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LncRNA NEAT1抑制细胞焦亡促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化
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作者 依力哈木·阿里木 马曙涛 +1 位作者 邓力军 韩亚军 《局解手术学杂志》 2024年第7期623-629,共7页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核旁斑组装转录本1(NEAT1)通过调节细胞焦亡调控人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的作用。方法培养hBMSCs 7 d诱导细胞成骨分化,并分为对照组(常规培养)、成骨分化组(成骨分化诱导)、pcD-NEAT1组(转染N... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核旁斑组装转录本1(NEAT1)通过调节细胞焦亡调控人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的作用。方法培养hBMSCs 7 d诱导细胞成骨分化,并分为对照组(常规培养)、成骨分化组(成骨分化诱导)、pcD-NEAT1组(转染NEAT1过表达质粒)、pcD-null组(转染NEAT1过表达质粒阴性对照)、成骨分化+CML组[成骨分化诱导联合NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性小体激活剂(Nε)-羧甲基赖氨酸(CML)处理]、成骨分化+CML+pcD-NEAT1组(成骨分化诱导联合pcD-NEAT1与CML处理)。经茜素红染色检测细胞矿化程度;碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测ALP活性;CCK-8检测各组细胞存活率,高倍镜下观察细胞形态变化。TUNEL实验检测细胞凋亡率。qRT-PCR检测NEAT1的表达。Western blot检测IL-1β、IL-18、NLRP3、cleaved-caspase 1(cleaved-CASP1)、gasdermin D、Runt-相关转录因子2(RUNX2)、ALP、骨桥蛋白(OPN)的表达。结果与对照组比较,成骨分化组细胞的矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),NEAT1和RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均上调(P<0.05)。与pcD-null组比较,pcD-NEAT1组细胞的矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),NEAT1和RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均上调(P<0.05)。与成骨分化组比较,成骨分化+CML组细胞矿化程度减轻,ALP活性降低(P<0.05),细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞膜出现破裂,细胞膨大变形,NLRP3和IL-1β、IL-18、cleaved-CASP1、gasdermin D蛋白表达均显著上调(P<0.05),而RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均显著下调(P<0.05)。与成骨分化+CML组比较,成骨分化+CML+pcD-NEAT1组细胞矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均显著上调(P<0.05),细胞存活率增加(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞膜较完整且细胞形态正常,NLRP3和IL-1β、IL-18、cleaved-CASP1、gasdermin D蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论NEAT1过表达通过抑制NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡促进hBMSCs的成骨分化。 展开更多
关键词 lncRNA NEAT1 细胞焦亡 NLRP3炎性小体 人骨髓间充质干细胞 成骨分化
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METTL7A通过m6A甲基化调控牙髓干细胞的衰老和成骨/成牙分化 被引量:1
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作者 王宁 马华瑞 +1 位作者 苏丽 余日月 《口腔生物医学》 2024年第1期26-31,共6页
目的:探索甲基转移酶样7A(METTL7A)通过N6-甲基腺苷(m6A)甲基化对牙髓干细胞(DPSCs)衰老和成骨/成牙分化的影响。方法:利用慢病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定敲低的DPSCs,利用逆转录病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定过表达的DPSCs,实时荧光定... 目的:探索甲基转移酶样7A(METTL7A)通过N6-甲基腺苷(m6A)甲基化对牙髓干细胞(DPSCs)衰老和成骨/成牙分化的影响。方法:利用慢病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定敲低的DPSCs,利用逆转录病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定过表达的DPSCs,实时荧光定量PCR和Western blot实验检测敲低及过表达效率。在此基础上,利用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色及定量检测METTL7A是否调控DPSCs的衰老,斑点杂交实验检测METTL7A是否调控DPSCs的m6A甲基化水平。