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细胞质雄性不育相关基因orf224的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:16
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作者 王永飞 马三梅 +2 位作者 张鲁刚 王鸣 郑学勤 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第4期9-12,共4页
利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca... 利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca MV 35 S启动子和 NOS终止子之间。经 PCR和酶切鉴定 ,得到了 orf 2 2 4基因的植物表达载体 p 展开更多
关键词 细胞质 雄性不育 相关基因 orf224 克隆 植物 表达载体
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甘蓝型油菜Polima和Shan 2A CMS的orf224基因的序列分析 被引量:11
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作者 林宝刚 黄海 +1 位作者 张龙 张明龙 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1282-1286,共5页
目的油菜PolimaCMS的线粒体基因组中含有orf224的4.5kb的区段是与细胞质雄性不育相关的,验证Shan2ACMS与PolimaCMS在orf224的差异性。方法根据orf224设计5′端和3′端的1对特异引物,对PolimaCMS和Shan2ACMS的线粒体基因组进行PCR扩增,在... 目的油菜PolimaCMS的线粒体基因组中含有orf224的4.5kb的区段是与细胞质雄性不育相关的,验证Shan2ACMS与PolimaCMS在orf224的差异性。方法根据orf224设计5′端和3′端的1对特异引物,对PolimaCMS和Shan2ACMS的线粒体基因组进行PCR扩增,在Shan2A中得到与orf224同源的DNA片段,对其测序分析。结果两序列均由675个碱基组成,核苷酸同源性为99.3%。结论证实Shan2ACMS与PolimaCMS的orf224基因上存在差异,不能简单的从两者具有共同的恢保关系上说明Shan2ACMS就是已知的PolimaCMS。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 Polima不育系 Shan2A不育系 orf224 测序
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大白菜orf224基因植物表达载体的构建及遗传转化 被引量:6
3
作者 范爱丽 张鲁刚 +2 位作者 惠麦侠 张明科 张战凤 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1296-1302,共7页
为了创制新的大白菜雄性不育材料,双酶切重组质粒pMD18-T-CMS7311-orf224和表达载体pWR306后,将CMS7311-orf224基因与线性表达载体pWR306进行定向连接,构建了细胞质雄性不育线粒体基因CMS7311-orf224的植物表达载体pWR-CMS7311-orf224,... 为了创制新的大白菜雄性不育材料,双酶切重组质粒pMD18-T-CMS7311-orf224和表达载体pWR306后,将CMS7311-orf224基因与线性表达载体pWR306进行定向连接,构建了细胞质雄性不育线粒体基因CMS7311-orf224的植物表达载体pWR-CMS7311-orf224,通过酶切和PCR验证pWR-CMS7311-orf224载体构建正确.采用快速冻融法,将表达载体导入农杆菌EHA105,转化大白菜材料06J28,对转化植株的GUS、PCR和RT-PCR检测表明,获得了2个大白菜转基因植株. 展开更多
关键词 大白菜 orf224 植物表达载体 遗传转化
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orf224基因与芸薹属种间杂种雄性不育性的相关性 被引量:5
4
作者 王永飞 马三梅 +1 位作者 张鲁刚 王鸣 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第5期36-39,共4页
