七氟醚预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用:线粒体K_(ATP)通道的作用

利用离体海马脑片缺氧无糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤模型,探讨七氟醚预处理对神经细胞的保护作用及陔作用与线粒体内膜ATP敏感钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channels,mitoK_(ATP)channels)的关系,随机将脑片用2%、4%、6%七氟醚,以及6%七氟醚复合mitoK_(ATP)通道阻滞剂5-羟基奎酸盐(5-hydroxydecanoic acid,5-HD)预处理30min,观察OGD损伤14min复氧1h期间顺向群峰电位(orthodromic population spike,OPS)的变化,并应用透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果表明,与单纯OGD组相比,七氟醚预处理可使海马脑片OPS消失时间明显延长(P＜0．01),使OPS明显恢复,其中4%、6%七氟醚组的恢复率均为71．4%(P＜0．05 vs OGD),相应恢复程度为(61．0±42．3)%和(78．7±21．1)%(P＜0．01),而且6%七氟醚的保护作用可被5-HD取消。OGD组的海马CA1区锥体细胞明显水肿,核膜皱缩、破裂,染色质聚集,线粒体肿胀畸形,嵴断裂或消失,而4%和6%七氟醚组仅见海马CA1区锥体细胞轻度水肿,核膜皱缩不明显,染色质均匀,线粒体轻度肿胀。结果提示,七氟醚预处理对大鼠海马脑片OGD损伤有一定的保护作用,且七氟醚对神经细胞的保护作用与激活mitoK_(ATP)通道有关。

人参皂甙Rb3抗缺血低氧性脑损伤及其机制的研究

目的:利用整体动物、离体海马脑片、原代培养的海马神经细胞作为实验对象,研究人参皂甙Rb3抗缺血低氧性脑损伤作用及相关机制。方法:①在密闭三角烧瓶中观察小白鼠低氧存活时间。②在离体海马脑片上观察顺向群锋电位(OPS)的恢复率、恢复程度及低氧损伤电位(HIP)出现率。③低压舱作为全脑低氧模型,采用NADPH-d法,观察一氧化氮合酶(NOS)阳性细胞数、平均光密度值。④采用原代培养海马神经细胞低氧模型,观察神经细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率及总NOS、结构型一氧化氮合酶(cNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性。结果:①小白鼠低氧存活时间人参皂甙Rb3组较正常组明显延长,并具有剂量依赖性,以10 mmol/L组最为显著。②人参皂甙Rb3对海马脑片缺血时CA1区诱发场电位的影响:对照组海马脑片模拟缺血时全部出现HIP,复氧供糖1h后OPS恢复率为0%,OPS恢复程度平均为缺血前的5.42%。使用人参皂甙Rb3后,HIP出现率明显下降,复氧供糖1 h后OPS恢复率、OPS恢复程度均增加,以60μmol/L作用最为显著。③人参皂甙Rb3使海马CA1区锥体细胞层NOS阳性细胞数、平均光密度值下降。④人参皂甙Rb3能使细胞外液中LDH的漏出减少、总NOSi、NOS活性下降。结论:人参皂甙Rb3对缺血低氧性脑损伤有保护作用,并具有剂量依赖性,作用机制可能与降低低氧损伤时细胞膜通透性,减少NOS表达,抑制NOS的活性,尤其是诱导型NOS活性有关。

