迷走神经电刺激对脑外伤后昏迷大鼠前额叶皮质和下丘脑Orexin-A及其受体OX1R表达变化的影响

目的:探讨迷走神经电刺激(VNS)对脑外伤(TBI)昏迷大鼠的促醒作用及可能相关机制。方法:将SD大鼠随机分为3组:空白对照组、假刺激组和刺激组。应用VNS治疗脑外伤后昏迷大鼠,观察其行为学变化,并用ELISA、Western-blot、免疫组织化学技术检测各组大鼠前额叶皮质(PFC)和下丘脑组织的Orexin-A及OX1R表达。结果:刺激组30只大鼠中20只出现翻正反射,假刺激组30只中8只出现翻正反射;将3组的Orexin-A及OX1R含量进行两两比较,发现刺激组Orexin-A及受体OX1R水平高于假刺激组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:VNS可提高脑外伤昏迷大鼠意识状态,其可能机制为上调PFC及下丘脑部位Orexin-A及OX1R水平,因此VNS有望成为脑外伤后昏迷促醒有效方法。

不同饥饿刺激对下丘脑穹隆周区orexin-A神经元的影响

目的:通过观察下丘脑穹窿周区orexin-A神经元对不同刺激方式的反应特性探索能够激活该系统的高效而适宜的方法。方法:采用禁食、腹腔注射胰岛素和2-DG三种饥饿刺激方式,利用免疫组织化学染色及ELISA检测相结合的方法对大鼠穹隆周区orexin-A神经元的Fos的表达,脑脊液中orexin-A的浓度进行了对比分析。27只SD大鼠随机分为六组,分别进行禁食2 d,腹腔注射胰岛素或生理盐水存活5 h,腹腔注射2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)或生理盐水存活2 h和正常对照处理,动物的饮水量保持正常。结果:三种饥饿刺激引发的Fos表达比较类似,主要集中于下丘脑背内侧核,下丘脑外侧区和下丘脑后区,2-DG组的Fos表达最为浓密。三种刺激对orexin-A神经元的数量无明显影响,但orexin-A/Fos双标细胞数占所有orexin-A阳性细胞数的比例以2-DG组最高,为26%;禁食2 d组次之为21%;胰岛素组最低为14%。禁食组和2-DG组的双标细胞率与胰岛素组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示禁食组脑脊液中orexin-A的含量显著高于对照组23%,而其它两组与对照组相比没有差别。结论:本研究提示orexin-A的功能状态与刺激方式密切相关:急性刺激如2-DG注射适于研究神经元的激活状态,而慢性刺激如禁食适于研究激活后导致的orexin-A表达变化。

禁食不同时段下丘脑穹窿周区orexin-A的表达

目的探讨禁食不同时段大鼠下丘脑穹窿周区orexin-A的表达及是否与摄食有关。方法观察禁食前后大鼠体重变化,采用免疫组织化学染色法观察禁食不同时段下丘脑穹窿周区orexin-A的表达变化,灰度值测量观察各组orexin-A的染色强度。结果大鼠体重随禁食时间的延长而逐渐降低,各组大鼠禁食前后体重变化有统计学差异(P<0.01);Orexin-A主要分布于下丘脑穹窿周区,禁食组orexin-A阳性神经元计数明显多于对照组(P<0.05),但不同禁食组间orexin-A阳性神经元计数比较没有统计学差异(P>0.05);禁食48h组染色强度最深,与对照组和禁食24h、72h组有明显统计学差异(P<0.05)。结论禁食可以促进orexin-A的表达,禁食48h应该是一种理想的促进orexin-A活化的刺激方式,orexin-A系统可能参与摄食及能量代谢的调节。

酸枣仁中斯皮诺素对睡眠剥夺大鼠下丘脑MCH、Orexin-A表达的影响

目的探讨酸枣仁中斯皮诺素对睡眠剥夺大鼠下丘脑黑色素浓集激素(MCH)、食欲素-A(Orexin-A)表达的影响。方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、地西泮组、斯皮诺素组,每组30只,对照组大鼠正常环境下常规饲养,模型组大鼠灌胃给予生理盐水,地西泮组大鼠灌胃给予地西泮(0.8 mg/kg),斯皮诺素组大鼠灌胃给予斯皮诺素(15 mg/kg),剂量10 mL/kg,连续2 d。然后,免疫组化染色法检测大鼠下丘脑MCH、Orexin-A阳性表达,RT-PCR法检测两者mRNA表达,ELISA法检测两者水平。结果与模型组比较,斯皮诺素组MCH阳性表达光密度、面密度、阳性细胞数、mRNA表达、水平显著升高(P<0.01),而Orexin上述指标显著降低(P<0.01)。结论酸枣仁中斯皮诺素可改善睡眠剥夺大鼠睡眠,其机制可能与上调下丘脑MCH表达、下调Orexin表达有关。