orf224是在甘蓝型油菜(Brassica napus)波里马(Polima)胞质中发现的一个与细胞质雄性不育(Cytoplasmicmale sterility,CMS)相关的线粒体基因.大白菜(B.campestrisssp.pekinensis)CMS系CMS3411-7是由Polima不育系和大白菜自交系3411-7杂... orf224是在甘蓝型油菜(Brassica napus)波里马(Polima)胞质中发现的一个与细胞质雄性不育(Cytoplasmicmale sterility,CMS)相关的线粒体基因.大白菜(B.campestrisssp.pekinensis)CMS系CMS3411-7是由Polima不育系和大白菜自交系3411-7杂交后,以3411-7为轮回亲本经多代回交选育得到的.以CMS3411-7为母本分别与小白菜(B.campestrisssp.chinensis)自交系S71、大白菜自交系K1和菜心(B.campestrisssp.chinensisvar.utilis)自交系B1杂交得到3个杂交种CS71、CK1和CB1.以CMS3411-7、CS71、CK1和CB1为材料,以Polima为对照,利用多聚酶链式反应(Polymer-ase chain reaction,PCR)技术与田间实验育性观察相结合的方法,研究了orf224与几个芸薹属种间杂种雄性不育性之间的相关性.结果显示:在这4个材料中尽管均含有orf224基因,但CMS3411-7和CB1表现为雄性不育,CS71和CK1表现为雄性可育.这就表明,orf224虽是CMS的因子,但它必须和核基因进行互作才能发挥作用. 展开更多
关键词 orf224基因 细胞质雄性不育 PCR 芸薹属 杂种
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大白菜CMS96细胞质雄性不育分子特性研究 被引量:12
5
作者 张德双 张凤兰 +4 位作者 王永健 方智远 余阳俊 赵岫云 徐家炳 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第4期545-552,共8页
大白菜CMS96细胞质不育系是由大白菜株系与甘蓝型油菜细胞质不育源杂交、多代回交后获得的。该不育系生长势旺、不育性稳定,不育度和不育株率均为100%,蜜腺正常,在大白菜杂种一代生产中具有广阔的应用前景。为了定位大白菜CMS96细胞质... 大白菜CMS96细胞质不育系是由大白菜株系与甘蓝型油菜细胞质不育源杂交、多代回交后获得的。该不育系生长势旺、不育性稳定,不育度和不育株率均为100%,蜜腺正常,在大白菜杂种一代生产中具有广阔的应用前景。为了定位大白菜CMS96细胞质不育所属的类型和获得其不育有关的特异序列,依据atp9、coxI、orf138和orf224保守序列设计4对引物,对3组11份大白菜材料线粒体DNA进行PCR扩增,每组材料内包含同核异质PolCMS、OguCMS、CMS96三种大白菜不育系和一种共用保持系。结果表明,atp9和coxI引物在所有材料中均有扩增产物,供试材料间没有差异;而orf138和orf224引物扩增产物存在差异。orf138引物仅在全部OguCMS和CMS96不育系中扩增出309bp特异带,而保持系和PolCMS不育系没有扩增产物;orf224引物仅在所有PolCMS中扩增出689bp特异带,而保持系、OguCMS和CMS96不育系没有扩增产物。同时,对保持系和不育系花组织mRNA进行RT-PCR分析,进一步验证了orf138和orf224引物扩增产物的特异性和一致性。同源性分析结果表明,利用orf138引物所获得的309bp大白菜mtDNA特异片段均与萝卜OguCMS、甘蓝型油菜OguCMS萝卜体细胞杂种所具有的Oguorf138高度同源,二者有172个核苷酸完全相同,有58个氨基酸完全相同;orf224引物所获得的689bp大白菜mtDNA特异片段与甘蓝型油菜的Polorf224高度同源,二者有677个核苷酸完全相同,有225个氨基酸完全相同,同源性均达到100%。初步认为大白菜OguCMS和CMS96不育系具有相似性,OguCMS萝卜所具有的orf138是导致二者不育的原因;Pol甘蓝型油菜所具有的Polorf224是导致大白菜PolCMS不育的原因。 展开更多
关键词 大白菜 细胞质不育 CMS96 线粒体DNA ORF138 orf224 RT-PCR 同源性比较
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大白菜胞质雄性不育系育性相关线粒体DNA片断的克隆及*序列分析 被引量:7
6
作者 张战凤 张鲁刚 +2 位作者 王绮 惠麦侠 张明科 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期112-115,共4页
利用PCR技术从大白菜(Brassica campestrisL.ssp.Penkinsis)新型胞质雄性不育材料CMS7311的线粒体基因组中扩增出与细胞质雄性不育相关的片断,并克隆测序。序列分析表明,该片断和报道的Poli-ma-orf224序列完全相同,没有发生变异,说明CMS... 利用PCR技术从大白菜(Brassica campestrisL.ssp.Penkinsis)新型胞质雄性不育材料CMS7311的线粒体基因组中扩增出与细胞质雄性不育相关的片断,并克隆测序。序列分析表明,该片断和报道的Poli-ma-orf224序列完全相同,没有发生变异,说明CMS7311的不育机理与PolimaCMS相似,也反映了细胞质雄性不育变异的保守性。 展开更多
关键词 大白菜 CMS7311 细胞质雄性不育(CMS) 线粒体DNA(mtDNA) orf224
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利用RNA指纹技术分析大白菜胞质雄性不育相关基因的差异表达 被引量:3
7
作者 张战凤 张鲁刚 +2 位作者 王绮 惠麦侠 张明科 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1280-1286,共7页
