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黄杆菌(Flavobacteriumsp.)ATCC27551 opd基因在E.coli中的克隆及表达
被引量:
7
1
作者
陈亚丽
张先恩
刘虹
《武汉大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2001年第2期200-204,共5页
研究了黄杆菌 ATCC2 75 5 1的 opd基因在大肠杆菌中的表达 ,并对于表达产物进行了胞内定位和酶活测定 .通过 PCR扩增和 PCR产物直接克隆 ,将黄杆菌质粒上的一段长达 1137bp的 opd基因进行扩增及克隆 ,然后按正确的读码框亚克隆于表达载...
研究了黄杆菌 ATCC2 75 5 1的 opd基因在大肠杆菌中的表达 ,并对于表达产物进行了胞内定位和酶活测定 .通过 PCR扩增和 PCR产物直接克隆 ,将黄杆菌质粒上的一段长达 1137bp的 opd基因进行扩增及克隆 ,然后按正确的读码框亚克隆于表达载体 p ET2 8b(+ )上 ,转化宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3) ,经 IPTG诱导 ,获得了较高量的基因表达产物 .该表达产物以包涵体的形式存在于细胞内 ,通过分离包涵体可以得到电泳较纯的条带 .
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关键词
黄杆菌
odp基因
克隆
表达
大肠杆菌
胞内定位酶活性
农药降解酶
下载PDF
职称材料
优化合成有机磷水解酶opd p基因在毕赤酵母中的表达
被引量:
1
2
作者
王颖
黄灿
+2 位作者
孙其濛
马立新
严红
《湖北大学学报(自然科学版)》
CAS
2018年第1期7-11,23,共6页
拟验证通过密码子优化有机磷水解酶(opd)基因,和生物砖方法构建opd多拷贝载体,以提高在毕赤酵母中的表达量.将原始的opd基因依照毕赤酵母偏爱密码子设计合成新的有机磷水解酶基因,并在C端添加了6个His-Tag融合蛋白标签.所合成的opd p基...
拟验证通过密码子优化有机磷水解酶(opd)基因,和生物砖方法构建opd多拷贝载体,以提高在毕赤酵母中的表达量.将原始的opd基因依照毕赤酵母偏爱密码子设计合成新的有机磷水解酶基因,并在C端添加了6个His-Tag融合蛋白标签.所合成的opd p基因全长1 149 bp(base pair).基因克隆入p HBM905BDM毕赤酵母表达型质粒,成功构建重组表达质粒p HBM905BDM-opd p,以及多拷贝表达质粒p HBM905BDM-opd p-2C,p HBM905BDM-opd p-3C,p HBM905BDMopd p-4C,转化毕赤酵母感受态细胞GS115.实验结果表明,经甲醇诱导后,在AOX1(乙醇氧化酶基因)启动子调控下,获得OPD P蛋白分泌表达,Western Blot检测4个转化的菌株中都表达了目的蛋白,且两拷贝表达量较一拷贝有提高,达到0.2 U/m L.但是随着拷贝数的进一步增加表达量呈现下降的趋势.
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关键词
毕赤酵母
有机磷水解酶
opd
基因
分泌表达
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职称材料
番茄果实特异性表达有机磷水解酶的农药降解活性分析
被引量:
1
3
作者
赵杰宏
赵德刚
韩洁
《贵州农业科学》
CAS
北大核心
2010年第5期77-80,共4页
为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反...
为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反应最适温度为30℃,稳定性较高。酶的最适保存pH值为9,最适试验pH值为8.0。与1 mmol/L Zn2+条件下酶活相比,Co2+提高了酶活2.1倍,Ca2+、Cu2+、Fe2+、Mg2+、Mn2+、EDTA、SDS、TritonX-100、β-ME和DTT都不同程度地抑制了酶活。检测重组表达OPH降解蝇毒磷、毒死蜱和对硫磷的酶活。表明,降解蝇毒磷的Km最低,为4.04μmol/L。重组表达OPH有助于提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。
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关键词
遗传转化
有机磷水解酶(OPH)
农药残留
有机磷农药降解基因(
opd
)
下载PDF
职称材料
题名
黄杆菌(Flavobacteriumsp.)ATCC27551 opd基因在E.coli中的克隆及表达
被引量:
7
1
作者
陈亚丽
张先恩
刘虹
机构
中国科学院武汉病毒研究所
出处
《武汉大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2001年第2期200-204,共5页
文摘
研究了黄杆菌 ATCC2 75 5 1的 opd基因在大肠杆菌中的表达 ,并对于表达产物进行了胞内定位和酶活测定 .通过 PCR扩增和 PCR产物直接克隆 ,将黄杆菌质粒上的一段长达 1137bp的 opd基因进行扩增及克隆 ,然后按正确的读码框亚克隆于表达载体 p ET2 8b(+ )上 ,转化宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3) ,经 IPTG诱导 ,获得了较高量的基因表达产物 .该表达产物以包涵体的形式存在于细胞内 ,通过分离包涵体可以得到电泳较纯的条带 .