METTL7A过表达组加入m6A甲基化抑制剂环亮氨酸(Cyc)后,利用SA-β-gal染色及定量检测和碱性磷酸酶(ALP)活性实验检测METTL7A通过m6A甲基化调控DPSCs的衰老和成骨/成牙分化。结果:利用慢病毒转染DPSCs,与对照组(Consh)相比,METTL7A基因和蛋白在METTL7A敲低组(METTL7Ash)的表达显著降低(P<0.01),METTL7Ash组的SA-β-gal染色及定量检测发现阳性细胞数量增加(P<0.05);利用逆转录病毒转染DPSCs,与对照组(Vector)相比,METTL7A在METTL7A过表达(HA-METTL7A)组的表达显著增加(P<0.01),HA-METTL7A组的SA-β-gal染色及定量检测显示阳性细胞数量减少(P<0.01)。此外,相比于Consh组,METTL7Ash组DPSCs的m6A甲基化修饰水平显著降低,而过表达METTL7A组DPSCs的m6A甲基化修饰水平明显升高。在此基础上,在METTL7A过表达组加入Cyc,SA-β-gal染色及其定量检测显著增加因METTL7A过表达而减少的阳性细胞数量(P<0.01),同时也显著抑制因METTL7A过表达促进的ALP活性(P<0.05)。结论:METTL7A可能通过调控m6A甲基化水平抑制DPSCs的衰老并促进其成骨/成牙分化。 展开更多
关键词 METTL7A m6A甲基化 牙髓干细胞 衰老 成骨/成牙分化
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伴骨和软骨分化的转移性黑色素瘤一例 被引量:2
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作者 熊斯莉 孙珊珊 +1 位作者 张玲 张淑坤 《中国麻风皮肤病杂志》 2023年第7期505-507,共3页
伴骨和软骨分化的转移性黑色素瘤极为罕见,易误诊为肉瘤。本文报告一例42岁男性患者,因左足拇趾甲癣病史3年,甲板剥脱1年,甲床增生、渗血半年于2017年12月进行左足拇趾甲床清创术,病理诊断为恶性黑色素瘤。随后行左足拇趾截趾术、大剂... 伴骨和软骨分化的转移性黑色素瘤极为罕见,易误诊为肉瘤。本文报告一例42岁男性患者,因左足拇趾甲癣病史3年,甲板剥脱1年,甲床增生、渗血半年于2017年12月进行左足拇趾甲床清创术,病理诊断为恶性黑色素瘤。随后行左足拇趾截趾术、大剂量干扰素和PD-1免疫治疗,但效果欠佳,多次转移,其中腹股沟结节经组织病理学诊断为转移性黑色素瘤伴骨和软骨分化,最终患者死亡。 展开更多
关键词 黑色素瘤 骨和软骨分化 病理诊断
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黄芩苷通过调节自噬在炎症牙髓中发挥抗炎及促进成牙/骨向分化作用的研究初探
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作者 王宇萌 李梦圆 +3 位作者 徐青清 张悦蓉 江飞 张光东 《口腔生物医学》 2023年第2期97-104,共8页
目的:初步探讨黄芩苷(BA)在炎症牙髓中发挥抗炎及促进成牙/骨分化作用机制。方法:用酶消化法分离提取牙髓干细胞(DPSCs),CCK-8检测不同浓度BA对DPSCs与单核-巨噬细胞(THP-1)细胞活力的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测及染色筛选BA促进... 目的:初步探讨黄芩苷(BA)在炎症牙髓中发挥抗炎及促进成牙/骨分化作用机制。方法:用酶消化法分离提取牙髓干细胞(DPSCs),CCK-8检测不同浓度BA对DPSCs与单核-巨噬细胞(THP-1)细胞活力的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测及染色筛选BA促进DPSCs表达ALP活性的最佳浓度;用脂多糖(LPS)构建体外炎性微环境,采用实时荧光定量PCR、Western blot检测BA对DPSCs成牙/骨向分化相关蛋白和基因表达水平变化,采用免疫荧光染色、Western bolt检测细胞自噬相关蛋白泛素结合蛋白(p62)和微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)的表达水平。诱导THP-1成炎症状态的M1,采用实时荧光定量PCR检测BA对其白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。结果:当浓度≤30μmol/L时,BA对DPSCs的增殖无明显抑制(P>0.05),0~100μmol/L浓度的BA对THP-1细胞增殖无影响(P>0.05)。经10μmol/L BA处理LPS刺激后的DPSCs,其ALP活性增加最明显(P<0.01),牙本质涎蛋白(DSP)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子OSX、骨钙素(OCN)蛋白和基因的表达均上调(P<0.05),自噬相关蛋白p62下调,微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)表达上调(P<0.01)。LPS可增加THP-1中IL-1β、TNF-α、iNOS的表达(P<0.01),而10μmol/L BA处理后上述指标均下调(P<0.05)。结论:BA可能通过调节细胞自噬在炎症牙髓细胞中发挥抗炎作用,并促进其成牙/骨向分化。 展开更多
关键词 黄芩苷 牙髓干细胞 巨噬细胞 炎症 自噬 成牙/骨分化
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Sustained release of Semaphorin 3A from a-tricalcium phosphate based cement composite contributes to osteoblastic differentiation of MC3T3-E1 cells 被引量:1
