变化呈降低—升高—降低—升高的变化趋势,对照组则呈先上升—下降—上升的趋势。[结论]可溶性糖既作为一种供能物质又作为一种信号传导物质,在春化作用中高含量的可溶性糖促进花芽分化,并为花芽分化和开花提供能量,在植物生长发育过程中,蛋白质主要作为催化各种生理活动的酶、细胞结构物质等,较高的蛋白质含量用以行使蛋白质的一些特异功能。

洋葱皮乙醇提取物对生鲜猪肉色泽、脂质和蛋白质氧化稳定性的影响

为研究洋葱皮乙醇提取物(ethanol extract of onion skins,EEOS)对生鲜猪肉色泽褐变,脂肪和蛋白质氧化以及微生物侵染程度的影响,并与空白对照组和抗坏血酸(ascorbic acid,VC)处理组进行比较,以猪肉亮度值L^*、红度值a^*,以及高铁肌红蛋白(metmyoglobin,MetMb)含量来判断色泽褐变;以不同时间点样品所含硫代巴比妥酸反应物(thiobarbituric acid reactive substances,TBARS)、蛋白质的疏水性和羰基含量分析EEOS对猪肉脂肪和蛋白质氧化的抑制作用;以挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)含量表征微生物对肉质的侵染程度。结果表明,EEOS能够减少MetMb含量,增加肉样的a*值;第12天时,与对照组相比,20 g/L EEOS处理组TBARS含量下降53.1%,羰基含量下降29.2%,且均低于VC处理组;此外添加EEOS的各组TVB-N值和蛋白质疏水性均低于空白对照组,且呈现浓度依赖关系(P<0.05)。由此可以说明EEOS作为一种天然的抗氧化剂或防腐剂,具有较好的应用前景。

甘露糖外切酶的细胞生物学定位研究

用不同试剂从西红柿种子提取甘露聚糖外切酶,结果表明甘露聚糖外切酶只能被含高盐的缓冲液(0.1mol/LHepes+500mmol/LNaCl,pH7.0)提取出来,单独的低盐缓冲液(0.1mol/LHepes,pH7.0)或用非盐洗涤剂代替高盐则不能提取该酶.通过基因枪将甘露聚糖外切酶和GFP融合蛋白转化洋葱表皮细胞,发现转化了甘露聚糖外切酶和GFP融合蛋白的洋葱表皮细胞壁上有荧光,表明甘露聚糖外切酶可能定位在细胞壁上.

感染北京地区大葱的胡葱黄条病毒外壳蛋白基因的克隆及分析

以感染胡葱黄条病毒(Shallot yellow stripe virus,SYSV)的大葱为材料,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得包含SYSV-CP全部编码序列、NIb蛋白基因5′端的部分序列和3′UTR的2个基因片段,分别命名为SYSV-CP1和SYSV-CP2,它们的编码区碱基数均为774bp,均编码258个氨基酸;在该编码区内存在2个碱基的差异,编码的蛋白存在1个氨基酸的差异。系统进化树分析表明:SYSV分离物可以区分为两个主要群体,SYSV-CP1和SYSV-CP2位于第Ⅱ组内,它们与来自浙江的SYSV的分离物亲缘关系最近,表现出一定的地理分布相关性。

添加圆葱寡糖对肉鸡代谢功能调控的研究

在肉鸡饲粮中添加圆葱寡糖(1.5％),对山东地方特色保种白羽鸡进行饲养试验,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)PAGE技术,分析血液中酯酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)、蛋白质的多态。结果表明,试验组蛋白结构新出现>100Ku亚基组分,存在多态变化。EST同工酶快区Es-1位点,由多等位基因控制,酶带着色程度显著减弱,其活性下降45.8％,LDH同工酶出现4条酶谱带,酶带着色的程度明显增强,其活性增加2.5倍。提示圆葱寡糖直接或间接影响基因表达水平,调控生化生理代谢功能。

