Orexin-1受体抑制剂对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响

目的探讨orexin-1受体抑制剂对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法提取SD大鼠BMSCs并鉴定,配制10^(-2),10^(-3),10^(-4),10^(-5),10^(-6)mol·L^(-1)不同浓度的orexin-1受体抑制剂溶液,分别与第3代BMSCs共培养后,应用噻唑蓝(MTT)法检测orexin-1受体抑制剂对BMSCs增殖的影响。对硝基苯磷酸盐法和双抗体两步夹心酶联免疫吸附法检测碱性磷酸酶和骨钙素,实时荧光定量PCR法检测成骨分化相关基因Runx2、Col1a1 mRNA。结果orexin-1受体抑制剂最佳促BMSCs增殖浓度为1×10^(-4)mol·L^(-1)。10^(-4),10^(-5),10^(-6)mol·L^(-1)orexin-1受体抑制剂作用3,5,7 d能升高BMSCs胞浆内碱性磷酸酶表达,差异有统计学意义(P<0.05),而且这种作用在第5天达到高峰。10^(-4),10^(-5),10^(-6)mol·L^(-1)orexin-1受体抑制剂作用7 d可使骨钙素含量升高(P<0.05)。10^(-4),10^(-5),10^(-6)mol·L^(-1)orexin-1受体抑制剂上调Runx2、COL1A1 mRNA表达。结论 orexin-1受体抑制剂可促进BMSCs增殖,同时促进其向成骨细胞方向分化,促进BMSCs表达碱性磷酸酶刺激骨钙素的分泌。

Orexin-2受体激动剂不同给药方式对去卵巢糖尿病大鼠骨组织的影响

目的研究orexin-2受体激动剂对去卵巢糖尿病大鼠骨组织的影响。方法选取成年雌性SD大鼠作为动物模型,分为5组,每组6只。正常组:正常SD大鼠连续8周每天接受缓冲液注射;模型组:SD大鼠进行去卵巢手术,术后1周腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg,连续8周每天接受缓冲液注射;口服给药组、腹腔给药组和侧脑室给药组:大鼠给予orexin-2受体激动剂(Ala11,d-Leu15-orexin B),连续8周。实验8周后处死大鼠,用双能X线骨矿物质密度检测仪检测左侧股骨及第5腰椎骨密度;采用半自动图像分析系统,对左侧胫骨上段进行骨形态计量学参数的分析;分析股骨和第5腰椎的生物力学性能。结果与正常组相比,模型组股骨的各项生物力学性能指标呈明显下降趋势,其中弹性载荷值,最大载荷值、断裂载荷值,分别降低19.63%(P<0.01)、21.08%(P<0.01)和24.58%(P<0.01),胫骨上段的骨小梁数量减少,骨小梁分离度增加。每毫米破骨细胞数和破骨细胞贴壁长度增加,侧脑室给药组能改善成模组大鼠骨组织的上述指标,差异有统计学意义(P<0.05);但是口服给药组和腹腔注射给药组不能改善模型组骨丢失指标,差异无统计学意义(P>0.05)。结论侧脑室给予orxin-2受体激动剂能改善去卵巢糖尿病大鼠的骨微结构,防治骨质疏松症。

Orexin-1受体拮抗剂对慢性点燃癫大鼠学习记忆的影响及海马神经细胞的增殖变化

目的:研究orexin-1受体(OX1R)拮抗剂(SB334867,SB)对戊四氮(PTZ)慢性点燃癫大鼠空间学习记忆能力及海马齿状回神经细胞增殖的影响。方法:Wistar大鼠随机分为①对照组[腹腔和侧脑室均注射生理盐水(NS)];②PTZ组(腹腔注射PTZ+侧脑室注射NS);③PTZ+orexin-A(OXA)组(腹腔注射PTZ+侧脑室注射OXA);④PTZ+SB组(腹腔注射PTZ+侧脑室注射SB);⑤PTZ+SB+OXA组(腹腔注射PTZ+侧脑室注射SB和OXA)。观察各组大鼠的空间学习记忆能力及海马齿状回区BrdU+和BrdU+/NeuN+细胞的表达。结果:与PTZ+OXA组比较,PTZ+SB+OXA组大鼠逃避潜伏期延长、穿越平台象限的次数减少(P<0.05)。免疫荧光显示,PTZ+OXA组大鼠齿状回区BrdU+和BrdU+/NeuN+细胞表达增多(P<0.01),而PTZ+SB+OXA组大鼠齿状回区BrdU+/NeuN+细胞表达比PTZ+OXA组减少(P<0.01)。结论:OXA通过OX1R能改善癫大鼠的空间学习记忆能力,可能与OX1R介导的海马齿状回神经细胞增殖与分化作用有关。

Orexin-2受体基因多态性与阿尔茨海默病的相关性

目的探讨orexin-2受体(OX2R)基因多态性与阿尔茨海默病(AD)的相关性。方法收集2014年1月至2018年1月在郑州大学人民医院确诊的AD患者350例为病例组,350名健康体检者为健康对照组,收集其一般人口学资料。采集外周血样本提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术结合基因测序技术检测OX2R基因6个位点的多态性。比较两组间基因型和基因频率的分布差异。结果病例组OX2R基因rs2653349和rs2292041位点的基因型分布与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示rs2653349(GA+AA)基因型是AD发病的独立危险因素(P=0.009);单体型分析发现有5种单倍体型在病例组和对照组间分布有差异:rs2653349+rs2292041 GA型(χ^2=10.922,P=0.000 1)、rs2653349+rs2292041+rs3122169 GAA(χ^2=8.687,P=0.003)、ATC型(χ^2=8.329,P=0.003 9)、rs2653349+rs2292041 AT型(χ^2=6.504,P=0.010 8)、rs2653349+rs2292041+rs3122169 ATA型(χ^2=17.511,P=0.000 1)。结论汉族人群OX2R基因rs2653349和rs2292041多态位点可能与AD具有相关性,A等位基因可能是AD发生的易感因素。