低温对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用及其与Glu受体的关系

目的:探讨低温对离体大鼠海马脑片缺氧无糖(oxygenandglucosedeprivation,OGD)损伤的保护作用及其机制。方法:①观察大鼠海马脑片在OGD条件下顺向群峰电位(orthodromicpopulationspike,OPS)的变化及温度对它的影响。②观察谷氨酸(Glu)对海马脑片OPS的影响及低温的抗Glu毒性作用。并在人工脑脊液(ACSF)中分别加入GABA R的特异性阻滞剂bicuculline(BMI)和NMDA R的特异性阻滞剂D()2Amino5phospho nopentanoicAcid(AP5)或加入BMI和非NMDA R阻滞剂6,7Dinitroquinoxaline2,3(1H,4H)dione(CNQX)来观察低温对海马脑片OGD损伤保护作用的突触后受体机制。③观察OGD1h后海马CA1区锥体细胞超微结构的变化及低温对其的影响。结果:①OGD可以使海马脑片OPS迅速降低并很快消失,14min后复氧供糖OPS极少恢复。低温(32℃、25℃)能使OPS消失时间明显延长,复氧供糖后OPS恢复良好。25℃其作用优于32℃。②2mmol/L Glu使海马脑片OPS迅速消失,洗出后难以恢复。低温(32℃、25℃)能显著改善去Glu1h后OPS的恢复。ACSF中加入BMI+CNQX和BMI+AP5均对25℃低温处理28min的脑保护作用没有影响。③OGD1h后CA1区锥体细胞水肿严重,胞浆内细胞器变性坏死脱失,线粒体肿胀,脊呈空泡状。低温(25℃)组细胞核膜规则,线粒体轻度肿胀。结论:低温有显?

低温对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用及其机制

目的 利用离体海马脑片孵育液和电生理学技术研究低温对脑缺氧 /无糖损伤的保护作用及其机制。方法 (1)观察大鼠海马脑片在缺氧 /无糖条件下顺向群峰电位 (orthodrom ic population spike,OPS)的变化及温度对它的影响 ;(2 )用高效液相 (high- performance liquid chromatography,HPL C)荧光法检测温度对缺氧 /无糖导致的海马细胞外兴奋性 /抑制性氨基酸 (excitabilitory and inhibitory amino acid,EAA/ IAA)水平变化的影响。结果 (1) 37℃组海马脑片缺氧 /无糖时缺氧损伤电位 (hypoxic injury potential,HIP)出现率为 87.5 % (7/ 8) ,复氧 /供糖1h后 OPS恢复率为 12 .5 % (1/ 8)。低温组 (32℃、2 5℃ ) OPS消失时间和 HIP出现时间明显减少 (P<0 .0 1) ,复氧 /供糖 1h后 OPS恢复程度 (41%± 34%、79%± 33% )与 37℃组 (7.5 %± 2 1.2 % )比较有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,而这 3项指标 2 5℃优于 32℃ ;(2 ) 37℃组缺氧 /无糖时 ,EAA和 IAA比对照组均显著增加 (P<0 .0 1) ,兴奋性毒性指数 (excitory toxicity index,ETI)显著上升 (P<0 .0 1)。复氧后各氨基酸水平均有所下降。而低温组缺氧 /无糖导致的谷氨酸 (Glu)、天门冬氨酸 (Asp)和甘氨酸 (Gly)升高显著减少 (P<0 .0 1) ,GABA却随着复氧时间的?

人参皂甙Rb_1对大鼠海马脑片缺血损伤的保护作用

目的 研究人参皂甙 Rb1 对脑缺血损的保护作用及其机制。方法 实验利用离体海马脑片模型 ,结合电生理学技术进行研究 :(1)观察大鼠海马脑片在缺血条件下顺向群峰电位 (orthodrom ic population spike,OPS)的变化及人参皂甙 Rb1 对它的影响。 (2 )观察谷氨酸对海马脑片 OPS的影响及人参皂甙 Rb1 抗谷氨酸毒性作用。结果 (1)使用人参皂甙 Rb1 (6 0 0 μm ol/ L)后 ,可使缺氧损伤电位 (hypoxic injury potential,HIP)出现率明显减少 ,OPS恢复率和 OPS恢复程度与对照组比较有显著性差异。 (2 )使用人参皂甙 Rb1 (6 0 0 μm ol/ L)后 ,OPS恢复率和OPS恢复程度与对照组比较有显著性差异。结论 人参皂甙 Rb1 有明显的抗脑缺血损伤作用 ,其作用机制与抗谷氨酸的神经毒性作用有关。