Orexin-A对氯胺酮麻醉老年大鼠苏醒的影响

目的观察Orexin-A对老年大鼠氯胺酮麻醉后苏醒及认知功能的影响。方法将55只老年大鼠随机分为空白对照组10只,模型对照组、Orexin-A低剂量组、Orexin-A高剂量组各15只。以100mg/kg氯胺酮腹腔注射建立麻醉模型。麻醉10min后,治疗组侧脑室注入Orexin-A1、4nmol/10μl。对照组注入等量人工脑脊液。观察各组大鼠麻醉后翻正反射持续时间;侧脑室给药前后脑电图δ波相对比的变化;Morris水迷宫检测学习记忆功能。结果氯胺酮麻醉可使老年大鼠学习记忆能力明显下降,Orexin-A能明显缩短麻醉后大鼠翻正反射持续时间,减少δ波的相对比例,并能改善麻醉后老年大鼠的学习记忆能力,以较大剂量效果显著(P<0.05)。结论Orexin-A对氯胺酮麻醉后老年大鼠具有促醒作用,且能明显改善麻醉后大鼠认知功能。

针刺配合药物对脑梗死后失眠症患者血清5-HT、BDNF及Orexin-A水平的影响

目的观察针刺配合药物对脑梗死后失眠症患者血清5-羟色胺(5-HT)、脑源性神经营养因子(BDNF)及食欲素-A(Orexin-A)水平的影响。方法将152例脑梗死后失眠症患者随机分为治疗组和对照组,每组76例,对照组给予右佐匹克隆片睡前口服治疗,治疗组在对照组基础上给予针刺治疗。观察两组治疗前后匹兹堡睡眠质量量表(PSQI)评分、美国国立卫生院神经功能缺损量表(NIHSS)评分、综合医院焦虑抑郁量表(HADS)评分、多导睡眠图(PSG)参数和血清5-HT、BDNF、Orexin-A水平的变化,并比较两组的临床疗效。结果治疗组临床疗效优于对照组(P<0.05),复发率低于对照组(P<0.05)。两组治疗前后PSQI、NIHSS、HADS评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后PSQI、NIHSS及HADS评分均低于对照组(P<0.05)。两组治疗前后总睡眠时间、睡眠潜伏期、REM睡眠时间、觉醒时间、睡眠效率比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后总睡眠时间、REM睡眠时间和睡眠效率高于对照组(P<0.05),睡眠潜伏期、觉醒时间短于对照组(P<0.05)。两组治疗前后血清5-HT、BDNF、Orexin-A比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后血清5-HT、BDNF水平高于对照组(P<0.05),血清Orexin-A水平低于对照组(P<0.05)。结论针刺治疗配合药物可显著提高脑梗死后失眠症患者血清5-HT、BDNF水平,降低血清Orexin-A水平,改善睡眠质量和焦虑抑郁状态,促进神经功能恢复。

糠酸莫米松鼻喷雾剂联合孟鲁司特钠治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征疗效及对血浆Orexin-A水平的影响

目的探讨糠酸莫米松鼻喷雾剂联合孟鲁司特钠治疗阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患儿的疗效及对血浆OrexinA水平的影响。方法选择经多导睡眠监测(PSG)确诊为OSAHS的患儿156例,选择45例正常儿童作为对照组。治疗前,测定两组的Orexin-A水平。试验组患儿应用糠酸莫米松鼻喷雾剂联合孟鲁司特钠治疗3个月后,采用放射免疫测定法测定血浆Orexin-A水平;记录PSG检查得到的呼吸暂停低通气指数(AHI)和最低血氧饱和度(LSaO_2)。结果试验组患儿Orexin-A水平治疗前明显高于对照组患儿,治疗后则明显降低(P<0.05);治疗后,试验组患儿LSaO_2水平明显高于治疗前(P<0.05);OSAHS患儿血浆Orexin-A水平与LSaO_2呈负相关,与AHI呈正相关。结论糠酸莫米松鼻喷雾剂联合孟鲁司特钠治疗OSAHS疗效佳,可降低患儿血浆Orexin-A水平,升高LSaO_2水平。患儿Orexin-A水平与LSaO_2呈负相关,与AHI呈正相关,其有望作为评价OSAHS患儿严重程度的指标之一。