采用改进的RNA指纹技术(RAP-PCR)对两套大白菜胞质雄性不育材料及其杂种F1花蕾的总RNA进行了分析,通过对186条随机引物的筛选,获得4个重复性较好的差异片段S47-412,S93-622,S176-343,S199-904,并对其克隆、测序。根据各差异条带的测序... 采用改进的RNA指纹技术(RAP-PCR)对两套大白菜胞质雄性不育材料及其杂种F1花蕾的总RNA进行了分析,通过对186条随机引物的筛选,获得4个重复性较好的差异片段S47-412,S93-622,S176-343,S199-904,并对其克隆、测序。根据各差异条带的测序结果合成长引物进行验证,S47,S93所对应的差异消失,而S176,S199长引物验证的结果与RAP-PCR相似,序列分析表明:S176-343,S199-904两差异片段均和油菜Polima不育胞质线粒体基因组orf224/atp6位点有着极高的同源性,两差异片段序列部分重叠,这说明两差异片段可能和大白菜胞质雄性不育有很高的相关性。 展开更多
关键词 RNA指纹 大白菜 细胞质雄性不育(CMS) 差异显示 orf224/atp6
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胞质雄性不育相关基因的克隆及其表达分析 被引量:4
8
作者 邓晓辉 张蜀宁 +1 位作者 侯喜林 韩建明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1859-1863,共5页
根据GenBank中orf224和atp6基因的保守序列设计特异引物,对不结球白菜Pol胞质雄性不育系的基因组DNA进行特异扩增,获得了Pol胞质雄性不育的特异基因orf224和atp6的DNA序列.用Blastn在GenBank中进行同源性比对分析,发现不结球白菜orf224c... 根据GenBank中orf224和atp6基因的保守序列设计特异引物,对不结球白菜Pol胞质雄性不育系的基因组DNA进行特异扩增,获得了Pol胞质雄性不育的特异基因orf224和atp6的DNA序列.用Blastn在GenBank中进行同源性比对分析,发现不结球白菜orf224c和atp6c基因与已报道的orf224和atp6基因的同源性高达100%,在GenBank中的登录号依次为DQ400846、DQ412559.运用半定量RT-PCR对orf224c基因在不同器官中的表达水平进行分析,结果表明:不育系花期叶片中该基因的表达量比长度小于0.5 mm蕾和雄蕊中的明显低,在后2个器官中的表达量无明显差异;而在保持系的上述3个器官中的表达量无明显差异.该结果显示orf224基因表达上调与孢原细胞分化受阻相关. 展开更多
关键词 不结球白菜 胞质雄性不育 orf224 ATP6 半定量RT-PCR
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大白菜细胞质雄性不育的分子生物学研究 被引量:5
9
作者 王永飞 王鸣 郑学勤 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期63-64,共2页
关键词 大白菜 细胞质雄性不育 分子生物学 表达载体 RAPD orf224
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橙色大白菜遗传转化体系的初步建立 被引量:2
10
作者 范爱丽 张鲁刚 《长江蔬菜》 2012年第18期10-14,共5页
以06J28橙色大白菜子叶段为外植体,通过根癌农杆菌介导CMS7311-orf224基因,探讨了潮霉素、头孢霉素、预培养时间、农杆菌浓度、感菌时间和共培养时间等因素对橙色大白菜遗传转化的影响。试验结果表明,子叶段预培养2~3 d后,在OD600值为0.... 以06J28橙色大白菜子叶段为外植体,通过根癌农杆菌介导CMS7311-orf224基因,探讨了潮霉素、头孢霉素、预培养时间、农杆菌浓度、感菌时间和共培养时间等因素对橙色大白菜遗传转化的影响。试验结果表明,子叶段预培养2~3 d后,在OD600值为0.3~0.5的农杆菌EHA-105菌液中侵染5 min,再共培养2~3 d,在培养基中加入5 mg/LHyg(抗性筛选)和500 mg/L Cef(脱菌)可得到转化植株。试验初步建立了橙色大白菜遗传转化体系,为大白菜种质资源创新奠定了基础。 展开更多
关键词 橙色大白菜 CMS7311-orf224基因 遗传转化
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油菜新雄性不育系Xin1的不育性与恢复性 被引量:2
11
作者 王桂荣 林宝刚 +3 位作者 邵奇 张龙 李小白 张明龙 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期177-180,共4页