关键词
黄杆菌
odp基因
克隆
表达
大肠杆菌
胞内定位酶活性
农药降解酶
Keywords
Flavobacterium
opd gene
cloning and expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
X172 [环境科学与工程—环境科学]
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职称材料
题名
优化合成有机磷水解酶opd p基因在毕赤酵母中的表达
被引量:
1
2
作者
王颖
黄灿
孙其濛
马立新
严红
机构
湖北大学生命科学学院
出处
《湖北大学学报(自然科学版)》
CAS
2018年第1期7-11,23,共6页
基金
国家自然科学基金(31300074)资助
文摘
拟验证通过密码子优化有机磷水解酶(opd)基因,和生物砖方法构建opd多拷贝载体,以提高在毕赤酵母中的表达量.将原始的opd基因依照毕赤酵母偏爱密码子设计合成新的有机磷水解酶基因,并在C端添加了6个His-Tag融合蛋白标签.所合成的opd p基因全长1 149 bp(base pair).基因克隆入p HBM905BDM毕赤酵母表达型质粒,成功构建重组表达质粒p HBM905BDM-opd p,以及多拷贝表达质粒p HBM905BDM-opd p-2C,p HBM905BDM-opd p-3C,p HBM905BDMopd p-4C,转化毕赤酵母感受态细胞GS115.实验结果表明,经甲醇诱导后,在AOX1(乙醇氧化酶基因)启动子调控下,获得OPD P蛋白分泌表达,Western Blot检测4个转化的菌株中都表达了目的蛋白,且两拷贝表达量较一拷贝有提高,达到0.2 U/m L.但是随着拷贝数的进一步增加表达量呈现下降的趋势.
关键词
毕赤酵母
有机磷水解酶
opd
基因
分泌表达
Keywords
Pichia pastoris
organophosphorus hydrolase
opd gene
secretory expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q933 [生物学—微生物学]
下载PDF
职称材料
题名
番茄果实特异性表达有机磷水解酶的农药降解活性分析
被引量:
1
3
作者
赵杰宏
赵德刚
韩洁
机构
贵州大学农业生物工程省重点实验室
贵阳中医学院基础部微生物教研室
出处
《贵州农业科学》
CAS
北大核心
2010年第5期77-80,共4页
基金
国家科技支撑计划项目"喀斯特山区特有作物优异基因资源发掘与转基因安全关键技术研究及应用"(2007BAD59B00)
国际科技合作项目"基因删除技术在转基因水稻和油菜上的应用及安全性评价"(2007DFA312601263)
国家转基因新品种培育重大专项项目(2008ZX08010-003)
文摘
为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反应最适温度为30℃,稳定性较高。酶的最适保存pH值为9,最适试验pH值为8.0。与1 mmol/L Zn2+条件下酶活相比,Co2+提高了酶活2.1倍,Ca2+、Cu2+、Fe2+、Mg2+、Mn2+、EDTA、SDS、TritonX-100、β-ME和DTT都不同程度地抑制了酶活。检测重组表达OPH降解蝇毒磷、毒死蜱和对硫磷的酶活。表明,降解蝇毒磷的Km最低,为4.04μmol/L。重组表达OPH有助于提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。
关键词
遗传转化
有机磷水解酶(OPH)
农药残留
有机磷农药降解基因(
opd
)
Keywords
gene
tic transformation
organophosphorus hydrolytic enzyme(OPH)
pesticide residue
organophosphorus pesticide degradation
gene
(
opd
)
分类号
S641.2 [农业科学—蔬菜学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
黄杆菌(Flavobacteriumsp.)ATCC27551 opd基因在E.coli中的克隆及表达
陈亚丽
张先恩
刘虹
《武汉大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2001
7
下载PDF
职称材料
2
优化合成有机磷水解酶opd p基因在毕赤酵母中的表达
王颖
黄灿
孙其濛
马立新
严红
《湖北大学学报(自然科学版)》
CAS
2018
1
下载PDF
职称材料
3
番茄果实特异性表达有机磷水解酶的农药降解活性分析
赵杰宏
赵德刚
韩洁
《贵州农业科学》
CAS
北大核心
2010
1
下载PDF
职称材料
已选择
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