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作者 Jin-Ning WANG Bin PI Peng WANG Xue-Feng LI Hui-Lin YANG Xue-Song ZHU 《Frontiers of Materials Science》 SCIE CSCD 2015年第3期282-292,共11页
The reinforcement of calcium phosphate materials with silk fibroin (SF) has been one of the strategies to overcome the brittleness. However, the lack of osteoinductivity may still restrict their further use. This st... The reinforcement of calcium phosphate materials with silk fibroin (SF) has been one of the strategies to overcome the brittleness. However, the lack of osteoinductivity may still restrict their further use. This study aimed to investigate the biocompatibility and osteogenesis capacity of a novel Semaphorin 3A-loaded chitosan microspheres/SF/a-tricalcium phosphate composite (Sema3A CMs/SF/a-TCP) in vitro. Sema3A was first incorporated into CMs, and the Sema3A CMs/SF/a-TCP composite was then prepared. The morphology of the CMs was observed using SEM. The in vitro release kinetics, cytotoxicity, and cell compatibility were evaluated, and the real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) and activity of alkaline phosphatase (ALP) were used to evaluate the osteogenesis capacity of the composite. The in vitro release of Sema3A from the Sema3A CMs/SF/a-TCP composite showed a temporally controlled manner. The extract of the Sema3A CMs/SF/a-TCP composite presented no obvious side effect on the MC3T3-E1 cell proliferation, nor promote cell proliferation. The MC3T3-E1 cells were well-spread and presented an elongated shape on the Sema3A CMs/SF/a-TCP composite surface; the ALP activity and the osteogenic-related gene expression were higher than those seeded on the surface of the CMs/SF/a-TCP and SF/a-TCP composites. In conclusion, Sema3A CMslSF/a-TCP has excellent biocompatibility and contributes to the osteoblastic differentiation of MC3T3-E1 cells. 展开更多
关键词 α-tricalcium phosphate (o-TCP) silk fibroin (SF) Semaphorin 3A osteo-blastic differentiation MC3T3-EI cell
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miRNA在人骨髓来源间充质干细胞成骨诱导分化过程中的表达 被引量:5
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作者 高杰 关凯 +2 位作者 孙天胜 杨彤涛 马保安 《科学技术与工程》 北大核心 2014年第2期67-71,共5页
观察miRNAs在人骨髓来源间充质干细胞成骨诱导分化过程中的表达情况。以从骨髓中分离培养的MSCs及成骨诱导培养后的细胞为实验对象,利用基因芯片检测miRNAs的表达情况,由SAM分析得到MSCs较其诱导培养细胞中差异表达的miRNAs,再进行生物... 观察miRNAs在人骨髓来源间充质干细胞成骨诱导分化过程中的表达情况。以从骨髓中分离培养的MSCs及成骨诱导培养后的细胞为实验对象,利用基因芯片检测miRNAs的表达情况,由SAM分析得到MSCs较其诱导培养细胞中差异表达的miRNAs,再进行生物信息学分析。分离培养出的MSCs经成骨诱导培养14 d后,已具有成骨细胞特性;经芯片检测并SAM分析,成骨诱导培养的细胞较MSCs高表达的miRNAs有7个:hsa-miR-363*、hsa-miR-483、hsa-miR-590、hsa-miR-130a、hsa-miR-15b、hsa-miR-30c、hsa-miR-663;成骨诱导培养的细胞较MSCs低表达的miRNAs有6个:hsa-miR-192、hsa-miR-210、hsa-miR-128a、hsa-miR-224、hsa-miR-106a、hsa-miR-494。利用TargetScan预测其靶基因,并行生物信息学分析,其中hsa-miR-130a、hsa-miR-15b和hsa-miR-30c的预测靶基因多为维持干细胞特性的基因;而hsa-miR-106a和hsa-miR-494的预测靶基因多为参与骨形成及成骨分化的基因。为证明miRNAs参与调控MSCs的成骨分化过程提供了直接证据和研究基础。 展开更多
