体外诱导条件下大鼠骨髓基质细胞骨钙素和Ⅰ型胶原mRNA的表达

目的 研究体外培养大鼠骨髓基质细胞诱导条件下 ,成骨分化标志骨钙素和 型胶原 m RNA水平的表达。方法 采用成骨诱导剂 (含地塞米松 10 - 8mol/ L、β甘油磷酸钠 10 mm ol/ L和抗坏血酸 AA 5 0μg/ml)对培养状态下的不同代大鼠骨髓基质细胞进行成骨诱导 ,提取 RNA,采用 RT- PCR方法 ,以β-肌动蛋白 c DNA为内参照 ,检测骨钙素和 型胶原 m RNA的表达。结果 与对照组相比 ,接受成骨诱导剂作用的大鼠骨髓基质细胞随诱导时间的延长骨钙素和 型胶原 m RNA出现高表达 ,且维生素 D为诱导骨钙素 m RNA表达的必需成分。结论 体外培养的大鼠骨髓基质细胞保持成骨未分化状态 ,无骨钙素和 型胶原 m RNA的表达 ,诱导后可向成骨分化 ,骨钙素和 型胶原 m

釉基质蛋白体外诱导大鼠外胚间充质细胞骨桥素和骨钙素mRNA的表达

目的 :了解体外培养环境中 ,大鼠外胚间充质细胞在两种不同形式釉基质蛋白 (粗提型EMPs及纯化型EMD)诱导条件下 ,成骨分化标志骨桥素及骨钙素mRNA的表达水平。方法 :酶消化法原代培养SD大鼠颌突外胚间充质细胞 ,在含釉基质蛋白 (EMPs或EMD或EMPs +EMD)的培养液中进行体外诱导培养 ,提取总RNA ,采用RT -PCR法 ,以β -actincDNA为内参照 ,检测骨桥素及骨钙素mRNA的表达水平。结果 :1)各诱导实验组细胞均出现骨桥素mRNA的表达 ;2 )仅EMPs+EMD组出现骨钙素mRNA的表达。结论 :外胚间充质细胞经釉基质蛋白特别是粗提型EMPs及纯化型EMD体外复合和诱导培养 ,可向成骨或成牙骨质方向分化 。

特发性脊柱侧凸患者髂骨松质骨中Ⅰ型胶原、骨钙素和骨保护素等mRNA的表达

目的探讨青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)女性患者骨组织中I型胶原、骨钙素和骨保护素mRNA含量的变化与骨量减低之间的关系。方法43例AIS女性患者,年龄12～18岁。Cobb角范围40°～105°,平均50.3°±12.8°。将所有AIS患者分为两组:A组为骨量正常患者,B组为骨量减低患者。运用RT-PCR方法检测术中取髂骨松质骨块中I型胶原、骨钙素和骨保护素mRNA的表达。结果本组病例中骨量正常者(A组)29例,而骨量减低者(B组)14例(32.6%)。两组患者的生长发育相关资料等无显著性差异。两组患者间骨钙素和骨保护素mRNA的相对含量无显著性差异,而A组患者I型胶原mRNA的相对含量高于B组患者,但无统计学意义(F=1.761,P=0.196)。相关分析显示全部患者的I型胶原相对含量与BMD值之间呈较弱的正相关性,骨钙素和骨保护素与BMD值无显著相关性。结论本组病例AIS女性患者的松质骨中I型胶原、骨钙素和骨保护素等的mRNA表达量与骨量减低缺乏显著关联。不过,AIS女性患者的骨量减低与松质骨中I型胶原含量之间的关系难以排除。

不同浓度地塞米松对成骨细胞骨钙素基因表达和细胞增殖的影响

目的:研究不同浓度地塞米松对成骨细胞骨钙素基因表达和细胞增殖的影响。方法:从新生SD大鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,随机分为4组,A组加入1×10-7mol/L地塞米松;B组加入5×10-8mol/L地塞米松;C组加入1×10-8mol/L地塞米松;D组作为空白对照。96h后提取细胞RNA,RT-PCR一步法分析成骨细胞骨钙素mRNA表达,放射免疫法测定细胞培养上清液中骨钙素含量,MTT法测定成骨细胞增殖率。结果:A组、B组、C组与D组细胞骨钙素基因表达比值分别为0.359±0.026、0.386±0.017、0.447±0.024、0.414±0.013,4组之间差异均有显著性意义,A组低于D组(P<0.01),B组低于D组(P<0.01),C组高于D组(P<0.01)。A组、B组、C组与D组细胞培养上清液中骨钙素含量分别为2.635±0.218、2.860±0.093、3.447±0.024、3.168±0.335ng/ml,4组之间差异均有显著性意义,A组低于D组(P<0.01),B组低于D组(P<0.01),C组高于D组(P<0.01)。4组细胞增殖率之间差异均有显著性意义,A组低于D组(P<0.01),B组低于D组(P<0.05),C组高于D组(P<0.01)。结论:1×10-8mol/L的地塞米松促进成骨细胞骨钙素基因表达和细胞增殖,5×10-8mol/L和1×10-7mol/L的地塞米松则抑制成骨细胞骨钙素基因表达和细胞增殖。

金刚石涂膜材料对成骨细胞骨钙素表达的影响

目的:探讨不同种植材料表面成骨细胞的功能状态。方法:用Wistar大鼠颅顶骨建立体外培养成骨细胞模型,将第三代成骨细胞接种到金刚石涂膜(CVD)、羟基磷灰石(HA)、纯钛(Ti)3种种植材料表面,通过反转录聚合酶链式扩增方法测定成骨细胞骨钙素mRNA。结果:CVD表面的成骨细胞骨钙素mRNA表达比HA出现早,Ti表面未见骨钙素mRNA表达。结论:CVD表面骨钙素的早期表达,推测其有成骨功能,适合成骨细胞生长。

金刚石涂膜种植材料骨界面区骨钙素mRNA表达

目的:探讨骨组织形成过程中骨钙素表达规律,评价金刚石-钛涂膜,纯钛和羟基磷灰石三种材料植入界面骨细胞功能情况,以利筛选出新的种植材料。方法:本实验将金刚石-钛涂膜、纯钛和羟基磷灰石三种种植材料,植入鼠下颌骨内,进行骨界面骨钙素mRNA检测及骨钙素免疫组织化学染色。结果:金刚石-钛涂膜材料新骨生成启动早,能明显加快组织的骨性愈合;金刚石和羟基磷灰石种植材料骨钙素mRNA表达量明显大于纯钛(P<0.01)。结论:骨钙素mRNA表达与界面区细胞增殖、新骨形成有关;骨钙素mRNA的检测有助于界面区细胞功能状态的判断。