本文比较了新不育系Xin1 CMS(cytoplsmic male sterility)与我国主要的细胞质雄性不育类型Pol(Polima)CMS、Shan2A CMS、Ogu CMS的花器形态,F1代育性情况及其恢保关系,研究分析了orf224基因Xin1 CMS与Pol CMS等在线粒体基因组上的差异... 本文比较了新不育系Xin1 CMS(cytoplsmic male sterility)与我国主要的细胞质雄性不育类型Pol(Polima)CMS、Shan2A CMS、Ogu CMS的花器形态,F1代育性情况及其恢保关系,研究分析了orf224基因Xin1 CMS与Pol CMS等在线粒体基因组上的差异。结果表明新不育系Xin1 CMS花器形态与Pol CMS、Shan2A CMS和Ogu CMS的花器有显著差别。与RF01杂交,得到有正常结构的花器,花粉生活力为90.8%。所试26个测交材料中,有13对(50%)测交F1表现出育性反应不同,在14个Pol CMS和Shan2A CMS的保持系测交Xin1 CMS的F1中,6个Pol CMS和Shan2A CMS的恢复系测交Xin1 CMS的F1中,有5个材料能保持Xin1 CMS,有1个表现为半不育,1个材料能半恢复Xin1 mtRNA CMS。测交结果表明Xin1 CMS与Pol和Shan2A的恢保关系不同。对新不育系Xin1、Polima和Ogu的orf224基因的扩增结果表明Xin1有1条与Pol相同的谱带,缺失Pol的另一条谱带;说明Xin1 CMS是不同于Pol CMS的新不育系。 展开更多
关键词 油菜细胞质雄性不育 花器形态 恢保关系 线粒体DNA orf224基因
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甘蓝型油菜细胞质雄性不育系301A线粒体不育基因片段分析 被引量:2
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作者 梅德勇 董振生 郭永华 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期894-899,共6页
提取细胞质雄性不育系301A、212A和陕3A及其共同保持系中双2号线粒体DNA,根据已报道的Polima油菜细胞质雄性不育相关基因orf224序列设计引物,对3种不同来源的线粒体DNAPCR产物进行分析.结果显示,这3种甘蓝型油菜细胞质雄性不育材料所获... 提取细胞质雄性不育系301A、212A和陕3A及其共同保持系中双2号线粒体DNA,根据已报道的Polima油菜细胞质雄性不育相关基因orf224序列设计引物,对3种不同来源的线粒体DNAPCR产物进行分析.结果显示,这3种甘蓝型油菜细胞质雄性不育材料所获得片段序列完全一致,且与已报道的Polima油菜线粒体中细胞质雄性不育相关基因orf224序列完全相同.研究表明,不育材料301A从分子角度讲属于Polima系统,不育系301A、212A和陕3A线粒体中与细胞质雄性不育相关线粒体基因片段orf224具有高度同源性. 展开更多
关键词 orf224 线粒体DNA 细胞质雄性不育
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甘蓝细胞质雄性不育类型的分子鉴定 被引量:1
13
作者 陈烨丽 陈学好 +2 位作者 陈锦秀 缪体云 薄天岳 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期19-22,共4页
为鉴定几种来源不同的甘蓝细胞质雄性不育材料的类型,获得与其不育性状相关的特异序列,基于同源序列的候选基因法,通过检索NCBI核苷酸及蛋白质数据库获得orf138和orf224开放阅读框序列,依据其保守序列设计2对引物,对甘蓝的5个不育系及... 为鉴定几种来源不同的甘蓝细胞质雄性不育材料的类型,获得与其不育性状相关的特异序列,基于同源序列的候选基因法,通过检索NCBI核苷酸及蛋白质数据库获得orf138和orf224开放阅读框序列,依据其保守序列设计2对引物,对甘蓝的5个不育系及其保持系进行PCR扩增。orf138引物在5个甘蓝雄性不育系中均扩增出749 bp的片段,同源性比对发现这5个不育材料的特异片段与萝卜Ogu CMS所具有的Oguorf138基因同源度达100%,表明这几个来源不同的甘蓝细胞质不育材料同属萝卜细胞质不育类型。 展开更多
关键词 甘蓝 细胞质雄性不育 ORF138 orf224
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红菜薹温敏型胞质雄性不育相关基因的克隆与表达分析 被引量:1
14
作者 邓晓辉 邱正明 +1 位作者 聂启军 朱凤娟 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第11期2636-2639,共4页
根据GenBank中orf224和atp6基因的保守序列设计特异引物对红菜薹温敏型(Pol)胞质雄性不育系的基因组DNA进行特异扩增,获得了红菜薹Pol胞质雄性不育特异基因orf224p和atp6p的DNA序列,红菜薹orf224p和atp6p基因与已报道的orf224和atp6基... 根据GenBank中orf224和atp6基因的保守序列设计特异引物对红菜薹温敏型(Pol)胞质雄性不育系的基因组DNA进行特异扩增,获得了红菜薹Pol胞质雄性不育特异基因orf224p和atp6p的DNA序列,红菜薹orf224p和atp6p基因与已报道的orf224和atp6基因的同源性高达100%。运用半定量RT-PCR对atp6p基因在不同器官中的表达水平进行了分析。结果表明,不育系花期叶片中该基因的表达量比蕾(长度小于0.5mm)和雄蕊中的明显低,在后2个器官中的表达量无明显差异;而在保持系的上述3个器官中的表达量无明显差异。该结果显示,atp6p基因表达上调与孢原细胞分化受阻相关。 展开更多
关键词 红菜薹 胞质雄性不育 orf224 ATP6 半定量RT-PCR
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油菜Polima和陕2A细胞质雄性不育系相关基因的序列比较 被引量:11
15