关键词 间充质干细胞 成骨分化 MICRORNA
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miR-92b-3p促进人脐带间充质干细胞的成骨分化 被引量:3
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作者 张燕 严冰浩 +3 位作者 徐辰 顾道兰 王越 刘厚奇 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第5期598-603,共6页
目的探究miR-92b-3p在人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)成骨分化过程中的作用及其作用机制。方法通过转染h UCMSCs过表达或抑制miR-92b-3p,qRT-PCR检测各组成骨相关基因OCN、RUNX2、OSTERIX mRNA表达以明确miR-92b-3p对h UCMSCs成骨分化的... 目的探究miR-92b-3p在人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)成骨分化过程中的作用及其作用机制。方法通过转染h UCMSCs过表达或抑制miR-92b-3p,qRT-PCR检测各组成骨相关基因OCN、RUNX2、OSTERIX mRNA表达以明确miR-92b-3p对h UCMSCs成骨分化的体外调控作用,用茜素红染色比较各处理组的骨化能力。通过生物信息学分析miR-92b-3p可能的靶基因,并通过双荧光素酶基因报告系统以及Western blot验证。结果 miR-92b-3p在h UCMSCs成骨过程中表达量较对照组明显升高(P<0.05);过表达miR-92b-3p能促进h UCMSCs体外成骨分化及体内的异位成骨能力(P<0.05);而抑制miR-92b-3p则能降低h UCMSCs体外成骨分化(P<0.05)。过表达miR-92b-3p能显著降低DKK1的表达量(P<0.05),抑制则能明显提高DKK1的表达(P<0.05)。结论 miR-92b-3p可通过抑制DKK1表达,促进h UCMSCs成骨分化。 展开更多
关键词 miR-92b-3p 人脐带间充质干细胞(hUCMSCs) 成骨分化 DKK1
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1α,25-二羟维生素D_3对成骨细胞增殖分化和OPG mRNA/RANKL mRNA表达的影响 被引量:5
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作者 沈小辉 杨菲 +4 位作者 李功波 梁晓翠 谢龙宇 陈筱诗 唐文娟 《海南医学》 CAS 2014年第1期5-9,共5页
目的研究1α,25-二羟维生素D3[1α,25-(OH)2D3]对体外培育SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、分化和细胞核因子κ配体(RANKL)及骨保素(OPG)mRNA表达的影响。方法采用胰蛋白酶和胶原酶消化法从24 h新生SD乳鼠颅盖骨分离得到的OB,经1 nmol/L、10 nm... 目的研究1α,25-二羟维生素D3[1α,25-(OH)2D3]对体外培育SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、分化和细胞核因子κ配体(RANKL)及骨保素(OPG)mRNA表达的影响。方法采用胰蛋白酶和胶原酶消化法从24 h新生SD乳鼠颅盖骨分离得到的OB,经1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L的1α,25-(OH)2D3干预24 h、48 h和72 h后,MTT比色法检测OB增殖率;PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;应用RT-PCR法检测细胞中OPG和RANKL的mRNA表达。结果 1 nmol/L组成骨细胞A值在干预24 h、48 h、72 h后,分别为(0.335±0.080)、(0.451±0.086)、(0.545±0.085);100 nmol/L组OB ALP活性分别增加至(6.274±1.561)U/g、(5.021±1.703)U/g、(6.854±1.468)U/g;OPG mRNA表达分别降低至(0.365±0.068)、(0.340±0.046)、(0.381±0.051);RANKL mRNA表达分别增加至(0.622±0.089)、(0.550±0.064)、(0.468±0.062);与0 nmol/L组比较,RANKL/OPG比值分别增加138.53%、153.45%、157.71%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度1α,25-(OH)2D3可抑制OB增值和OPG mRNA表达,促进其分化和矿化,上调RANKL/OPG的基因表达,从而促进破骨细胞介导的骨吸收,增强骨更新。 展开更多
关键词 25一二羟维生素D3 成骨细胞 增殖分化 细胞核因子K配体 骨保素
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Wnt/β-catenin信号通路介导糖基化终未产物对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 被引量:6
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作者 高飞 武珈宇 +4 位作者 张燕 陈坤 高虹 杨静 霍建忠 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2020年第1期34-40,共7页