丙泊酚对缺氧大鼠海马脑片诱发电位的影响

目的采用离体海马脑片缺氧模型,观察丙泊酚对缺氧大鼠海马脑片诱发电位的影响。方法用细胞外记录方法,电极刺激海马CA3区谢弗侧支,在CAl锥体细胞层记录诱发电位。观察丙泊酚对缺氧海马脑片诱发电位———顺向群峰电位(OPS)和缺氧损伤电位(HIP)的影响。大鼠海马脑片随机分为4组,每组8个脑片。缺氧组:脑片用缺氧无糖的人工脑脊液(ACSFOGD)灌流14 min,实施缺氧过程;药物组分为P1、P5和P15组:在ACSFOGD灌流液中分别含1,5和15μmol.L-1的丙泊酚。结果缺氧组OPS消失时间为(186±26)s,在缺氧10 min左右,均出现HIP,持续时间为(113±16)s;恢复供氧后,OPS恢复率和恢复幅度分别为25%和(30±23)%。与缺氧组相比,P5及P15组OPS消失时间向后推迟,OPS恢复率和恢复幅度都有增加;并且HIP出现率下降,其出现时间明显延后、持续时间显著增加。而P1组各项指标与缺氧组相比,无明显差异。结论丙泊酚能改善缺氧海马脑片细胞外记录电生理指标,提示对脑缺氧损伤有保护作用。

人参皂甙Rb1抗脑缺血损伤作用的实验研究

目的研究人参皂甙Rb1对脑缺血损伤的保护作用。方法观察大鼠海马脑片在缺血条件下顺向群峰电位(orthodromic population spike，OPS)的变化及人参皂甙Rb1对它的影响。结果使用人参皂甙Rb1(600μmol／L)后，可使缺氧损伤电位(hypoxic injury potential，HIP)发生率明显减少(P<0．01)，OPS恢复率和OPS恢复程度与对照组比较有显著性差异(P<0．05)。结论人参皂甙Rb1有明显的抗脑缺血损伤作用。

藏药合剂抗脑缺血损伤作用的研究

目的 :观察藏药合剂对大鼠海马脑片缺血性损伤的保护作用。方法 :通过电刺激离体海马脑片 CA3区的 Schaffer侧支 ,记录 CA1区锥体细胞层的顺向群峰电位 (orthodromic population spikes,OPS) ,观察藏药合剂对缺血状态下 OPS的影响。结果 :藏药合剂组用药后 OPS恢复程度为 (6 4 .0± 19.5 ) % ,明显高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :在离体海马脑片模拟缺血损伤的研究中 ,藏药合剂对缺氧缺血性脑损伤有保护作用 ,而且效果较好。

银杏内酯对大鼠海马脑片缺血性损伤的保护作用

目的 :研究银杏内酯对海马脑片缺血性损伤的保护作用及其与剂量的关系。方法 :电刺激离体海马脑片诱发顺向群峰电位 (orthodromic population spikes,OPS)的方法 ,观察不同浓度的银杏内酯对缺血条件下 OPS变化的影响。结果 :银杏内酯 (37.5 mg/10 0 m l) OPS恢复幅度和恢复率分别为 (5 4 .8± 4 8.2 ) %、5 7.2 % ,与对照组相比差异有显著性 (P<0 .0 5 )。而且银杏内酯组 OPS恢复幅度与其浓度呈正相关。结论 :银杏内酯对海马脑片缺血性损伤具有保护作用 。