作者 王永飞 马三梅 +3 位作者 王鸣 郑学勤 谷茂 胡胜武 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第18期1559-1563,共5页
orf224是在油菜Polima胞质中发现的一个与细胞质雄性不育相关的线粒体基因. 陕2A不育系则是我国第一个大面积推广的杂交油菜品种“秦油2号”的亲本. 以Polima和陕2A的基因组DNA为模板, 通过合成5′和3′端一对特异引物, 利用多聚酶链式... orf224是在油菜Polima胞质中发现的一个与细胞质雄性不育相关的线粒体基因. 陕2A不育系则是我国第一个大面积推广的杂交油菜品种“秦油2号”的亲本. 以Polima和陕2A的基因组DNA为模板, 通过合成5′和3′端一对特异引物, 利用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)从两个不育系的基因组DNA中都扩增出了与orf224同源的DNA片段, 将其克隆到pGEM-T Easy载体上进行序列测定. 测序结果表明:两序列均由675个核苷酸组成, 编码224个氨基酸组成的多肽, 两序列的核苷酸及推导出的氨基酸同源性分别为99.9%和99.6%, 在 + 398处两者有一个碱基的差异(AAC→AGC)和一个氨基酸的差异(Asn→Ser). 从而证实了Polima和陕2A为线粒体上同一座位的不同等位基因的差异. 展开更多
关键词 油菜 Polima不育系 陕2A不育系 细胞质雄性不育 orf224-1 线普体基因 基因序列 杂种优势
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Sequence analysis of the gene correlated with cytoplasmic male sterility (CMS) in rape-seed (Brassica napus) Polima and Shaan 2A 被引量:7
16
作者 WANG Yongfei Ma Sanmei +3 位作者 WANG Ming ZHENG Xueqin GU Mao HU Shengwu 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2002年第2期122-126,共5页
orf224 is a CMS-related mitochondrial gene discovered in Polima cytoplasm. Shaan 2A CMS line is the parent of the first rapeseed hybrid cultivar Qinyou No. 2 that has been grown in many regions of China. In this work,... orf224 is a CMS-related mitochondrial gene discovered in Polima cytoplasm. Shaan 2A CMS line is the parent of the first rapeseed hybrid cultivar Qinyou No. 2 that has been grown in many regions of China. In this work, genomic DNA of Polima CMS line and Shaan 2A CMS line were used as templates, two primers of specific oligonucleo-tides at 5’ and 3’ ends were used, PCR was performed, the amplification fragments were cloned into pGEM-T Easy vectors and DNA sequences were determined. The CMS-associated gene, orf224-1 present in Shaan 2A CMS line, has a sequence highly homologous to the orf224 of the Polima CMS line, except for one nucleotidc at position +398. There were only one base (AAC→AGC) and one amino acid (Asn→Ser) differences between the two. The homologies of the two sequences in nucleotide and amino acid were 99.9% and 99.6%, respectively. It is concluded that orf224 in Polima CMS line and orf224-1 of Shaan 2A CMS line are the allele at the same locus in mitochondria. 展开更多
关键词 rapeseed (Brassica napus) POLIMA CMS LINE Shaan 2A CMS LINE cytoplasmic male STERILITY (CMS) orf224 orf224-1.
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