目的探讨糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增生及成骨分化的影响及可能机制.方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs.将BMSCs... 目的探讨糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增生及成骨分化的影响及可能机制.方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs.将BMSCs随机分为成骨诱导液、BSA组、AGEs3组,Western blot法检测AGEs对BMSCs成骨分化过程中β-catenin、OSX、RUNX2、RAGE(AGE受体)蛋白表达量的影响,茜素红染色观察AGEs对BMSCs成骨分化过程中矿化的影响.抑制RAGE后实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluo-rescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot法再次测定上述指标水平.结果0.2 g/L AGEs作用于体外培养SD大鼠BMSCs,上调RAGE蛋白表达(0.88±0.04),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达降低(分别为0.21±0.02,0.25±0.03和0.21±0.01,P<0.05).RAGE中和抗体阻断RAGE作用后,AGE+RAGE中和抗体组RAGE蛋白表达下调(0.30±0.03),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达增高(0.90±0.02,0.84±0.03和0.88±0.02,P<0.05).结论AGEs通过Wnt/β-catenin信号通路抑制BMSCs成骨分化. 展开更多
关键词 WNT/Β-CATENIN 糖基化终末产物 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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肺癌患者血清ODF和OCIF水平与骨转移的相关性研究 被引量:2
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作者 李莉 刘志武 +2 位作者 谭榜云 陈明 张艺 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期898-901,共4页
目的:探讨检测破骨细胞分化因子(osteoclast differentiation factor,ODF)和破骨细胞生成抑制因子(osteo-clastogenesis inhibitory factor,OCIF)对肺癌骨转移诊断及病情评价的临床价值。方法:分析2009年7月至2012年4月186例初诊为肺癌... 目的:探讨检测破骨细胞分化因子(osteoclast differentiation factor,ODF)和破骨细胞生成抑制因子(osteo-clastogenesis inhibitory factor,OCIF)对肺癌骨转移诊断及病情评价的临床价值。方法:分析2009年7月至2012年4月186例初诊为肺癌患者的资料。肺癌骨转移组和非骨转移组分别为104例和82例,采用ELISA法测定各组血清ODF和OCIF浓度。结果:骨转移组患者血清ODF和OCIF分别为(32.22±6.22)ng/L、(41.23±8.13)ng/L,明显高于非骨转移组的(8.35±5.42)ng/L、(10.15±4.42)ng/L,有显著性差异(P<0.01)。ODF和OCIF诊断肺癌骨转移ROC曲线下面积分别为0.91和0.87,具有良好的诊断价值。诊断肺癌骨转移的灵敏度、特异度,ODF分别为90.38%、86.59%;OCIF分别为86.54%、84.15%。ODF随骨转移部位数量增加而明显升高,OCIF随骨转移部位数量增加而明显降低。新发骨转移组和骨转移组血清ODF和OCIF浓度均显著高于非骨转移组,有显著性差异(P<0.01);新发骨转移组血清ODF和OCIF浓度与骨转移组比较,两组间无显著性差异(P>0.05)。结论:肺癌患者发生骨转移时,血清和含量明显增高,可作为判断肺癌患者骨转移及监测病情的参考指标,在临床上有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 破骨细胞分化因子 破骨细胞生成抑制因子 肺癌 骨转移
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氯化锂介导经典Wnt/β-catenin信号通路在大鼠脂肪干细胞增殖和成骨中的作用 被引量:5
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作者 赵璇 徐燕 +1 位作者 郑桂婷 沈继龙 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第5期590-594,共5页
目的探讨在体外生长环境下不同浓度氯化锂对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的机制。方法①从3周龄SD大鼠腹股沟脂垫分离出脂肪组织,使用0.1%Ⅰ型胶原酶消化后置于含10%胎牛血清DMEM培养,以0、2.5、5、10、20、40 mmol/... 目的探讨在体外生长环境下不同浓度氯化锂对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的机制。方法①从3周龄SD大鼠腹股沟脂垫分离出脂肪组织,使用0.1%Ⅰ型胶原酶消化后置于含10%胎牛血清DMEM培养,以0、2.5、5、10、20、40 mmol/L浓度的氯化锂作用ADSCs24、48、72 h,用MTT法测定氯化锂对细胞增殖的作用;②ADSCs加入含0、2.5、5、10、20、40 mmol/L氯化锂的成骨培养液中培养7 d后测定细胞中碱性磷酸酶(AKP)的活性;③用RT-PCR法检测成骨诱导3 d后,不同浓度氯化锂作用7 d时ADSCs中β-catenin、糖原合成激酶3β、AKP的表达。结果在体外环境培养下,低浓度氯化锂(2.5、5、10 mmol/L)促进干细胞增殖,高浓度氯化锂(20、40 mmol/L)抑制细胞增殖。5、10 mmol/L氯化锂促进ADSCs中AKP的活性,但是40 mmol/L具有明显抑制AKP活性的作用。同时,氯化锂能上调β-catenin和AKP的表达。结论氯化锂在体外对大鼠ADSCs增殖有双重影响,并且促进AKP活性和ADSCs成骨分化,具有剂量依赖性。5 mmol/L浓度的氯化锂可作为促进大鼠ADSCs增殖和成骨分化的最适浓度。 展开更多