不同刺激方式对大鼠穹窿周区orexin-A表达的形态学研究

目的:Orexin-A是一种来自下丘脑的具有神经兴奋作用的多肽,含orexin-A的神经细胞主要分布于下丘脑穹窿周区,该群神经元与摄食、睡眠、内脏活动等的调控有关。但如何活化该群神经元尚无有效途径。方法:为了搞清该神经元的激活状态和反应特性,本文采用五种不同的刺激方式,利用免疫组织化学染色和灰度测量相结合的方法对大鼠穹窿周区orexin-A的表达进行了分析。动物分为五组,三组动物分别行禁食1,2和3d,另外两组分别腹腔注射胰岛素和2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG),五组动物的饮水量保持正常。结果:五种刺激方式引发的orexin-A表达主要集中于穹窿周区,各组间orexin-A阳性细胞数无明显区别;但进一步灰度分析显示禁食2d组细胞染色最深,与禁食1d组、3d组和对照组相比有明显的统计学差异(P<0.05),胰岛素组和2-DG组与对照组相比没有明显差别。结论:orexin-A的细胞合成与刺激方式密切相关,禁食2d较之其它方式更能促进orexin-A神经元的活化和进一步的生物合成。

不同营养状态儿童血浆orexin-A水平与能量摄入的相关性

目的探讨不同营养状态儿童血浆增食欲素-A水平改变及其与能量摄入的相关性。方法检测42例营养不良组儿童和42例肥胖组儿童空腹外周血中orexin-A水平、体质量指数(BMI)和能量摄入量,并与42例性别、年龄匹配的健康儿童(健康对照组)进行比较,分析orexin-A与BMI、能量摄入的相关性。结果营养不良组儿童血浆orexin-A水平显著高于健康对照组(P<0.05),且orexin-A水平与BMI呈负相关,与总能量、脂肪、蛋白质摄入量均存在正相关,与碳水化合物摄入量呈负相关;肥胖组儿童血浆orexin-A水平显著低于健康对照组(P<0.05),且orexin-A水平与BMI呈负相关,与总能量、脂肪、蛋白质摄入量均呈正相关,与碳水化合物摄入量呈负相关;对照组儿童血浆orexin-A水平与BMI呈负相关,与总能量、脂肪、蛋白质和碳水化合物摄入量均存在正相关(P<0.05)。结论 Orexin-A参与了机体营养状态的调节,orexin-A与能量摄入存在相关性,且在不同的营养状态下作用不同。

Orexin-A对癫痫大鼠学习记忆能力及海马齿状回神经细胞增殖的影响

目的探讨Orexin-A(OXA)对癫痫大鼠学习记忆能力及海马齿状回神经细胞增殖的影响。方法选取健康成年SD大鼠50只,随机分为对照组、PTZ+NS组、PTZ+OXA组、PTZ+U0126组、PTZ+U0126+OXA组,每组10只。选用PTZ(30 mg/kg)腹腔注射造模。对照组和PTZ+NS组注射8μl生理盐水,PTZ+OXA组注射等量1.5 nmol/μl的OXA,PTZ+U0126组注射等量的U0126,PTZ+U0126+OXA组分别注射等量U0126和OXA;注射后恢复饲养7 d后进行水迷宫试验。观察各组大鼠学习记忆能力,并采用免疫荧光染色法检测海马齿状回神经细胞增殖情况。结果与对照组相比,其余四组大鼠的逃避潜伏期明显变长(P<0.01)。PTZ+U0126组逃避潜伏期明显长于PTZ+NS组(P<0.01);PTZ+NS组、PTZ+U0126组、PTZ+U0126+OXA组逃避潜伏期明显长于PTZ+OXA组(P<0.05)。与对照组相比,其余四组大鼠穿越平台的次数、穿越平台所处象限的时间均明显减少(P<0.01);PTZ+OXA组、PTZ+U0126+OXA组大鼠穿越平台象限的次数、穿越平台所处象限的时间均明显多于PTZ+NS组(P<0.01)。PTZ+U0126+OXA组大鼠穿越平台象限的次数、穿越平台所处象限的时间明显少于PTZ+OXA组(P<0.01)。PTZ+U0126组海马齿状回区Brdu+/DCX+细胞数明显低于PTZ+NS组(P<0.01);PTZ+NS组、PTZ+U0126组、PTZ+U0126+OXA组海马齿状回区Brdu+/DCX+细胞数明显低于PTZ+OXA组(P<0.05)。结论 OXA能够通过促进齿状回颗粒细胞的再生改善癫痫大鼠的学习记忆能力,其可能与ERK1/2激活有关。

