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萝卜DDRT-PCR技术体系的优化
被引量:
6
1
作者
贾晋
张鲁刚
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2008年第4期128-134,共7页
【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法(异硫氰酸胍法)与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg^2+、dNTPs...
【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法(异硫氰酸胍法)与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg^2+、dNTPs、引物及cDNA用量进行了优化。【结果】BIOZOL试剂提取的RNA量大质好,经纯化后,其OD260/OD280值为1.8-2.1,表明杂质少,质量浓度大于1μg/μL,符合mRNA差异显示的要求;确定的最佳DDRT-PCR反应体系(20μL)为:10×Buffer 2.5 mmol/L,Mg^2+2.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq酶1.5 U,锚定引物2.5μmol/L,随机引物1.25μmol/L,cDNA用量0.5μL。mRNA差异显示结果表明,高分辨率的片断为100-1 000 bp。经验证,该体系也适用于大白菜和油菜mRNA差异显示研究。【结论】通过两种RNA提取方法比较和DDRT-PCR体系优化,获得了萝卜最佳RNA提取方法及mRNA差异显示反应体系。
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关键词
萝卜
RNA提取
ddrt
-
pcr
体系优化
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职称材料
青山羊皮肤组织差显快速银染技术的优化研究
被引量:
1
2
作者
张兆远
康文霞
+2 位作者
董彬
崔志峰
王慧
《山东农业大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2008年第1期59-61,共3页
差异显示PCR(differential display PCR,DDRT-PCR)技术是快速分离差异表达基因的强有力工具,但是其繁琐的染色程序和较高的假阳性率给研究者带来了不便。为了提高DDRT-PCR技术的效率和试验结果的清晰度和重复率,本研究以济宁青山羊皮肤...
差异显示PCR(differential display PCR,DDRT-PCR)技术是快速分离差异表达基因的强有力工具,但是其繁琐的染色程序和较高的假阳性率给研究者带来了不便。为了提高DDRT-PCR技术的效率和试验结果的清晰度和重复率,本研究以济宁青山羊皮肤组织的总RNA为试验材料,对影响DDRT-PCR的因素,如:反转录条件、反应体系和染色条件进行了优化研究。通过对染色程序和温度等染色条件的反复对比试验,建立了快速银染技术,得到了十分清晰的DDRT-PCR电泳图谱。快速银染技术既缩短了染色时间,又可以得到清晰的电泳图谱。
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关键词
差异显示
pcr
快速银染技术
反应体系优化
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职称材料
法夫酵母银染mRNA差异显示技术的建立
被引量:
1
3
作者
刘丹
倪辉
邬应龙
《集美大学学报(自然科学版)》
CAS
2007年第3期204-208,共5页
对影响银染DDRT-PCR方法的主要因素如RNA投入量、引物浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度以及二次扩增的退火温度进行优化.实验结果表明:适宜分析法夫酵母mRNA差异显示的银染DDRT-PCR的条件是总RNA投入量为0.4μg、引物浓度为1.5μmol/L、dNTP...
对影响银染DDRT-PCR方法的主要因素如RNA投入量、引物浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度以及二次扩增的退火温度进行优化.实验结果表明:适宜分析法夫酵母mRNA差异显示的银染DDRT-PCR的条件是总RNA投入量为0.4μg、引物浓度为1.5μmol/L、dNTPs浓度为0.25 mmol/L、MgCl2浓度为1.7 mmol/L、二次扩增的退火温度为40℃.
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关键词
ddrt
—
pcr
法夫酵母
银染
影响因素
优化
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
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职称材料
棉花银染mRNA差异显示体系优化研究
被引量:
1
4
作者
代常波
王清连
+1 位作者
胡根海
郭敏敏
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2008年第12期31-35,共5页
mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法。以陆地棉组织培养过程中不同时期愈伤组织为材料,对RNA提取、PCR反应体系、银染条件等影响mRNA差异显示的关键因素进行优化试验,建立了一套适合棉花组织培养的mRNA差异显示体...
mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法。以陆地棉组织培养过程中不同时期愈伤组织为材料,对RNA提取、PCR反应体系、银染条件等影响mRNA差异显示的关键因素进行优化试验,建立了一套适合棉花组织培养的mRNA差异显示体系。最终确定了优化体系(50μL)为:随机引物0.4μmol/L,锚定引物0.4μmol/L,dNTP 250μmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq酶1.5 U,退火温度为39.3℃。利用优化后的体系对材料进行扩增,扩增产物特异性好、条带清晰、背景干净。该体系简便、快捷、灵敏、高效,可用于分离差异表达基因。
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关键词
棉花
愈伤组织
体系优化
MRNA差异显示
银染
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职称材料
题名
萝卜DDRT-PCR技术体系的优化
被引量:
6
1
作者
贾晋
张鲁刚
机构
西北农林科技大学园艺学院陕西省农业分子生物学重点实验室
出处
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2008年第4期128-134,共7页
基金
国家"863"计划项目"植物分子与细胞高效育种技术与品种创制"(2006AA100108-4-7)
陕西省科技厅陕西省13115工程项目"优质多抗专用蔬菜新品种选用技术"(2007ZDKG-05)
文摘
【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法(异硫氰酸胍法)与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg^2+、dNTPs、引物及cDNA用量进行了优化。【结果】BIOZOL试剂提取的RNA量大质好,经纯化后,其OD260/OD280值为1.8-2.1,表明杂质少,质量浓度大于1μg/μL,符合mRNA差异显示的要求;确定的最佳DDRT-PCR反应体系(20μL)为:10×Buffer 2.5 mmol/L,Mg^2+2.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq酶1.5 U,锚定引物2.5μmol/L,随机引物1.25μmol/L,cDNA用量0.5μL。mRNA差异显示结果表明,高分辨率的片断为100-1 000 bp。经验证,该体系也适用于大白菜和油菜mRNA差异显示研究。【结论】通过两种RNA提取方法比较和DDRT-PCR体系优化,获得了萝卜最佳RNA提取方法及mRNA差异显示反应体系。
关键词
萝卜
RNA提取
ddrt
-
pcr
体系优化
Keywords
Raphanus sativus
RNA extraction
ddrt
-
pcr
system
optimizing
分类号
S631.1 [农业科学—蔬菜学]
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职称材料
题名
青山羊皮肤组织差显快速银染技术的优化研究
被引量:
1
2
作者
张兆远
康文霞
董彬
崔志峰
王慧
机构
山东农业大学动物科技学院水产系
出处
《山东农业大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2008年第1期59-61,共3页
基金
国家自然科学基金(30671498)
山东农业大学青年创新基金(2005-2008)
山东省"三0工程"项目:山东省地方优良家禽品种选育(2006-2009)资金支持
文摘
差异显示PCR(differential display PCR,DDRT-PCR)技术是快速分离差异表达基因的强有力工具,但是其繁琐的染色程序和较高的假阳性率给研究者带来了不便。为了提高DDRT-PCR技术的效率和试验结果的清晰度和重复率,本研究以济宁青山羊皮肤组织的总RNA为试验材料,对影响DDRT-PCR的因素,如:反转录条件、反应体系和染色条件进行了优化研究。通过对染色程序和温度等染色条件的反复对比试验,建立了快速银染技术,得到了十分清晰的DDRT-PCR电泳图谱。快速银染技术既缩短了染色时间,又可以得到清晰的电泳图谱。
关键词
差异显示
pcr
快速银染技术
反应体系优化
Keywords
ddrt
-
pcr
fast silver straining
optimizing the ddrt - pcr
分类号
S174.42 [农业科学—农业基础科学]
下载PDF
职称材料
题名
法夫酵母银染mRNA差异显示技术的建立
被引量:
1
3
作者
刘丹
倪辉
邬应龙
机构
集美大学生物工程学院
四川农业大学信息与工程技术学院
出处
《集美大学学报(自然科学版)》
CAS
2007年第3期204-208,共5页
基金
福建省自然科学基金资助项目(12071028)
福建省青年人才创新基金资助项目(2005Z035)
文摘
对影响银染DDRT-PCR方法的主要因素如RNA投入量、引物浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度以及二次扩增的退火温度进行优化.实验结果表明:适宜分析法夫酵母mRNA差异显示的银染DDRT-PCR的条件是总RNA投入量为0.4μg、引物浓度为1.5μmol/L、dNTPs浓度为0.25 mmol/L、MgCl2浓度为1.7 mmol/L、二次扩增的退火温度为40℃.
关键词
ddrt
—
pcr
法夫酵母
银染
影响因素
优化
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
Keywords
ddrt
-
pcr
Phaffia rhodozyma
silver staining
influencing factors
optimizing
nondenaturing PAGE
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
棉花银染mRNA差异显示体系优化研究
被引量:
1
4
作者
代常波
王清连
胡根海
郭敏敏
机构
河南师范大学生命科学学院
河南科技学院生命科技学院
出处
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2008年第12期31-35,共5页
基金
国家科技支撑计划项目(2006BAD01A05-27)
河南省自然科学基金项目(0411034100)
文摘
mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法。以陆地棉组织培养过程中不同时期愈伤组织为材料,对RNA提取、PCR反应体系、银染条件等影响mRNA差异显示的关键因素进行优化试验,建立了一套适合棉花组织培养的mRNA差异显示体系。最终确定了优化体系(50μL)为:随机引物0.4μmol/L,锚定引物0.4μmol/L,dNTP 250μmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq酶1.5 U,退火温度为39.3℃。利用优化后的体系对材料进行扩增,扩增产物特异性好、条带清晰、背景干净。该体系简便、快捷、灵敏、高效,可用于分离差异表达基因。
关键词
棉花
愈伤组织
体系优化
MRNA差异显示
银染
Keywords
Cotton
Callus
System
optim
ization
ddrt
-
pcr
Silver straining
分类号
S562 [农业科学—作物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
萝卜DDRT-PCR技术体系的优化
贾晋
张鲁刚
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2008
6
下载PDF
职称材料
2
青山羊皮肤组织差显快速银染技术的优化研究
张兆远
康文霞
董彬
崔志峰
王慧
《山东农业大学学报(自然科学版)》
CSCD
北大核心
2008
1
下载PDF
职称材料
3
法夫酵母银染mRNA差异显示技术的建立
刘丹
倪辉
邬应龙
《集美大学学报(自然科学版)》
CAS
2007
1
下载PDF
职称材料
4
棉花银染mRNA差异显示体系优化研究
代常波
王清连
胡根海
郭敏敏
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2008
1
下载PDF
职称材料
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