关键词 WNT信号通路 脂肪干细胞 氯化锂 增殖 成骨分化
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大鼠脂肪间充质干细胞的分化潜能鉴定及XIAP基因修饰 被引量:1
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作者 白耀邦 李博 +2 位作者 陈庆良 姜楠 陈晓波 《天津医药》 CAS 北大核心 2013年第8期799-801,I0003,共4页
目的分离培养扩增大鼠脂肪源间充质干细胞(ADSCs),以活体标记并鉴定其分化潜能,了解ADSCs的X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因修饰的可行性。方法无菌条件下取大鼠一侧腹股沟脂肪组织,Ⅰ型胶原酶消化法分离培养ADSCs,胰酶消化法传代扩增。检... 目的分离培养扩增大鼠脂肪源间充质干细胞(ADSCs),以活体标记并鉴定其分化潜能,了解ADSCs的X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因修饰的可行性。方法无菌条件下取大鼠一侧腹股沟脂肪组织,Ⅰ型胶原酶消化法分离培养ADSCs,胰酶消化法传代扩增。检测细胞分化为脂肪细胞、软骨细胞及成骨细胞的潜能,转染XIAP表达质粒进入ADSCs,通过Western blotting等方法检测XIAP的表达能力。结果 ADSCs呈长梭形漩涡样生长,细胞流式鉴定显示CD29、CD44、CD90、CD105均呈高表达,并在特定诱导剂下分化为脂肪细胞、软骨细胞或成骨细胞。XIAP转染后显像经XIAP基因修饰的脂肪间充质干细胞在PVDF膜的相应分子质量区域出现相应的条带。结论脂肪源干细胞易于培养和传代扩增,并可活体标记,具有多向分化潜能,可作为组织工程的种子细胞。 展开更多
关键词 间质干细胞 脂肪组织 X连锁凋亡抑制蛋白质 软骨细胞 成骨细胞 细胞分化 大鼠 WISTAR
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丹参注射液促进人脱落乳牙牙髓干细胞成骨/成牙分化的实验研究 被引量:4
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作者 高润涛 范志朋 《北京口腔医学》 CAS 2018年第2期65-68,共4页
目的探讨中药丹参对人脱落乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨/成牙分化功能的影响。方法利用50mg/ml的丹参注射液作用于SHEDs细胞,利用成骨/成牙分化诱导培养基诱导SHEDs定向分化。通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨/成牙分... 目的探讨中药丹参对人脱落乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨/成牙分化功能的影响。方法利用50mg/ml的丹参注射液作用于SHEDs细胞,利用成骨/成牙分化诱导培养基诱导SHEDs定向分化。通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨/成牙分化相关基因的表达研究SHEDs体外成骨/成牙分化能力。Western Blot检测AKT信号分子的表达。结果 50mg/ml的丹参注射液促进SHEDs细胞ALP活性,体外矿化能力及成骨/成牙分化相关基因骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)的表达。50mg/ml的丹参注射液促进磷酸化AKT的表达。结论 50mg/ml的丹参注射液具有促进SHEDs细胞体外成骨/成牙分化的潜能,其作用可能与激活AKT信号通路相关。 展开更多
关键词 脱落乳牙牙髓干细胞 丹参 成骨/成牙分化
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OFCD牙根过度发育机制初探 被引量:3
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作者 王赛楠 曹灵 +3 位作者 于金华 张光东 汤春波 周国兴 《口腔生物医学》 2011年第2期71-74,共4页
目的:初步探讨眼面心牙综合症(oculo-facio-cardio-dentalsyndrome,OFCD)患者牙根过度发育的机制。方法:分别取OFCD患者和正常人根尖牙乳头干细胞,通过MTT法检测增殖能力、碱性磷酸酶(alka line phosphatase,ALP)试剂盒法检测ALP活性、W... 目的:初步探讨眼面心牙综合症(oculo-facio-cardio-dentalsyndrome,OFCD)患者牙根过度发育的机制。方法:分别取OFCD患者和正常人根尖牙乳头干细胞,通过MTT法检测增殖能力、碱性磷酸酶(alka line phosphatase,ALP)试剂盒法检测ALP活性、Western Blot检测牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)和核心结合因子(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达量。结果:OFCD患者根尖牙乳头干细胞的增殖活性、ALP活性、DSP和Runx2蛋白表达量均高于正常人来源的根尖牙乳头干细胞。结论:根尖牙乳头干细胞的增殖及成牙成骨能力增强可能是导致OFCD患者牙根过度发育的原因。 展开更多
关键词 OFCD 根尖牙乳头干细胞 增殖能力 成牙成骨能力
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纳米αFe2O3对牙髓干细胞增殖及骨向分化和矿化能力的影响