Orexin-A对癫痫患者认知功能的影响

目的:探讨血清orexin-A在癫痫所致认知功能障碍中的作用。方法:选择80例癫痫患者(癫痫组)和40名健康志愿者(对照组),采用简易精神状态检查(mini-mental state examination,MMSE)量表评价认知功能,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测空腹静脉血中的orexin-A水平。结果:癫痫组认知障碍的发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。癫痫伴认知障碍组的orexin-A水平低于癫痫不伴认知障碍组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。癫痫伴重度认知障碍组orexin-A水平低于癫痫伴中度认知障碍组和癫痫伴轻度认知障碍组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:orexin-A水平降低可能与癫痫患者认知功能的减退有关。

肠缺血/再灌注损伤对Orexin-A蛋白及其mRNA水平的影响

目的研究肠缺血/再灌注(I/R)损伤对血浆及下丘脑O rex in-A水平的影响,探讨O rex in-A在急性炎症反应中的作用。方法建立大鼠肠I/R损伤模型,设立缺血60 m in后不同时间的再灌注损伤组。采用放射免疫分析法测量血浆及下丘脑O rex in-A的蛋白水平,采用RT-PCR检测下丘脑O rex in-A的mRNA表达水平。结果与损伤前自身对照相比,各组损伤后的血浆O rex in-A水平无明显变化(P>0.05);与损伤后假手术组相比,其他各组损伤后的血浆或下丘脑O rex in-A蛋白水平亦无明显变化(P>0.05);与损伤后假手术组下丘脑O rex in-A mRNA表达水平相比,肠缺血60 m in/再灌注30 m in(I60′R 30′)组、I60′R 90′组逐步降低,I60′R 150′组最低,I60′R 240′组、I60′R 360′组逐步回升但仍低于假手术组。结论O rex in-A对肠I/R损伤具有迟缓的应答效应,可能在急性炎症损伤所致的代谢障碍中发挥一定的炎症因子作用。

肥胖儿童血浆中orexin-A的表达

目的探讨肥胖儿童血浆orexin-A的表达改变及其与BMI的相关性。方法肥胖组儿童48例,检测患儿空腹外周血中orexin-A水平、体重指数(BMI),并与48例性别、年龄匹配的健康儿童(健康对照组)进行比较。分析两组orexin-A水平与BMI的相关性。结果肥胖组儿童血浆orexin-A水平显著低于健康对照组(P<0.05)。两组血浆orexin-A水平均与BMI呈负相关(P<0.01)。结论 orexin-A参与了肥胖儿童机体能量代谢的调节,orexin-A与摄食密切相关。

Orexin-A对大鼠海马神经细胞凋亡的影响及机制

目的探讨Orexin-A对大鼠海马神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法提取36只Wistar大鼠的海马神经细胞,培养后随机分为空病毒组、PLCβ1组、PLCβ4组,分别用空病毒和携带目的基因PLCβ1、PLCβ4的慢病毒转染沉默目的基因,各组各自取一半细胞加入Orexin-A(100 nmol/L)培养8 h,用流式细胞术测算各组细胞凋亡指数,Western blotting法检测海马神经细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的表达。结果与不加Orexin-A比较,加Orexin-A后空病毒组、PLCβ4组海马神经细胞凋亡率降低、ERK1/2表达升高(P均<0.05),而PLCβ1组海马神经细胞凋亡率、ERK1/2表达无明显变化(P均>0.05)。结论 Orexin-A可减少大鼠海马神经细胞的凋亡,该作用可能与OX1R/OX2R-Gq-PLCβ1信号通路有关。