人参皂甙的抗鼠脑缺氧损伤作用

目的 用离体海马脑片缺氧实验 ,结合电生理学和超微结构两方面的变化 ,研究人参皂甙的抗脑缺氧作用。方法 (1)观察大鼠离体海马脑片缺氧条件下顺向群峰电位 (orthodromic populationspikes,OPS)的变化及人参茎叶总甙对它的影响 ;(2 )同时观察缺氧后海马脑片 CA1区锥体细胞层超微结构变化及人参茎叶总甙对它的影响。结果 (1)在对照组海马脑片 ,缺氧时缺氧损伤电位出现率为 71.4% ,缺氧后 OPS恢复率为 14.2 % ,恢复程度为 (2 4.8± 31.9) % ;而使用人参皂甙的海马脑片在缺氧前即见OPS减小 ,缺氧时未出现缺氧损伤电位 (hypoxic injury potential,HIP) ,缺氧后 OPS恢复率和恢复程度分别为 10 0 %及 (10 9.5± 37.3) %。与对照组比较均有显著性差异。 (2 )电镜观察显示 ,缺氧组海马脑片的神经细胞呈变性至坏死等不同程度的损伤 ,而人参皂甙组脑片神经细胞与正常细胞相似 ,损伤较轻 ,突触结构清晰 ,兴奋性神经递质小泡无明显耗竭。结论 (1)人参皂甙有明显的抗缺氧脑损伤作用 ;(2 )人参皂甙抗脑缺氧作用机制可能是 :降低神经元兴奋性 ,减少能耗 ,并保护线粒体 ,以维持胞内 ATP水平 ;抑制兴奋性神经递质释放 ,减轻其兴奋毒性。

人参皂甙Rh2抗海马脑片H_2O_2损伤作用及与GABAA受体的关系

目的:研究人参皂甙Rh2对H_2O_2损伤保护作用及与GABAA受体的关系。方法:采用小鼠制备离体海马脑片,随机分为正常组、模型组、GABA组、人参皂甙Rh2(20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L)组、荷包牡丹碱组、荷包牡丹碱+人参皂甙Rh2组,每组20张脑片。采用碘化丙啶(PI)染色法测定H_2O_2损伤后海马CA1区细胞活力变化,免疫组化方法观察细胞色素C表达,电生理技术记录顺向群峰电位(OPS)观察突触传递变化。结果:人参皂甙Rh2(40μmol/L、60μmol/L)可明显提高H_2O_2损伤后海马CA1区细胞活力,降低海马CA1区细胞色素C表达,海马脑片OPS恢复率和OPS恢复程度亦明显提高。人参皂甙Rh2的保护作用和外源性GABA作用相似并可被GABAA受体抑制剂荷包牡丹碱所阻断。结论:人参皂甙Rh2可减轻H_2O_2对海马CA1区细胞损伤,促进神经元突触传递功能的恢复,其作用机制与激活GABAA受体而减少细胞色素C的释放有关。

二甲亚砜对大鼠海马脑片谷氨酸毒性损伤的影响

目的 观察二甲亚砜 (DMSO)对大鼠海马脑片谷氨酸 (Glu)兴奋性毒性损伤的影响 ,以探讨其保护作用与剂量的关系。方法 在离体海马脑片灌流液中加入 Glu造成兴奋性毒性损伤 ,用电生理记录技术观察不同浓度的 DMSO对海马脑片顺向群峰电位 (OPS)的影响。结果 去除 Glu 1h后 ,DM-SO (0 .0 7mol/ L )组 OPS恢复幅度和恢复率分别为 (88.2± 2 2 .9) % ,83.3% ,与对照组相比差异有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ,而且 DMSO组 OPS恢复幅度具有剂量依赖性。结论 DMSO具有抗谷氨酸兴奋性神经毒性作用 ,且这一作用与所用剂量有关。

丙泊酚抗N-甲基-D-天冬氨酸毒性作用及其与脑源性神经营养因子表达的关系

目的研究丙泊酚对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)毒性损伤的保护作用及其机制。方法采用昆明小鼠制备离体海马脑片,随机分为对照组、损伤组和丙泊酚组(1、5、10μmol/L),每组10张脑片。2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色法测定NMDA毒性损伤后脑片组织损伤率。细胞外记录技术观察顺向群峰电位(OPS)的变化。免疫组织化学方法观察海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的变化。结果与损伤组比较,丙泊酚(5、10μmol/L)可明显减轻NMDA造成的脑片组织损伤(P<0.01),提高海马脑片OPS恢复程度(P<0.01),明显增强BDNF表达(P<0.05或P<0.01)。结论丙泊酚可通过增强BDNF的表达,减轻细胞损伤,促进神经元突触传递功能的恢复。