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作者 夏阳 陈慧敏 +3 位作者 胡姝颖 孙剑飞 章非敏 顾宁 《东南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第1期165-169,共5页
对纳米αFe_2O_3进行二巯基丁二酸表面修饰,采用透射电子显微镜(TEM)观察其形貌,利用振动样品磁强计(VSM)检测其磁学性能.配置含纳米αFe_2O_3浓度为10μg/m L的培养基培养牙髓干细胞,以不添加纳米αFe_2O_3的培养基为对照组.采用荧光... 对纳米αFe_2O_3进行二巯基丁二酸表面修饰,采用透射电子显微镜(TEM)观察其形貌,利用振动样品磁强计(VSM)检测其磁学性能.配置含纳米αFe_2O_3浓度为10μg/m L的培养基培养牙髓干细胞,以不添加纳米αFe_2O_3的培养基为对照组.采用荧光显微镜观察纳米αFe_2O_3组与常规培养基组的细胞形态,以CCK-8检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞ALP活性,并进行茜素红染色以检验其矿化能力.结果表明,所用纳米αFe_2O_3为棒状,尺寸约10nm×90 nm,VSM结果显示其没有磁性.纳米αFe_2O_3培养基中牙髓干细胞的形态和增殖情况与常规培养基中情况没有差异,但是碱性磷酸酶活性和矿化能力则显著提高(p<0.05).由此说明,纳米αFe_2O_3对牙髓干细胞的形态和增殖没有影响,但却会促进其向成骨方向分化. 展开更多
关键词 纳米αFe2O3 牙髓干细胞 增殖 骨向分化
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不同发育阶段的人牙周膜干细胞增殖能力和成牙/成骨能力的比较研究 被引量:6
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作者 束丽红 曹灵 +3 位作者 闫明 李俊俊 张光东 于金华 《口腔生物医学》 2013年第2期65-69,共5页
目的:初步比较人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cell,PDLSC)在牙根不同发育阶段时的增殖能力和成牙/成骨能力的差异,为组织工程化牙齿的种子细胞来源提供一定的实验基础。方法:分别分离培养来自人根尖孔未闭合及根尖孔... 目的:初步比较人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cell,PDLSC)在牙根不同发育阶段时的增殖能力和成牙/成骨能力的差异,为组织工程化牙齿的种子细胞来源提供一定的实验基础。方法:分别分离培养来自人根尖孔未闭合及根尖孔完全闭合牙齿的PDLSC,通过MTT法检测其增殖能力,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒法检测其ALP活性,茜素红染色法检测两者的体外矿化能力,Western blot检测其牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)、核心结合因子(runt-related transcription factor 2,RUNX2)和骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)的蛋白表达情况。结果:来自人根尖孔未闭合牙的PDLSC的增殖活性、ALP活性和矿化能力、DMP1、RUNX2、DSP和OSX蛋白的表达量均高于根尖孔完全闭合牙的PDLSC,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:PDLSC的增殖和成牙/成骨能力随着牙根发育阶段的不同而变化,随着牙根发育的完全,PDLSC的增殖能力和成牙/成骨能力均下降,这种影响可能是由于牙根不同发育阶段牙根周围微环境的变化而导致的。 展开更多
关键词 牙根发育 牙周膜干细胞 增殖能力 成牙 成骨分化
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通过骨基质表面培养板检测RANKL诱导破骨细胞骨侵蚀能力 被引量:1
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作者 陈武桂 孙靖 +5 位作者 李松涛 杨思振 张莹 胡旭 廖通权 初同伟 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期162-165,共4页
目的探讨以骨基质表面培养板替代骨磨片鉴定破骨细胞骨侵蚀能力的应用方法。方法通过RANKL诱导破骨前体细胞RAW264. 7建立破骨细胞分化模型,运用TRAP染色检测破骨细胞分化程度,并以骨基质表面培养板替代骨磨片行骨陷窝试验检测破骨细胞... 目的探讨以骨基质表面培养板替代骨磨片鉴定破骨细胞骨侵蚀能力的应用方法。方法通过RANKL诱导破骨前体细胞RAW264. 7建立破骨细胞分化模型,运用TRAP染色检测破骨细胞分化程度,并以骨基质表面培养板替代骨磨片行骨陷窝试验检测破骨细胞骨侵蚀能力,以侵蚀面积反映骨侵蚀能力。结果不同浓度的RANKL因子可有效诱导破骨前体细胞RAW264. 7分化为成熟多核破骨细胞,呈浓度依赖性。成熟破骨细胞在骨基质表面培养板上形成不同面积的不规则侵蚀圆环,趋势与破骨细胞分化程度一致。结论使用骨基质表面培养板可有效反映破骨细胞形成及骨侵蚀能力,与TRAP染色结果一致,并且具有操作简便、结果直观、便于统计分析等优点。 展开更多
关键词 RANKL 破骨细胞 分化 骨基质表面培养板 骨侵蚀实验
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静态牵张力对人炎症牙周膜干细胞成骨分化及细胞骨架重组的影响 被引量:1
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作者 赵艳 王佳帅 +3 位作者 郭冬会 高洁 何晓天 金作林 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2017年第4期183-188,共6页