Orexin-A对体外培养的大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的:研究Orexin-A对体外培养的海马神经细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:取体外培养的大鼠海马神经细胞分为7组,分别给予0,1.0,10.0,100.0nmol/L及1.0、10.0、100.0μmol/L的Orexin-A培养。另取大鼠海马神经细胞,预先加入Orexin-A受体(OX1R)阻断剂SB334867,然后同法分组及处理。观察海马神经细胞的形态学变化;采用Western Blot、逆转录PCR(RT-PCR)法检测OX1R蛋白和mRNA的表达;原位末端标记染色评价细胞凋亡率;Fura-2/AM荧光比值成像技术测定游离钙离子浓度[Ca2+]i。结果:随着Orexin-A浓度的增大,海马神经细胞凋亡增加(F=137.49,P<0.01),同时呈剂量依赖性地触发[Ca2+]i的升高(F=961.44,P<0.01),但是OX1R蛋白及mRNA的表达无明显变化。SB334867可以部分阻断这种现象。结论:大剂量Orexin-A对体外培养的海马神经细胞有促凋亡作用,其机制可能与增加了细胞内Ca2+浓度蓄积有关。

肠缺血/再灌注损伤对leptin及orexin-A水平的影响

目的研究肠缺血/再灌注(I/R)损伤对外周血及中枢分泌组织leptin及orexin-A水平的影响,探讨leptin及orexin-A在急性炎症反应中的作用。方法建立大鼠肠I/R损伤模型,设立缺血60min后不同时间的再灌注损伤组。采用放射免疫分析法测量血清及脂肪组织leptin、血浆及下丘脑orexin-A蛋白水平的变化,并用逆转录-聚合酶链式反应法检测脂肪组织leptin、下丘脑orexin-AmRNA表达水平的变化。结果与损伤前自身对照相比,缺血60min/再灌注30min组(I60'R30')血清leptin显著降低,I60'R360'组显著增高。与损伤后假手术组(sham)相比,I60'R360'组血清Leptin水平显著增高。与损伤后sham组相比,I60'R30'、I60'R90'组脂肪leptin蛋白水平显著降低,I60'R360'组显著增高。与损伤后Sham组相比,I60'R30'、I60'R240'、I60'R360'组脂肪leptinmRNA表达显著增高,I60'R150'组显著降低。各组损伤前、后的血浆及下丘脑orexin-A蛋白水平无显著性差异。与损伤后sham组相比,I60'R30'、I60'R90'组下丘脑orexin-AmRNA表达逐步降低,I60'R150'组最低,I60'R240'、I60'R360'组逐步回升但仍低于sham组。结论Leptin及orexin-A对肠I/R损伤的应答具有时间依赖效应,leptin比orexin-A的应答较迅速,两者可能在急性炎症反应的能量代谢障碍中发挥一定的作用。

急性脑梗死后失眠患者血浆Orexin-a含量的变化

目的:了解急性脑梗死后失眠患者血浆中Orexin-a的变化分析其与脑梗死后睡眠障碍的相关性,是否参与脑梗死后睡眠障碍的发生及发展,是否可以作为其评估的指标,为临床诊断和防治提供理论依据。方法:对神经四科2015-01~2015-10因脑卒中入院患者进行筛查,以急性脑梗死患者46例为研究对象,按有无失眠的发生将其分为脑梗死后失眠组(25例)和脑梗死后未失眠组(21例),检测两组患者Orexin-a水平。结果:急性脑梗死后失眠组orexin-a水平较未失眠组增高,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Orexin-a可能是急性脑梗死后睡眠障碍的一个生化指标,可能参与脑梗死后睡眠障碍的发生与发展。