大葱种质材料营养成分分析

为了进行品质育种,分析了不同来源材料大葱品种的可溶性糖、可溶性蛋白、游离氨基酸、全 S、VC 和干物质含量变化。结果显示:不同来源材料,其全 S 含量有明显差异,含量高的两份材料为胭脂红和四季高白香葱。葱叶的可溶性蛋白含量高于葱白,含量高的为托县孤葱、细香葱和四季高白香葱。葱白的可溶性糖含量高于葱叶,含量高的为托县孤葱、四季高白香葱和胭脂红。游离氨基酸含量则为葱白高于葱叶,含量高的为四季高白香葱、托县孤葱和胭脂红,所有测试材料的 VC 含量没有明显差异。随着大葱营养生长,葱白和葱叶干物质含量都呈增加的趋势,葱白干物质增加的比率高于葱叶。

葱白提取物对创伤性下肢深静脉血栓兔活化蛋白C和血浆前体蛋白的影响

目的观察葱白提取物对创伤性下肢深静脉血栓(DVT)中对兔活化蛋白C(APC)和血浆前体蛋白(TpP)的表达水平的影响。方法随机将新西兰白兔24只分为模型对照组、葱白防治组和葱白治疗组。制备兔下肢创伤性DVT模型,模型对照组给予生理盐水,葱白治疗组给葱白提取物1周,葱白防治组造模前持续给葱白提取物1周,造模后同葱白治疗组给药。检测造模前后各组APC和TpP的变化。结果造模后各组兔血浆中APC明显降低,TpP明显升高(P<0.01);与模型组比较,血浆APC除治疗组第3天没有显著差异外,其余各组各时段均有显著差异(P<0.05),防治组各时段均优于治疗组(P<0.05);血浆TpP治疗组各时段均没有显著差异(P>0.05),防治组各时段均有显著差异(P<0.05),防治组优于治疗组(P<0.05)。结论提高节APC水平,降低TpP水平可能是葱白提取物防治DVT的机制之一。

紫皮洋葱与黄皮洋葱中蛋白质含量的比较分析

采取凯式定氮法和光谱分析法测定洋葱中蛋白质的含量,比较紫皮洋葱与黄皮洋葱的蛋白质含量差异.结果表明紫皮洋葱中蛋白质含量较高.

洋葱皮乙醇提取物对冷却牛肉颜色、脂质和蛋白质氧化稳定性的影响

将牛肉切片在3种浓度(0.5%、1.0%、2.0%)的洋葱皮乙醇提取物(Ethanol Extract of Onion Skin,EEOS)溶液中浸渍后在4℃条件下冷藏12 d,并与空白对照组和添加了抗坏血酸(ascorbic acid,VC)的处理组进行比较,分析EEOS对牛肉在冷藏期间的颜色褐变、脂肪和蛋白质氧化以及腐败程度的影响。结果表明:EEOS总酚含量较高,具有很强的自由基清除活性;添加EEOS可延缓牛肉pH上升,提高颜色稳定性,减少高铁肌红蛋白的生成,同时延缓脂肪和蛋白的氧化进程。2%EEOS有效降低了牛肉样品硫代巴比妥酸反应物(Thiobarbituric acid reactive substances,TBARS)和蛋白质羰基含量,与空白对照组相比分别降低56.9%和17.6%。此外,2%EEOS还可显著降低挥发性盐基氮(Total Volatile Basic Nitrogen,TVB-N)的含量(P<0.05)。因此,添加2%EEOS可抑制牛肉冷藏期间的颜色褐变和脂肪、蛋白质的氧化,可在牛肉冷藏保鲜中作为天然抗氧化剂。

洋葱多肽及蛋白对T2DM小鼠降血糖及降血脂作用研究

目的:研究洋葱多肽及蛋白的体内降糖降脂活性。方法:将造模成功的小鼠进行糖耐量实验和药效实验,利用各生化指标参数和动物组织切片,探究洋葱多肽及蛋白的体内降糖及降脂作用。结果:200 mg/kg bw洋葱蛋白及洋葱多肽的降糖效果达到盐酸二甲双胍降糖效果的70%及80%以上;洋葱多肽组则在60、120 min时的血糖值及糖耐量AUC均显著低于模型组,分别达到阳性对照组的87.34%、93.53%和92.44%;洋葱蛋白组的AST和UREA高于正常值但低于模型组,洋葱多肽组与阳性对照组各项指标均在阈值内。结论:洋葱蛋白和洋葱多肽能有效降低2型糖尿病小鼠血糖和血脂,有效提高其口服耐糖量,并能对受损的小鼠肝、肾予以一定程度的恢复,且洋葱多肽的作用优于洋葱蛋白。