目的:探究静态牵张力(SMS)对人炎症来源的牙周膜干细胞(PPDLSCs)的成骨分化能力及细胞骨架重组的影响。方法:体外培养PPDLSCs,用FX-T4000力学加载系统对PPDLSCs体外施加力值为12%、频率为0.1 Hz的静态牵张力,加载12 h后(对照组不加力),... 目的:探究静态牵张力(SMS)对人炎症来源的牙周膜干细胞(PPDLSCs)的成骨分化能力及细胞骨架重组的影响。方法:体外培养PPDLSCs,用FX-T4000力学加载系统对PPDLSCs体外施加力值为12%、频率为0.1 Hz的静态牵张力,加载12 h后(对照组不加力),分别通过ALP染色、茜素红染色检测其成骨分化能力;倒置显微镜观察细胞的形态变化;免疫荧光染色和共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变;Western blot法检测ALP、RUNX2、ROCK1、p-cofilin、Rho-GDIα、Rho-A蛋白的表达水平。结果:实验组PPDLSCs的矿化结节形成量明显减少;细胞骨架弹力纤维的形成受到抑制;ALP、RUNX2、ROCK1、cofilin、Rho-A蛋白表达水平下降,p-cofilin、Rho-GDIα蛋白的表达水平则升高(P<0.05)。结论:12%静态牵张力抑制PPDLSCs成骨分化和细胞骨架的重组。 展开更多
关键词 炎症牙周膜干细胞 细胞骨架 成骨分化 静态牵张力
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基于OPG/RANKL/RANK信号通路探究骨髓间充质干细胞移植治疗骨质疏松的机制研究 被引量:1
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作者 侯睿 田振川 +1 位作者 杨志海 张瑞光 《临床口腔医学杂志》 2023年第7期391-396,共6页
目的:基于OPG/RANKL/RANK信号通路探究骨髓间充质干细胞治疗骨质疏松的机制。方法:分离骨髓间充质干细胞(bone mesenchymals cells,BMSCs);按照随机数字表法将40大鼠分为假手术组(sham组)、骨质疏松大鼠模型组(OP组)、骨质疏松大鼠给予B... 目的:基于OPG/RANKL/RANK信号通路探究骨髓间充质干细胞治疗骨质疏松的机制。方法:分离骨髓间充质干细胞(bone mesenchymals cells,BMSCs);按照随机数字表法将40大鼠分为假手术组(sham组)、骨质疏松大鼠模型组(OP组)、骨质疏松大鼠给予BMSCs干预组(BMSCs组)、BMSCs组基础上给予si⁃OPG干预组(BMSCs+si⁃OPG组),每组10只。ELISA检测血清中BALP、TRACP⁃5b含量及雌激素水平;Micro⁃CT检测股骨颈骨密度;RT⁃PCR检测股骨组织中RUNX2、OCN mRNA表达;蛋白质印迹法检测股骨组织中OPG、RANK、RANKL蛋白表达。结果:BMSCs表面间充质干细胞标志物CD90、CD29表达升高,造血干细胞标志物CD45、CD34呈极低表达,保留了间充质干细胞的活性。各组大鼠干预前体质量相比无明显差异(P>0.05);干预后相比较,与sham组相比,OP组大鼠体质量、TRACP⁃5b含量、Tb.Sp增加,子宫质量、血清中BALP含量、雌激素水平、Tb.N、Tb.Th、BV/TV减少(P<0.05);与OP组相比,BMSCs组大鼠体质量、TRACP⁃5b含量、Tb.Sp降低,子宫质量、血清中BALP含量、雌激素水平、Tb.N、Tb.Th、BV/TV升高(P<0.05);BMSCs+si⁃OPG组大鼠体质量高于BMSCs组,子宫质量低于BMSCs组(P<0.05)。与sham组相比,OP组大鼠股骨组织中RUNX2、OCN mRNA及OPG蛋白表达降低,RANK和RANKL蛋白表达增加(P<0.05);与OP组相比,BMSCs组RUNX2、OCN mRNA及OPG蛋白表达增加,RANK和RANKL蛋白表达减少(P<0.05);BMSCs+si⁃OPG组RUNX2、OCN mRNA及OPG蛋白表达低于BMSCs组,RANK和RANKL蛋白表达高于BMSCs组(P<0.05)。结论:骨髓间充质干细胞可通过成骨分化缓解骨质疏松,其作用机制可能与激活OPG/RANK/RANKL信号通路有关。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 骨质疏松 OPG/RANK/RANKL信号通路 成骨分化
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三维联合培养牙髓细胞和血管内皮祖细胞促进成牙本质向/成骨向分化 被引量:1
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作者 陈婷 侯晋 +3 位作者 李心竹 宋词 张雪洋 吴补领 《现代生物医学进展》 CAS 2019年第16期3028-3032,3054,共6页
目的:探讨三维联合培养牙髓细胞(dental pulp cells, DPCs)和血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)对成牙本质向/成骨向分化的影响。方法:取单独培养DPCs及联合培养的DPCs和EPCs进行三维培养后成牙本质向/成骨向诱导,使... 目的:探讨三维联合培养牙髓细胞(dental pulp cells, DPCs)和血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)对成牙本质向/成骨向分化的影响。方法:取单独培养DPCs及联合培养的DPCs和EPCs进行三维培养后成牙本质向/成骨向诱导,使用茜素红染色及半定量分析、RT-PCR和细胞免疫荧光检测成牙本质向/成骨向分化能力。采用SPSS 23.0统计软件对数据进行统计学分析。结果:茜素红染色显示联合培养组和单独培养组之间未见显著差异。RT-PCR和细胞免疫荧光显示成牙本质向/成骨向相关基因m RNAs和蛋白表达水平联合培养组显著高于单独培养组。结论:三维联合培养的DPCs和EPCs促进成牙本质向/成骨向分化,为牙髓再生提供可能实验依据。 展开更多
关键词 牙髓细胞 血管内皮祖细胞 三维联合培养 成牙本质向/成骨向分化
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