ERK1/2激活物Orexin-A对癫痫大鼠学习记忆及海马神经细胞增殖的影响

目的探讨ERK1/2激活物orexin-A(OXA)对戊四氮(PTZ)点燃大鼠空间学习记忆功能及海马齿状回神经细胞增殖的影响。方法 60只大鼠随机分为对照组、PTZ+生理盐水(NS)组、PTZ+OXA组、PTZ+U0126组和PTZ+U0126+OXA组,每组12只。采用腹腔注射PTZ(35 mg/kg)制模。制模后,对照组及PTZ+NS组大鼠注射8μl生理盐水,PTZ+OXA组大鼠注射8μl OXA,PTZ+U0126组注射8μl U0126,PTZ+U0126+OXA组注射8μl U0126和OXA 8μl。通过Morris水迷宫试验观察各组大鼠的空间学习记忆能力,并用BrdU腹腔注射和免疫荧光共聚焦技术检测海马齿状回区BrdU和BrdU/双皮质素(DCX)的阳性表达。结果 PTZ+NS组、PTZ+OXA组、PTZ+U0126组、PTZ+U0126+OXA组大鼠逃避潜伏期显著长于对照组(均P<0.01)。PTZ+NS组、PTZ+U0126组及PTZ+U0126+OXA组大鼠逃避潜伏期显著长于PTZ+OXA组(P<0.05~0.01)。与PTZ+NS组比较,PTZ+OXA组、PTZ+U0126+OXA组大鼠穿越平台象限的次数增加,平台所在象限的游泳时间延长(均P<0.01);而PTZ+U0126组大鼠穿越平台象限的次数及平台所在象限的游泳时间均减少(均P<0.01)。PTZ+U0126+OXA组大鼠穿越平台象限的次数显著少于、平台所在象限的游泳时间短于PTZ+OXA组(均P<0.01)。PTZ+NS组、PTZ+U0126组及PTZ+U0126+OXA组大鼠海马齿状回区BrdU+/DCX+细胞数少于PTZ+OXA组(P<0.05~0.01)。结论 OXA可通过促进齿状回颗粒细胞的再生改善癫痫大鼠的空间学习记忆能力,这可能与ERK1/2激活有关。

长时连续作业对大鼠下丘脑及背缝核orexin-A和受体的影响

目的研究长时连续作业对大鼠促觉醒肽orexin- A及受体表达的影响。方法使用长时连续作业动物模型,采用免疫组织化学方法结合图像分析技术测定orexin -A及受体OX1R在下丘脑外侧区,背缝核的变化。结果经过长时连续作业训练后,跑台组与对照组相比,orexin- A阳性细胞在下丘脑外侧区、orexin- A阳性纤维在背缝核及OX1R在背缝核均显著减少。结论长时连续作业可造成促觉醒肽orexin- A和OX1R的表达降低。

Orexin-A通过激活OX_(1)R、OX_(2)R和非Ca^(2+)依赖的PKC抑制新生大鼠脊髓腹角神经元的γ-氨基丁酸电流

目的研究orexin-A对脊髓腹角神经元促离子型γ-氨基丁酸(GABA)受体功能的影响及其机制。方法选取7~12 d的新生SD大鼠,麻醉后分离出含腰骶膨大的脊髓节段并切片。使用木瓜蛋白酶(Papain,0.18 g/30 mL人工脑脊液)消化切片并孵育40~60 min。显微镜下保留腹角,使用抛光的不同口径的巴斯德吸管急性机械分离单个细胞,待细胞贴壁后,应用膜片钳记录联合药理学方法对状态良好的神经元开展研究。在电压钳模式下记录,结合预处理给药方式,应用GABA受体激动剂γ-氨基丁酸记录在脊髓腹角神经元诱发的电流,给予orexin-A观察其对GAB A电流的调制作用,先后给予OX1R选择性拮抗剂SB334867、OX2R选择性拮抗剂TCSOX229、PKC抑制剂Bis-Ⅳ、PKC激动剂PMA、PKA抑制剂Rp-cAMP、Ca2+螯合剂BAPTA等药物分析orexin-A对GABA电流调制的作用机制。结果分离的脊髓腹角神经元形态良好,胞体形状多样,表面光洁,立体感较强且突起较长;给予orexin-A后,GABA诱发的电流幅值被显著制抑(P<0.001,n=49),抑制率为(67.48±12.50)%;同时给予SB334867和TCSOX229可完全取消orexin-A对GABA电流的抑制作用(P=0.93,n=6);单独应用SB334867(P=0.001,n=8)或TCSOX229(P=0.02,n=8)均部分解除orexin-A对GAB A电流的压抑作用;给予Bis-Ⅳ后,orexin-A不再压抑GAB A电流(P=0.31,n=5);PMA可模拟orexin-A的作用,显著抑制GAB A电流,抑制率为(60.79±10.94)%,在此基础上,orexin-A不能进一步压抑GAB A电流(P=0.15,n=6)。给予Rp-cAMP后,orexin-A仍可显著压抑 GABA 电流(P=0.001,n=5)。在无 Ca2+细胞外液(P=0.004,n=8)或胞内应用BAPTA (P=0.04,n=7)时,orexin-A对GABA电流的压抑作用不受影响。结论 Orexin-A抑制脊髓腹角神经元的GABA电流,该效应可能经由OX1R和OX2R共同介导以及非Ca2+依赖的PKC信号通路的参与。