洋葱蛋白及多肽体外抗氧化活性研究

目的:测定洋葱蛋白及多肽的体外抗氧化性。方法:以Vc为对照品,采用普鲁士蓝法、邻二氮菲-Fe^(2+)氧化法、邻苯三酚自氧化法、DPPH法分别测定洋葱多肽与蛋白的总还原能力和对·OH、O_2^-·、DPPH·3种自由基的清除能力。结果:相同浓度的洋葱多肽总还原能力稍强于洋葱蛋白,并在0.032 g/m L时达到对照品Vc总还原能力的58%以上;浓度为0.24 g/m L时洋葱蛋白和多肽的O_2^-·清除率分别为53%和63%;浓度大于0.24 g/m L时,洋葱多肽及蛋白的DPPH·清除率分别为57%和42%;浓度高于0.032 g/m L时,洋葱蛋白的·OH清除效果稍高于多肽,达到Vc对·OH的清除率的50%以上。结论:洋葱蛋白及多肽均具有一定体外抗氧化能力,且洋葱多肽的总还原能力、对O_2^-·和DPPH·的清除能力强于洋葱蛋白,较高浓度时洋葱蛋白对·OH的清除能力则强于多肽。

洋葱中蒜氨酸酶的分离纯化

研究以国产红皮洋葱为原料,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-200HR柱层析、Con A-Sepharose4B亲和层析等处理,对洋葱中的蒜氨酸酶进行了分离和精提,得到纯化8.05倍、回收率49.5%的蒜氨酸酶,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,测定洋葱中蒜氨酸酶亚基分子量为50.2ku。

OYDV衣壳蛋白表达及其单克隆抗体分析

洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)是危害洋葱质量和产量的主要病毒之一。本研究从吉林省农安县的分蘖洋葱种植区分离到一株OYDV,通过RT-PCR克隆OYDV衣壳蛋白(coat protein,cp)基因,构建重组质粒pET28-OYDVcp,转化大肠杆菌Rosetta,经诱导后表达并纯化,Western-blot鉴定为OYDV cp蛋白。与实验室制备的9株大豆花叶病毒单克隆抗体进行反应,得出其中3株单克隆抗体(2D3、4F9、4G12)能够识别OYDV。综上,本研究首次从分蘖洋葱上分离并鉴定OYDV,对OYDV cp基因进行原核表达,获得重组蛋白,并且鉴定到能够识别OYDV的单克隆抗体3株,为分蘖洋葱病毒检测提供了抗体材料。

葱白提取物对创伤性兔下肢深静脉血栓形成过程中血小板活化的影响

目的:通过检测兔创伤性下肢深静脉血栓形成P-选择素(CD62P)、血小板活化因子(PAF)及溶酶体膜蛋白(CD63)的表达,探讨葱白提取物防治深静脉血栓的疗效和机制。方法::随机将新西兰白兔24只分为空白模型组、葱白防治组和葱白治疗组。按照赵学凌方法构建兔下肢创伤性深静脉血栓模型,造模成功后,空白模型组给予生理盐水,葱白治疗组给葱白提取物1周,葱白防治组造模前持续给葱白提取物1周,造模后同葱白治疗组。并检测造模前后CD62P、PAF和CD63的变化,对实验数据进行统计分析。结果:造模后,各组兔血清中CD62P、PAF、CD63含量明显升高(P<0.05),葱白防治组上升幅度较小(P<0.05),空白模型组和葱白治疗组上升幅度较大(P<0.01),葱白提取物预防和治疗均可以降低模型组兔血清中CD62P、PAF、CD63含量(P<0.05),和葱白治疗组比,葱白防治组降低CD62P和CD63水平较明显,差异有统计学意义(P<0.05),而对PAF的影响比较差异无统计学意义(P>0.05)。同时葱白提取物预防给药可以降低正常兔血液中CD62P的水平。结论:葱白提取物能防治创伤后深静脉血栓的形成,其机制与减少血小板活化,抗氧化损伤,减少血小板聚集有关。